趙雪超，韓 佳，郭 波，童東東，王曉霏，趙凌宇(西安市北方醫(yī)院康復(fù)科，西安 70043;西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)與分子生物學(xué)系;通訊作者，E-mail:lingyuzhao@aliyun.com)

神經(jīng)祖細(xì)胞(neural precursor cells，NPCs)具有自我更新、不斷增殖及多向分化潛能的生物學(xué)特性［1］。NPCs存在于哺乳動(dòng)物發(fā)育期和成熟期的中樞神經(jīng)系統(tǒng)(central nervous system，CNS)中［2］。目前，NPCs已經(jīng)被研究用來(lái)治療帕金森氏病、Huntington病、缺血性中風(fēng)、脫髓鞘病及腦、脊髓損傷等CNS疾病，NPCs治療已經(jīng)被廣泛認(rèn)為能改善腦缺血、神經(jīng)損傷和神經(jīng)變性紊亂疾病后的神經(jīng)功能［3，4］。在NPCs替代治療過(guò)程中，基因調(diào)控對(duì)NPCs的增殖起著非常重要的作用。因此，闡明NPCs增殖的分子機(jī)制在修復(fù)神經(jīng)系統(tǒng)損傷和治療神經(jīng)退行性疾病方面有非常重要的作用。

研究報(bào)道，谷氨酸可能通過(guò)代謝型谷氨酸受體(metabotropic glutamate receptors，mGluRs)調(diào)控腦損傷后的神經(jīng)發(fā)生［5］。mGluRs包括8種成員，分別是mGluR1－8，分為三組，其中 mGluR5屬于Ⅰ組mGluRs。Castiglione等［6］研究報(bào)道，mGluR5 可促進(jìn)成年側(cè)腦室下區(qū)(subventricular zone，SVZ)的NPCs存活和增殖。2－甲基－6－(苯乙炔)吡啶鹽酸鹽［6－methyl－2－(phenylethynyl)pyridine hydrochloride，MPEP］是一個(gè)非競(jìng)爭(zhēng)性的mGluR5拮抗劑，為研究不同疾病動(dòng)物模型提供了一個(gè)有效的選擇性的系統(tǒng)的活性化合物，它可以抑制 mGluR5 的激活［6，7］。NPCs的增殖和分化受到多個(gè)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的調(diào)控，RAS MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路就參與了NSCs的增殖和分化過(guò)程。ERK，JNK和 p38 MAPKs是主要的MAPK家族成員，它們?cè)贑NS發(fā)育和分化過(guò)程中扮演著重要的角色［8］。本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用mGluR5的特異性拮抗劑MPEP，分析MPEP對(duì)大鼠 NPCs增殖的影響，觀察ERK，JNK和p38 MAPKs信號(hào)通路激活的變化，探討MPEP抑制大鼠NPCs增殖的分子機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

Sprague－Dawley(SD)大鼠由西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。孕鼠飼養(yǎng)至受孕后15 d，分離胚胎鼠，進(jìn)行大鼠胚胎NPCs培養(yǎng)。

1.2 主要試劑

DMEM/F12(1∶1)培養(yǎng)基、N2 添加劑、B27 添加劑、堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(bFGF)購(gòu)于美國(guó)Gibco公司;MPEP、表皮生長(zhǎng)因子(EGF)、肝素、MTT、RnaseA、胰蛋白酶、碘化丙啶(PI)購(gòu)于美國(guó)Sigma公司;AnnexinⅤ－FITC凋亡試劑盒購(gòu)于美國(guó)BD Bioscience公司;兔抗大鼠ERK1/2多克隆抗體、兔抗大鼠P-ERK 1/2多克隆抗體、小鼠抗大鼠JNK2單克隆抗體、小鼠抗大鼠P-JNK單克隆抗體、小鼠抗大鼠p38單克隆抗體、兔抗大鼠P－p38單克隆抗體均購(gòu)于美國(guó)Cell Signaling公司;ECL化學(xué)發(fā)光底物試劑盒購(gòu)于美國(guó)Pierce公司;RIPA裂解液購(gòu)于碧云天公司。

1.3 主要儀器

二氧化碳培養(yǎng)箱Galaxy S(英國(guó)RS Biotech公司);高通量多功能微板測(cè)試系統(tǒng)(德國(guó) BMG Labtechnologies公司);倒置相差顯微鏡(日本OLYMPUS公司);低速離心機(jī)TDL－5(上海安亭科學(xué)儀器廠);FASCalibar流式細(xì)胞儀(美國(guó) FALS CALIBAR BD公司);GBOX－HR全自動(dòng)凝膠成像分析系統(tǒng)(英國(guó)SYNGENE公司);濕法蛋白電轉(zhuǎn)印系統(tǒng)DYCZ－40D(北京六一儀器廠);水平電泳儀DYCZ－31N(北京六一儀器廠);垂直電泳系統(tǒng)SE260(美國(guó)Amersham公司)。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法

1.4.1 大鼠胚胎皮質(zhì)NPCs的分離和培養(yǎng) 取孕15 d大鼠，麻醉，取出胚胎，將分離的腦組織移到基礎(chǔ)培養(yǎng)基(DMEM/F12)中;剝離腦膜，分離大腦皮質(zhì)，然后用基礎(chǔ)培養(yǎng)基洗滌2次;將分離的大腦皮質(zhì)快速剪50次，使組織分散為小塊，移入消化液中，置入37℃培養(yǎng)箱，消化細(xì)胞5 min;加入胰蛋白酶抑制劑終止消化，用吸管吹打100－150次，使組織分散為單細(xì)胞;用200目篩網(wǎng)過(guò)濾;將獲得的細(xì)胞懸液移至離心管中，800 r/min離心5 min，棄掉上清液;再用基礎(chǔ)培養(yǎng)基洗細(xì)胞1次;用完全培養(yǎng)基(DMEM/F12基礎(chǔ)培養(yǎng)基中加入20 ng/ml EGF，10 ng/ml bFGF，1 × B27 supplement，1 × N2 supplement，100 U/ml鏈霉素，100 U/ml青霉素，0.4 U/ml肝素)重懸細(xì)胞;將細(xì)胞密度調(diào)節(jié)為1×105/ml，按照4 ml/瓶將細(xì)胞種入T50培養(yǎng)瓶中，置入37℃，5%CO2孵箱中培養(yǎng)，第2天每瓶細(xì)胞補(bǔ)加1 ml完全培養(yǎng)基，培養(yǎng)5－7 d后傳代培養(yǎng)(本研究所用的NPCs均為傳1代的細(xì)胞)。

1.4.2 MTT比色法檢測(cè)MPEP對(duì)大鼠NPCs增殖的影響 將傳1代的NPCs按照約20 000個(gè)/孔種入96孔板中，每孔為200 μl的單細(xì)胞懸液，正常培養(yǎng)2 d后加藥物干預(yù)。實(shí)驗(yàn)分組:對(duì)照、MPEP(1 μmol/L)、MPEP(10 μmol/L)和 MPEP(100 μmol/L)組。加入藥物后繼續(xù)分別培養(yǎng)1，2，3 d。培養(yǎng)細(xì)胞在收獲前4 h，每孔加入20 μl MTT(5 mg/ml)溶液，使MTT的終濃度為0.5 mg/ml，然后繼續(xù)于孵箱中培養(yǎng)至收獲時(shí)間。1 000 r/min離心5 min棄去培養(yǎng)上清液，再加入150 μl DMSO，震蕩5 min，促使結(jié)紫色晶充分溶解。在POLARstar+OPTIMA微板測(cè)試儀上檢測(cè)光吸收值，檢測(cè)波長(zhǎng)為490 nm。

1.4.3 測(cè)量神經(jīng)球直徑分析MPEP對(duì)大鼠 NPCs神經(jīng)球增長(zhǎng)的影響 將傳1代的NPCs按照約20 000個(gè)/孔種入96孔板中，每孔為200 μl的單細(xì)胞懸液，放入37℃，5%CO2孵箱中培養(yǎng)2 d后加藥物干預(yù)。實(shí)驗(yàn)分組同上。加入藥物后繼續(xù)分別培養(yǎng)1，2，3 d。培養(yǎng)細(xì)胞在各時(shí)間點(diǎn)時(shí)，利用倒置相差顯微鏡，在200倍鏡下每孔按時(shí)鐘的3點(diǎn)、6點(diǎn)、9點(diǎn)、12點(diǎn)和圓心5個(gè)方位選取5個(gè)視野，用Image-Pro Express(IPP)圖像分析軟件照相并分析比較各組神經(jīng)球直徑的變化。

1.4.4 流式細(xì)胞儀檢測(cè)MPEP對(duì)大鼠NPCs細(xì)胞周期的影響 將傳1代的NPCs按照約200 000個(gè)/孔種入6孔板中，每孔為2 ml的單細(xì)胞懸液，培養(yǎng)2 d后加藥物干預(yù)。實(shí)驗(yàn)分組:對(duì)照組、MPEP(100 μmol/L)組。加入藥物后繼續(xù)培養(yǎng)2 d后，收集各組神經(jīng)球，用復(fù)合消化液消化，300目篩網(wǎng)過(guò)濾，收集單細(xì)胞懸液;800 r/min離心8 min，棄上清，PBS洗滌1次;加入250 μl PBS以重懸細(xì)胞，再逐滴加入750 μl無(wú)水乙醇并同時(shí)不斷搖動(dòng)離心管，從而使酒精濃度緩慢上升，其終濃度為75%，放置4℃過(guò)夜固定;PBS洗滌1次;加入濃度為100 μg/ml的無(wú)DNase的RNaseA 0.5 ml，重懸細(xì)胞;再加入濃度為100 μg/ml PI染液 0.5 ml，混合均勻，室溫下避光孵育15 min;用流式細(xì)胞儀(FACS)檢測(cè)，每個(gè)樣品檢測(cè)細(xì)胞數(shù)量為2×104個(gè)，激發(fā)波長(zhǎng)為488 nm，PI的紅色熒光通過(guò)630 nm的濾光片收集，用BD FACSort Cell Quest軟件獲取數(shù)據(jù)，最后用Modfit LT軟件分析DNA的含量變化。

1.4.5 AnnexinⅤ －PI法檢測(cè) MPEP對(duì)大鼠 NPCs細(xì)胞凋亡的影響 傳1代的NPCs按照約200 000個(gè)/孔種入6孔板中，培養(yǎng)2 d后加藥物干預(yù)(MPEP 100 μmol/L)，繼續(xù)培養(yǎng)2 d后，消化，制備成單細(xì)胞懸液，PBS洗滌2次。用250 μ1結(jié)合緩沖液重新懸浮細(xì)胞，使其濃度為1×105/ml。加100 μ1的細(xì)胞懸液入5 ml流式管中，每管加入5 μ1 AnnexinⅤ/FITC 和 5 μ1 20 μg/ml的碘化丙錠，避光混勻，標(biāo)記15 min。在流式管中加入400 μ1 PBS。用流式細(xì)胞儀(FACS)檢測(cè)，光源為488 nm氬離子激光器，F(xiàn)ITC受激發(fā)后發(fā)綠色熒光，PI發(fā)紅色熒光，結(jié)果用隨機(jī)軟件分析。

1.4.6 免疫蛋白印跡 (Western blot)分析 MPEP對(duì)MAPKs信號(hào)通路的影響 傳1代的NSCs培養(yǎng)1 d后，加藥物干預(yù)(MPEP 100 μmol/L)，繼續(xù)培養(yǎng)1 d，置入RIPA細(xì)胞裂解液中，低溫裂解細(xì)胞30 min，12 000 r/min，4℃離心15 min，取上清液。以BCA試劑盒檢測(cè)蛋白濃度。將蛋白煮沸變性。取50 μg總蛋白，在10%十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠(SDS-PAGE)電泳后，電轉(zhuǎn)移至硝酸纖維素膜上，依分子量大小切取條帶，加入封閉液室溫下震蕩2 h后，取相應(yīng)條帶分別加入兔抗大鼠ERK1/2多克隆抗體(1∶1 000稀釋)、兔抗大鼠P-ERK 1/2多克隆抗體(1∶1 000稀釋)、小鼠抗大鼠JNK2單克隆抗體(1∶1 000稀釋)、小鼠抗大鼠P-JNK2單克隆抗體(1∶1 000稀釋)、小鼠抗大鼠p38 MAPK單克隆抗體(1∶1 000稀釋)、兔抗大鼠P-p38 MAPK單克隆抗體(1∶1000稀釋)，4℃孵育過(guò)夜，TBST洗膜3次，10 min/次。然后與HRP標(biāo)記的羊抗兔/羊抗鼠二抗(1∶2 500稀釋)室溫孵育1 h，TBST洗膜3次，10 min/次。加入免疫印跡化學(xué)發(fā)光劑，置于Syngene G Box凝膠成像儀的暗箱中拍照。應(yīng)用英國(guó)SYNGENE公司的GeneTools軟件分析，計(jì)算條帶的積分光密度(optic density，OD)值，半定量分析。所有細(xì)胞實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，各組實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均以±s表示，用單因素方差分析(One-Way，ANOVA)進(jìn)行總體差異的檢驗(yàn)，應(yīng)用GraphPad Prism 5軟件進(jìn)行繪圖。以P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 MPEP對(duì)大鼠NPCs增殖的影響

應(yīng)用MTT比色法分析了mGluR5拮抗劑MPEP(1，10，100 μmol/L)分別在處理大鼠 NPCs 1，2，3 d后對(duì)細(xì)胞增殖活力的影響。與對(duì)照組比較，MPEP 100 μmol/L 分別在作用1，2，3 d 后降低了 NPCs增殖活力(P ＜0.01，圖 1);與1 μmol/L MPEP 組及10 μmol/L MPEP 組相比較，100 μmol/L MPEP 組 NPCs增殖活力顯著下降(均 P＜0.05);1 μmol/L MPEP組及10 μmol/L MPEP組與對(duì)照組之間無(wú)顯著差異。神經(jīng)球直徑測(cè)量結(jié)果顯示，100 μmol/L MPEP分別在作用1，2，3 d后神經(jīng)球的平均直徑依次為(48.65 ±4.12)μm，(61.39 ±5.23)μm，(74.96 ±5.79)μm，與對(duì)照組相比神經(jīng)球均顯著減小(P＜0.05，圖 2);與 1 μmol/L MPEP 組及 10 μmol/L MPEP組相比較，100 μmol/L MPEP組神經(jīng)球顯著減小(均P ＜0.05);1 μmol/L MPEP 組及10 μmol/L MPEP組與對(duì)照組之間無(wú)顯著差異。

2.2 MPEP對(duì)大鼠NPCs細(xì)胞周期的影響

圖1 MPEP對(duì)大鼠NPCs增殖的影響(MTT比色分析)Figure 1 Effect of MPEP on rat NPC proliferation by MTT assay

圖2 MPEP對(duì)大鼠神經(jīng)球增殖的影響(神經(jīng)球直徑測(cè)量)Figure 2 Effect of MPEP on rat neurosphere diameters

將培養(yǎng)的神經(jīng)球用藥物處理2d后，消化分散為單個(gè)細(xì)胞，應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期。mGluR5拮抗劑MPEP(100 μmol/L)組與對(duì)照組相比，G0/G1期細(xì)胞數(shù)量顯著增加(P＜0.01)，S期細(xì)胞數(shù)量顯著減少(P＜0.01)，G2/M期細(xì)胞數(shù)量也有減少，表明mGluR5拮抗劑MPEP將大鼠NPCs阻滯在G0/G1期，抑制了細(xì)胞進(jìn)入S期進(jìn)行DNA復(fù)制(見(jiàn)圖 3)。

圖3 MPEP對(duì)大鼠NPCs細(xì)胞周期的影響Figure 3 Effects of MPEP on cell cycle of rat NPCs

2.3 MPEP對(duì)大鼠NPCs凋亡的影響

培養(yǎng)的神經(jīng)球用藥物處理2 d后，消化分散為單個(gè)細(xì)胞，應(yīng)用AnnexinⅤ+PI試劑盒染色，流式細(xì)胞儀檢測(cè)分析。對(duì)照組正常細(xì)胞為(87.25±4.78)%，早期凋亡細(xì)胞為(6.46 ±1.89)%，晚期凋亡細(xì)胞為(3.37±1.55)%。與對(duì)照組相比，mGluR5拮抗劑MPEP組正常細(xì)胞顯著減少(P＜0.01)，為(60.78±4.22)%;早期凋亡細(xì)胞顯著增加(P＜0.01)，為(23.45 ±2.45)%;晚期凋亡細(xì)胞也明顯增加(P ＜0.01)，為(11.83 ±2.23)%;壞死細(xì)胞沒(méi)有顯著差異(見(jiàn)圖4)。

圖4 MPEP對(duì)大鼠NPCs凋亡的影響Figure 4 Effect of MPEP on apoptosis of rat NPCs

2.4 MPEP抑制大鼠NPCs MAPKs信號(hào)通路的激活

應(yīng)用Western blot分析MPEP對(duì)大鼠NPCs內(nèi)的MAPKs信號(hào)通路的3個(gè)主要成員ERK、JNK和p38的磷酸化激活的影響。結(jié)果顯示，體外培養(yǎng)的大鼠NPCs內(nèi)總的ERK、JNK和p38表達(dá)水平無(wú)顯著性差異(見(jiàn)圖5)。應(yīng)用P-ERK1/2比總ERK1/2、P-JNK2比總JNK2、P－p38比總p38光密度積分比值來(lái)表示ERK1/2、JNK2和p38激活的變化，達(dá)到了半定量分析的目的。結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，MPEP組的ERK1/2和JNK2的磷酸化水平顯著降低(P＜0.05)，但是p38的磷酸化水平顯著增高(P＜0.05，圖5)。

3 討論

mGluR5在調(diào)節(jié)成年人側(cè)腦室下區(qū)(SVZ)NPCs的存活和增殖中發(fā)揮著重要作用。研究報(bào)道，在大鼠胚胎期的所有腦區(qū)均有mGluR5蛋白表達(dá)，在出生后的腦部神經(jīng)發(fā)生區(qū)也有表達(dá)［9］。Di Giorgi Gerevini等［10］研究發(fā)現(xiàn)，mGluR5 在培養(yǎng)的小鼠 NPCs中有表達(dá)并且具有生物學(xué)活性，當(dāng)利用阻斷劑阻斷這兩種受體以后，結(jié)果發(fā)現(xiàn)NPCs的增殖與存活明顯減少，但是將mGluR5激活以后，能夠顯著地促進(jìn)細(xì)胞增殖。在基因敲除mGluR5的成年小鼠或利用阻斷劑阻斷mGluR5以后，在側(cè)腦室下區(qū)(SVZ)和齒狀回顆粒下層(SGZ)區(qū)域增殖的NPCs數(shù)量顯著降低。這些研究證明mGluR5能夠調(diào)控NPCs的存活與增殖。在本試驗(yàn)中，MPEP通過(guò)抑制mGluR5激活，降低了體外培養(yǎng)的大鼠NPCs的細(xì)胞活力和神經(jīng)球的大小，表明MPEP可顯著的抑制體外培養(yǎng)的大鼠胚胎皮質(zhì)NPCs增殖。

圖5 MPEP對(duì)大鼠NPCs的MAPKs信號(hào)通路磷酸化水平的影響(與對(duì)照組比較，*P＜0.01)Figure 5 Effects of MPEP on phosphorylated-MAPKs expression of rat NPCs(*P ＜0.01 vs control group)

細(xì)胞周期中從G1到S期的轉(zhuǎn)換是調(diào)節(jié)細(xì)胞周期的最主要作用節(jié)點(diǎn)，在細(xì)胞跨越G1/S節(jié)點(diǎn)后，細(xì)胞周期將依照細(xì)胞周期內(nèi)部的程序進(jìn)行，逐漸回到G1期前，在這個(gè)階段將不容易受到其他增殖調(diào)控因素的影響［11］。M期細(xì)胞的比例大小，可以表明處于增殖分裂期細(xì)胞的多少。S期細(xì)胞所占比例大小可以表明開(kāi)始新一輪DNA復(fù)制合成和分裂的細(xì)胞數(shù)量的多少。在正常培養(yǎng)的NPCs中，大部分細(xì)胞處于靜息期(約80%)，只有大約20%的細(xì)胞處于DNA復(fù)制合成期和分裂期。在 mGluR5拮抗劑MPEP處理NPCs后，細(xì)胞的DNA復(fù)制合成與細(xì)胞分裂顯著減少。因此，推測(cè)MPEP可能通過(guò)抑制mGluR5，影響NPCs的DNA復(fù)制合成與細(xì)胞分裂來(lái)抑制NPCs的增殖。

RAS-MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路涉及到多種生物學(xué)和生理學(xué)的進(jìn)程，例如細(xì)胞增殖、存活、凋亡、分化和轉(zhuǎn)化。ERK，JNK和p38 MAPKs是主要的MAPK家族成員，在CNS發(fā)育和分化過(guò)程中扮演著一個(gè)重要的角色［12］。據(jù)報(bào)道，mGluR Ⅰ組激動(dòng)劑3，5－ 二羥基苯甘氨酸(DHPG)可以刺激體外的皮質(zhì)神經(jīng)元的ERK1/2 的磷酸化激活［13］。Tian 等［14］報(bào)道激活mGluR7，可能通過(guò)影響RAS MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路磷酸化激活促進(jìn) NPCs增殖和分化。ERK是一個(gè)mGluR5的下游調(diào)節(jié)子［15］。ERK1/2級(jí)聯(lián)反應(yīng)在CNS結(jié)構(gòu)和功能改變過(guò)程中通過(guò)調(diào)節(jié)細(xì)胞活動(dòng)和基因轉(zhuǎn)錄來(lái)轉(zhuǎn)導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)和細(xì)胞外信號(hào)活動(dòng)［16］。有研究報(bào)道表明，JNK2也調(diào)節(jié)NPCs的增殖［17］。在本研究中，我們發(fā)現(xiàn)mGluR5的拮抗劑MPEP下調(diào)了體外培養(yǎng)的大鼠NPCs的p－ERK和p－JNK表達(dá)。因此，我們推測(cè)MPEP抑制 mGluR5后通過(guò)抑制ERK和JNK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路來(lái)抑制NPCs的增殖。有研究表明mGluR5的激活通過(guò)增加EGF受體酪氨酸自磷酸化致使EGF受體處于動(dòng)態(tài)的轉(zhuǎn)活狀態(tài)，這依次激活下游的信號(hào)通路進(jìn)而上調(diào)JNK的磷酸化［18］，這與我們的研究一致。

p38的磷酸化激活能夠誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，用p38的選擇性抑制劑SB203580能減少細(xì)胞的死亡［19］。Kim等［20］的研究表明p38 MAPK信號(hào)通路在NPCs增殖上起著負(fù)調(diào)節(jié)因子的作用。本研究中，用MPEP處理大鼠NPCs后，p38 MAPK的磷酸化水平上調(diào)，細(xì)胞凋亡增加。這些結(jié)果說(shuō)明mGluR5拮抗劑MPEP可以通過(guò)調(diào)節(jié)p38 MAPK信號(hào)通路的磷酸化水平增加大鼠胚胎皮質(zhì)NPCs的凋亡。

總之，mGluR5拮抗劑MPEP通過(guò)抑制ERK和JNK的磷酸化激活抑制體外培養(yǎng)的大鼠胚胎皮質(zhì)NPCs增殖，促進(jìn)了細(xì)胞凋亡。然而，關(guān)于mGluR5下游的級(jí)聯(lián)反應(yīng)是非常復(fù)雜的，需要進(jìn)一步探討mGluR5調(diào)控NPCs增殖的確切分子機(jī)制。

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