陳驕華，汪祖光，江玲興，黃傳俊

(1.湖北省陽(yáng)新縣人民醫(yī)院檢驗(yàn)科、藥劑科，陽(yáng)新 435200;2.湖北省鄂州市中心醫(yī)院藥學(xué)部，鄂州 436000;3.湖北省中醫(yī)院藥學(xué)部，武漢 430070)

二妙丸中蒼術(shù)素含量測(cè)定

陳驕華1，汪祖光1，江玲興2，黃傳俊3

(1.湖北省陽(yáng)新縣人民醫(yī)院檢驗(yàn)科、藥劑科，陽(yáng)新 435200;2.湖北省鄂州市中心醫(yī)院藥學(xué)部，鄂州 436000;3.湖北省中醫(yī)院藥學(xué)部，武漢 430070)

目的 建立測(cè)定二妙丸中蒼術(shù)素含量的反相高效液相色譜法。方法Agilent HC-C18Analytical(250 mm× 4.6 mm,5 μm)色譜柱;以乙腈和水梯度洗脫,流速為1.0 mL·min-1;檢測(cè)波長(zhǎng)340 nm;柱溫30℃;進(jìn)樣量10 μL。結(jié)果蒼術(shù)素在6.08～30.40 μg·mL-1濃度范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系,r=0.999 8,蒼術(shù)素平均回收率為99.6%,RSD= 1.9%(n=9)。結(jié)論該方法簡(jiǎn)便,準(zhǔn)確,重復(fù)性好,適用于二妙丸中蒼術(shù)素含量測(cè)定。

二妙丸；蒼術(shù)素；含量測(cè)定；色譜法,高效液相,反相

二妙丸收載于《中華人民共和國(guó)藥典》2010年版一部[1],主要由蒼術(shù)和黃柏兩味藥組成。是中醫(yī)燥濕清熱的基礎(chǔ)名方,主要用于治療濕熱下注、足膝紅腫熱痛、下肢丹毒、白帶、陰囊濕癢等病癥。在其藥品標(biāo)準(zhǔn)中僅采用薄層掃描色譜法測(cè)定黃柏中鹽酸小檗堿含量,國(guó)內(nèi)有文獻(xiàn)報(bào)道用高效液相色譜法測(cè)定該藥中鹽酸小檗堿和黃柏堿含量[2-3],而對(duì)于該藥中蒼術(shù)的反相高效液相色譜法測(cè)定含量筆者未見(jiàn)文獻(xiàn)報(bào)道。筆者在本實(shí)驗(yàn)中采用反相高效液相色譜梯度洗脫法測(cè)定二妙丸中蒼術(shù)素含量,該方法簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確,可用于二妙丸的質(zhì)量控制。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 戴安P680高效液相色譜儀,UVD170U檢測(cè)器(美國(guó)戴安公司),BS124S型電子天平(北京賽多利斯儀器有限公司,最小精度0.1 mg)。

1.2 試藥 蒼術(shù)素對(duì)照品(批號(hào):17-2001,上海標(biāo)準(zhǔn)化研究中心提供,含量:99.86%),二妙丸(湖南天濟(jì)草堂制藥有限公司,批準(zhǔn)文號(hào):國(guó)藥準(zhǔn)字Z20053512,規(guī)格:6g×20袋,批號(hào):10042213,10071205, 10080503)。乙腈(美國(guó)Fisher公司,色譜純)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱:Agilent HC-C18Analytical (250 mm×4.6 mm,5 μm),流動(dòng)相:以水-乙腈為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫(乙腈在0～5 min為30%→35%;在5～7 min由35%→55%;在7～30 min由55%→70%;在30～45 min由70%→75%,測(cè)定波長(zhǎng)為340 nm),流速:1.0 mL·min-1;柱溫30℃;進(jìn)樣量:10 μL。在該色譜條件下,蒼術(shù)素和相鄰峰的分離度均＞1.5,理論板數(shù)按蒼術(shù)素峰計(jì)算為9 800。

2.2 溶液的制備

2.2.1 蒼術(shù)素對(duì)照品儲(chǔ)備溶液 取蒼術(shù)素對(duì)照品精密稱定15.2 mg,置100 mL量瓶,加甲醇稀釋至刻度,搖勻。

2.2.2 供試品溶液 取本品研細(xì),取二妙丸細(xì)粉2 g精密稱定,加甲醇100 mL超聲提取30 min,移至100 mL量瓶,定容至刻度,搖勻,濾過(guò),取續(xù)濾液,即得。

2.2.3 陰性對(duì)照溶液 取缺蒼術(shù)的樣品,按本品制備工藝,制得陰性樣品,精密稱取陰性樣品1 g,同供試品溶液制備方法制得陰性對(duì)照溶液。

2.3 線性關(guān)系考察 精密量取蒼術(shù)素對(duì)照品儲(chǔ)備溶液2,3,5,8,10 mL置50 mL量瓶,用甲醇稀釋至刻度,搖勻,制得系列對(duì)照品溶液。精密吸取系列對(duì)照品儲(chǔ)備溶液各20 μL注入液相色譜儀,以蒼術(shù)素對(duì)照品濃度(μg·mL-1)為橫坐標(biāo)(X),其峰面積為縱坐標(biāo)(Y),進(jìn)行線性回歸,蒼術(shù)素標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸方程為:Y= 2 130.4X+105.3,r=0.999 8。結(jié)果表明,蒼術(shù)素濃度在6.08～30.40 μg·mL-1內(nèi)與峰面積有良好的線性關(guān)系。

2.4 精密度實(shí)驗(yàn) 取同一份蒼術(shù)素對(duì)照品溶液,按含量測(cè)定方法精密吸取10 μL注入液相色譜儀,重復(fù)進(jìn)樣5次,測(cè)定峰面積值,蒼術(shù)素峰面積的RSD為0.75%。結(jié)果表明該法精密度良好。

2.5 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 依法取同一供試品溶液,分別于1,2,4,6,8 h測(cè)定蒼術(shù)素峰面積,結(jié)果峰面積測(cè)定值基本不變,蒼術(shù)素峰面積RSD分別為0.93%,說(shuō)明供試品溶液在8 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.6 重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 取同一樣品(批號(hào):10042213),按“2. 2.2”項(xiàng)制備方法平行制備5份供試品溶液,依法測(cè)定峰面積,結(jié)果每克樣品中蒼術(shù)素0.62 mg,RSD為1.0%。表明該方法具有較好的重復(fù)性。

2.7 回收率實(shí)驗(yàn) 取已測(cè)含量的二妙丸(批號(hào): 10042213)約1 g,分別精密加入蒼術(shù)素對(duì)照品儲(chǔ)備溶液4,5,6 mL,按供試品溶液制備方法操作,在上述色譜條件下測(cè)定含量,計(jì)算回收率,結(jié)果見(jiàn)表1。蒼術(shù)素平均回收率99.6%,RSD=1.9%。

表1 蒼術(shù)素回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果 mg

2.8 樣品的含量測(cè)定 取3批樣品(批號(hào):10042213, 10071205,10080503)按“2.2.2”項(xiàng)制備方法制備供試品溶液,精密吸取20 μL注入液相色譜儀,記錄峰面積。另取蒼術(shù)素對(duì)照品溶液,同法測(cè)定,按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算二妙丸樣品中蒼術(shù)素含量。結(jié)果3批樣品中蒼術(shù)素平均含量分別為0.62,0.58,0.68 mg·g-1, RSD分別為1.0%,1.4%,0.9%。

3 討論

在選擇流動(dòng)相過(guò)程中,筆者曾采取甲醇-水、乙腈-水等度系統(tǒng),但分離效果均不理想。經(jīng)反復(fù)實(shí)驗(yàn)后,發(fā)現(xiàn)以乙腈和水梯度洗脫時(shí),能使蒼術(shù)素和相鄰物質(zhì)得到滿意分離,保留時(shí)間合適,故擇選乙腈和水梯度洗脫。

通過(guò)對(duì)樣品提取方法進(jìn)行考察,分別考查了超聲處理與加熱回流兩種提取方式。結(jié)果顯示,分別采用沸水浴上加熱回流1 h、超聲處理1 h、超聲處理30 min,3種提取方法結(jié)果相差不大(RSD=1.2%),故選擇超聲處理30 min。

[1] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(一部)[M].北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,2010:414.

[2] 張麗,潘超.高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定二妙丸中鹽酸小檗堿和黃柏堿的含量[J].中國(guó)新藥雜志,2011,20(22): 2262-2264.

[3] 蔡俊安.高效液相色譜法測(cè)定二妙丸中鹽酸小檗堿的含量[J].中國(guó)中醫(yī)藥信息雜志,2011,18(1):55-56.

DOI 10.3870/yydb.2014.03.031

R286;R927.1

A

1004-0781(2014)03-0380-02

2013-06-08

2013-07-20

陳驕華(1975-),女,湖北陽(yáng)新人,主管技師,研究方向:臨床檢驗(yàn)和含量檢測(cè)。電話:0714-7323372,E-mail：811405618@qq.com。

汪祖光,男,湖北陽(yáng)新人,副主任藥師,研究方向:臨床藥學(xué)和藥物分析。電話:0714-7323372,E-mail：wangzuguang@sina.com。