劉紅淼，李艷玲，楊繼章，姜少灝

[1.河北醫(yī)科大學(xué)第一醫(yī)院藥劑科，石家莊 050031;2.石藥集團(tuán)中奇制藥技術(shù)(石家莊)有限公司，石家莊050051;3.河北醫(yī)科大學(xué)，石家莊 050017]

香桂化濁膠囊藥效學(xué)研究*

劉紅淼1，李艷玲2，楊繼章1，姜少灝3

[1.河北醫(yī)科大學(xué)第一醫(yī)院藥劑科，石家莊 050031;2.石藥集團(tuán)中奇制藥技術(shù)(石家莊)有限公司，石家莊050051;3.河北醫(yī)科大學(xué)，石家莊 050017]

目的 研究香桂化濁膠囊藥效學(xué)。方法采用體外抗真菌實(shí)驗(yàn)觀察香桂化濁膠囊抗真菌作用,采用蓖麻油致小鼠腹瀉及小腸炭末模型觀察香桂化濁膠囊止瀉作用;采用角叉菜膠致大鼠足跖腫脹、大鼠棉球肉芽腫模型觀察香桂化濁膠囊抗炎作用;采用干酵母致大鼠發(fā)熱模型觀察香桂化濁膠囊解熱作用。結(jié)果香桂化濁膠囊能明顯抑制臨床株白念珠菌、熱帶念珠菌、克柔念珠菌和標(biāo)準(zhǔn)株白念珠菌、熱帶念珠菌、克柔念珠菌、煙曲霉菌、黃曲霉菌等的生長(zhǎng),可顯著減少蓖麻油所致小鼠腹瀉稀便灘數(shù)和排稀便動(dòng)物數(shù)(P＜0.01),對(duì)小鼠小腸推進(jìn)率延緩作用顯著(P＜0.01),對(duì)角叉菜膠所致大鼠足跖急性炎癥腫脹有明顯抑制作用(P＜0.05,P＜0.01),對(duì)大鼠棉球肉芽腫增生無(wú)顯著影響;可顯著降低酵母所致大鼠體溫升高(P＜0.05,P＜0.01)。結(jié)論香桂化濁膠囊體外對(duì)臨床株白念珠菌、熱帶念珠菌、克柔念珠菌,以及標(biāo)準(zhǔn)株煙曲霉菌及黃曲霉菌均有很強(qiáng)的抗菌作用,且具有較好的的止瀉、抗炎、解熱等作用。

香桂化濁膠囊；抗真菌；止瀉；抗炎；解熱

香桂化濁膠囊處方為臨床應(yīng)用多年的經(jīng)驗(yàn)方,由廣藿香、土大黃、肉桂等組成,具有芳香醒脾、清化濕濁之功效,主治各種疾病后邪留未盡、脾胃內(nèi)傷所致長(zhǎng)期大便溏泄或有黏液、腹脹腸鳴、納呆,或有低熱、舌苔白膩或白滑或見(jiàn)微黃,脈濡緩。主要用于慢性腸炎、真菌感染致腸炎證屬脾虛濕困的治療,療效確切。近年來(lái),該藥的制劑工藝、質(zhì)量控制和毒理學(xué)研究已有報(bào)道[1-6],為進(jìn)一步研究其臨床療效,筆者在本實(shí)驗(yàn)中對(duì)其進(jìn)行藥效學(xué)實(shí)驗(yàn),以期為臨床應(yīng)用提供藥理學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試藥 香桂化濁膠囊(河北醫(yī)科大學(xué)第一醫(yī)院,批號(hào):20110601),氟康唑膠囊(天津華津制藥有限公司,批號(hào):111202),醋酸潑尼松(山東新華制藥股份有限公司,批號(hào):1105242),復(fù)方地芬諾酯(北京雙鶴藥業(yè)股份有限公司,批號(hào):110105),阿司匹林(石家莊歐意藥業(yè)有限公司,批號(hào):110308),沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(中國(guó)食品藥品檢定研究院,批號(hào):110824)。

1.2 菌種 臨床分離菌株來(lái)自河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院皮膚科真菌室,均為致病性深部真菌(直接鏡檢可見(jiàn)大量菌絲,培養(yǎng)有念珠菌生長(zhǎng),經(jīng)河北醫(yī)科大學(xué)微生物教研室鑒定,為白念珠菌、熱帶念珠菌、克柔念珠菌)。標(biāo)準(zhǔn)菌株購(gòu)自中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院微生物所。

1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 昆明種小鼠(合格證號(hào):1104158),清潔級(jí)SD大鼠(合格證號(hào):1105075),均由河北醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供,實(shí)驗(yàn)動(dòng)物許可證號(hào):SYXK (冀)2008-0023。

1.4 體外抗真菌實(shí)驗(yàn)

1.4.1 藥基配制 采用試管內(nèi)藥基法,先將香桂化濁膠囊內(nèi)容物用5倍0.9%氯化鈉溶液在研缽內(nèi)研20 min,再與高壓滅菌后的沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基趁熱(液態(tài))充分混合,倍比稀釋成A(3.09 mg·mL-1)、B (1.545 mg·mL-1)、C(0.772mg·mL-1)、D (0.386 mg·mL-1)、E(0.193mg·mL-1)、F (0.096 mg·mL-1)、G(0.048 mg·mL-1)。氟康唑同上配制成A(2.0 mg·mL-1)、B(1.03 mg·mL-1)、C (0.515 mg·mL-1)、D(0.257mg·mL-1)、E (0.12 mg·mL-1)、F(0.064mg·mL-1)、G (0.032 mg·mL-1)濃度,分裝試管,置斜面。

1.4.2 菌種接種 挑取適量菌株,與0.9%氯化鈉溶液混合,將絲狀真菌置于研磨器中,與0.9%氯化鈉溶液混合研磨,使每亳升菌懸液含菌細(xì)胞1×105～1×106個(gè),每個(gè)試管內(nèi)接種菌懸液50 mL,每個(gè)濃度接種2管,同時(shí)用沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基作對(duì)照。置36℃恒溫箱,每天觀察生長(zhǎng)情況,分別于1,2,3周記錄,3周后最大稀釋度無(wú)菌落生長(zhǎng)為最小抑菌濃度(minimum inhibitory concentration,MIC)。

1.5 止瀉實(shí)驗(yàn)

1.5.1 對(duì)蓖麻油所致小鼠腹瀉的影響 取小鼠50只,雌雄兼用,體質(zhì)量20～24 g,隨機(jī)分為5組,每組10只。模型對(duì)照組(給予等容積純化水),香桂化濁膠囊低、中、高劑量組(1,2,4 g·kg-1),陽(yáng)性對(duì)照組(復(fù)方地芬諾酯0.05 g·kg-1)。均灌胃給藥,0.2 mL·(10 g)-1,qd,連續(xù)3 d。給藥后第2天禁食(不禁飲)12 h,第3天給藥后30 min,各組均灌胃給予蓖麻油0.15 mL,給蓖麻油后立即將小鼠單籠觀察,籠下墊一塊濾紙,每隔1 h換紙一次。計(jì)算小鼠每小時(shí)排稀便灘數(shù)和排稀便小鼠數(shù),記錄5 h。采用Ridit法和Χ2統(tǒng)計(jì)結(jié)果,比較各組不同時(shí)間稀便灘數(shù)和排稀便小鼠數(shù)。

1.5.2 對(duì)小鼠小腸炭末推進(jìn)速度的影響 取小鼠50只,體質(zhì)量20～24 g,雌雄各半,隨機(jī)分為5組,每組10只。即香桂化濁膠囊低、中、高劑量組(1,2, 4 g·kg-1),陽(yáng)性對(duì)照組(復(fù)方地芬諾酯, 50 mg·kg-1),模型對(duì)照組(給予等容積純化水),均灌胃給藥,0.2 mL·(10 g)-1,qd,連續(xù)3 d。末次給藥后30 min,每鼠灌胃給予5%炭末-10%阿拉伯膠混懸液0.1 mL·(10 g)-1,于給予炭末后30 min處死小鼠,剖腹,自賁門(mén)至直腸末端摘出整個(gè)胃腸道,不加牽引,平鋪于玻璃板,測(cè)量炭末前沿至幽門(mén)的距離和幽門(mén)至回盲部的距離(小腸全長(zhǎng))。計(jì)算炭末推進(jìn)率(%)。炭末推進(jìn)率(%)=(炭末前沿至幽門(mén)的距離/小腸全長(zhǎng))×100%。采用t檢驗(yàn)比較統(tǒng)計(jì)結(jié)果。

1.6 抗炎作用

1.6.1 對(duì)角叉菜膠所致大鼠足跖炎癥的影響 取大鼠50只,♂,體質(zhì)量200～240 g,隨機(jī)分為5組,每組10只,即香桂化濁膠囊低、中、高劑量組(0.5,1, 2 g·kg-1),陽(yáng)性對(duì)照組(醋酸潑尼松,20 mg·kg-1),模型對(duì)照組(給予等容積純化水),均灌胃給藥, 1 mL·(100 g)-1,qd,連續(xù)7 d。末次給藥后立即用足容積法測(cè)定大鼠左后足跖體積,1%角叉菜膠0.05 mL注射于左后足跖皮下以致炎,注射后1,2,4,6 h分別測(cè)量1次左后足跖體積,對(duì)統(tǒng)計(jì)結(jié)果進(jìn)行t檢驗(yàn)[7]。

1.6.2 對(duì)大鼠棉球肉芽腫增生的影響 取大鼠50只,♂,體質(zhì)量約150 g,戊巴比妥鈉淺麻醉,背位固定,下腹部去毛,常規(guī)皮膚消毒,下腹部正中切口,將兩個(gè)棉球(制備質(zhì)量為30 mg的棉球,大小松緊相近、高壓滅菌,每個(gè)棉球加入氨芐西林,1 mg∶0.1 mL,烤葙50℃烤干、備用)分別植入兩側(cè)腹股溝皮下,縫合切口。手術(shù)后當(dāng)天將大鼠隨機(jī)分為5組,每組10只,即香桂化濁膠囊低、中、高劑量組(0.5,1,2 g·kg-1),陽(yáng)性對(duì)照組(醋酸潑尼松,20 mg·kg-1),模型對(duì)照組(給予等容積純化水),均灌胃給藥,1 mL·(100 g)-1,qd,連續(xù)7 d,第8天脫臼處死,取出棉球,60℃烤箱放置12 h,精密稱質(zhì)量,減去原棉球質(zhì)量即為肉芽腫凈質(zhì)量(mg),除以體質(zhì)量,按mg·(100 g)-1表示肉芽腫系數(shù),采用t檢驗(yàn)對(duì)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理。

1.7 解熱作用 取雄性SD大鼠60只,體質(zhì)量150～200 g。測(cè)正常體溫后,每只大鼠背部皮下注射20%干酵母混懸液,10 mL·kg-1,6 h后體溫升至高峰,取體溫升高0.8～2.2℃大鼠50只,隨機(jī)分為5組,每組10只,即香桂化濁膠囊低、中、高劑量組(0.5,1,2 g·kg-1),陽(yáng)性對(duì)照組(阿司匹林,0.1 g·kg-1),模型對(duì)照組(給予等容積純化水)。以上各組均灌胃給藥1次,灌胃容積為1 mL·(100 g)-1。然后測(cè)定給藥后1,2,3,4,5 h體溫,以給藥后不同時(shí)間體溫值與藥前體溫值進(jìn)行配對(duì)t檢驗(yàn),判斷各組藥后體溫下降情況[7]。

2 結(jié)果

2.1 體外抗真菌實(shí)驗(yàn)結(jié)果 香桂化濁膠囊對(duì)致病性念珠菌臨床株均有明顯抗菌作用,對(duì)白念珠菌抗菌作用最強(qiáng)(表1)。香桂化濁膠囊對(duì)念珠菌標(biāo)準(zhǔn)株抗菌作用強(qiáng)于念珠菌臨床株,亦強(qiáng)于曲霉菌(表1,2)。香桂化濁膠囊對(duì)氟康唑膠囊體外抑菌作用較差的克柔念珠菌、煙曲霉菌、黃曲霉菌有較好抑菌作用(表2)。氟康唑膠囊對(duì)白念珠菌臨床珠、標(biāo)準(zhǔn)株抗菌作用最好,但對(duì)克柔念珠菌、煙曲霉菌、黃曲霉菌的臨床株和標(biāo)準(zhǔn)株抗菌作用較差(表2)。

表1 香桂化濁膠囊對(duì)臨床株念珠菌的MIC測(cè)定結(jié)果 mg·mL-1

2.2 止瀉實(shí)驗(yàn)

2.2.1 對(duì)小鼠蓖麻油瀉下模型的影響 與模型對(duì)照組比較,香桂化濁膠囊高劑量組4 h排稀便灘數(shù)和排稀便大鼠數(shù)均顯著減少(P＜0.01)。陽(yáng)性對(duì)照組4 h排稀便灘數(shù)亦顯著少于模型對(duì)照組(P＜0.05)。結(jié)果見(jiàn)表3。

表2 香桂化濁膠囊和氟康唑?qū)?biāo)準(zhǔn)株與臨床株真菌MIC測(cè)定結(jié)果 mg·mL-1

2.2.2 對(duì)小鼠小腸炭末推進(jìn)速度的影響 與模型對(duì)照組比較,香桂化濁膠囊各劑量組小鼠小腸炭末推進(jìn)率明顯降低(P＜0.01),陽(yáng)性對(duì)照組小腸推進(jìn)速度顯著減慢(P＜0.01),見(jiàn)表4。

2.3 抗炎作用

2.3.1 對(duì)大鼠足跖角叉菜膠炎癥的影響 香桂化濁膠囊高、中劑量組連續(xù)給藥7 d,大鼠足跖急性炎癥腫脹被明顯抑制,致炎后4 h和6 h大鼠足跖體積顯著小于模型對(duì)照組(P＜0.05,P＜0.01)。陽(yáng)性對(duì)照組致炎后1 h足跖腫脹被明顯抑制(P＜0.01)[8],見(jiàn)表5。

2.3.2 對(duì)大鼠棉球肉芽腫增生影響結(jié)果 香桂化濁膠囊0.5,1,2 g·kg-1連續(xù)給藥7 d,對(duì)大鼠棉球肉芽腫增生均無(wú)顯著影響。醋酸潑尼松可顯著降低大鼠棉球肉芽腫系數(shù)(P＜0.05),見(jiàn)表6。

2.4 解熱作用 香桂化濁膠囊各劑量組體溫均明顯降低,均于給藥后2 h開(kāi)始降溫。陽(yáng)性對(duì)照組給藥后1 h即開(kāi)始降溫。模型對(duì)照組給藥后4 h體溫開(kāi)始下降,見(jiàn)表7。

3 討論

筆者曾采用白念珠菌感染小鼠模型,考察香桂化濁膠囊體內(nèi)抗菌作用。結(jié)果對(duì)白念珠菌感染小鼠無(wú)明顯保護(hù)作用,采用小鼠溶血素抗體形成實(shí)驗(yàn)和用二硝基氟苯誘導(dǎo)小鼠遲發(fā)性變態(tài)反應(yīng)實(shí)驗(yàn),考察香桂化濁膠囊對(duì)小鼠體液免疫和細(xì)胞免疫的影響。結(jié)果香桂化濁膠囊1,2,4 g·kg-1劑量組,小鼠耳腫脹度雖有降低的趨勢(shì),但均差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。說(shuō)明該藥對(duì)體液免疫和細(xì)胞免疫均無(wú)明顯影響。

表3 5組小鼠腹瀉情況統(tǒng)計(jì)結(jié)果 ±s

表3 5組小鼠腹瀉情況統(tǒng)計(jì)結(jié)果 ±s

與模型對(duì)照組比較,*1P＜0.01,*2P＜0.05

組別小鼠/只劑量/(g·kg-1) 1 h動(dòng)物數(shù)灘數(shù)2 h動(dòng)物數(shù)灘數(shù)3 h動(dòng)物數(shù)灘數(shù)4 h動(dòng)物數(shù)灘數(shù)5 h動(dòng)物數(shù)灘數(shù)香桂化濁膠囊低劑量組10100.0±0.020.5±1.030.5±0.940.5±0.740.4±0.5中劑量組10200.0±0.030.6±1.330.4±0.730.4±0.760.7±0.7高劑量組10410.1±0.330.3±0.540.4±0.500.0±0.0*120.2±0.4陽(yáng)性對(duì)照組100.0520.3±0.630.7±1.350.8±1.020.2±0.6*220.4±0.9模型對(duì)照組10…10.2±0.661.7±1.650.9±0.170.8±0.661.2±1.6

表4 香桂化濁膠囊對(duì)小鼠小腸炭末推進(jìn)率的影響 ±s

表4 香桂化濁膠囊對(duì)小鼠小腸炭末推進(jìn)率的影響 ±s

與模型對(duì)照組比較,*1P＜0.01

組別小鼠/只劑量/(g·kg-1)小腸總長(zhǎng)炭末推進(jìn)距離cm推進(jìn)率/%香桂化濁膠囊低劑量組10144.5±3.231.9±3.971.5±4.5*1中劑量組10244.6±3.729.2±3.765.7±8.2*1高劑量組10440.7±2.624.2±3.959.5±8.9*1陽(yáng)性對(duì)照組100.0543.4±4.517.8±2.841.9±4.4*1模型對(duì)照組100.040.0±2.633.7±1.984.5±6.7

表5 5組大鼠不同時(shí)間左足跖體積測(cè)定結(jié)果 mL,±s

表5 5組大鼠不同時(shí)間左足跖體積測(cè)定結(jié)果 mL,±s

與模型對(duì)照組比較,*1P＜0.05,*2P＜0.01

組別大鼠/只劑量/(g·kg-1)致炎前致炎后1 h致炎后2 h致炎后4 h致炎后6 h香桂化濁膠囊低劑量組100.51.31±0.221.86±0.282.31±0.422.34±0.522.37±0.44中劑量組1011.26±0.141.75±0.472.04±0.472.16±0.52*12.23±0.51*1高劑量組1021.25±0.071.69±0.321.99±0.342.22±0.47*12.23±0.35*2陽(yáng)性對(duì)照組100.021.21±0.071.37±0.11*21.46±0.27*21.60±0.20*21.58±0.21*2模型對(duì)照組10…1.30±0.121.96±0.332.26±0.312.65±0.332.70±0.25

表6 5組大鼠棉球肉芽腫系數(shù)測(cè)定結(jié)果 ±s

表6 5組大鼠棉球肉芽腫系數(shù)測(cè)定結(jié)果 ±s

與模型對(duì)照組比較,*1P＜0.01

組別大鼠/只劑量/(g·kg-1)棉球數(shù)/個(gè)肉芽腫系數(shù)/[mg·(100 g)-1]香桂化濁膠囊低劑量組100.520 35±7中劑量組10120 31±11高劑量組10220 32±9陽(yáng)性對(duì)照組100.0220 20±9*1模型對(duì)照組10…20 36±11

本研究結(jié)果表明,香桂化濁膠囊對(duì)致病性念珠菌臨床株均有明顯的抗菌作用,但對(duì)白念珠菌的抗菌作用最強(qiáng);其對(duì)念珠菌標(biāo)準(zhǔn)株的抗菌作用強(qiáng)于念珠菌臨床株,也強(qiáng)于曲霉菌。尤其本品對(duì)氟康唑膠囊體外抑菌作用較差的克柔念珠菌、煙曲霉菌、黃曲霉菌有較好的抑菌作用。因此,該體外抗真菌實(shí)驗(yàn)研究為香桂化濁膠囊治療真菌感染性腸炎提供了藥效學(xué)依據(jù)。

表7 5組大鼠不同時(shí)間體溫測(cè)定結(jié)果 ±s

表7 5組大鼠不同時(shí)間體溫測(cè)定結(jié)果 ±s

與本組用藥前比較,*1P＜0.05,*2P＜0.01

別大鼠/劑量/只(g·kg-1)體溫/℃用藥前用藥后1 h用藥后2 h用組正常藥后3 h用藥后4 h用藥后5 h香桂化濁膠囊低劑量組100.538.5±0.439.9±0.339.8±0.539.4±0.5*139.3±0.5*239.1±0.5*239.1±0.4*2中劑量組10138.5±0.439.9±0.239.8±0.539.3±0.7*139.2±0.7*239.1±0.5*239.1±0.5*2高劑量組10238.4±0.339.9±0.339.3±1.339.0±1.1*139.0±0.8*138.9±0.6*238.8±0.5*2陽(yáng)性對(duì)照組100.138.4±0.339.9±0.338.6±0.6*238.5±0.5*238.4±0.4*238.5±0.6*238.5±0.5*2模型對(duì)照組10…38.5±0.339.9±0.540.0±0.539.6±0.439.5±0.439.3±0.5*239.0±0.3*2

香桂化濁膠囊可明顯減少蓖麻油腹瀉小鼠稀便灘數(shù)和排稀便動(dòng)物數(shù),對(duì)小鼠小腸推進(jìn)率具有顯著延緩作用;本膠囊劑對(duì)大鼠足跖角叉菜膠所致急性炎癥腫脹有明顯抑制作用,但對(duì)大鼠棉球肉芽腫增生均無(wú)顯著影響;本品還可降低由酵母升高的大鼠體溫。結(jié)果表明,其對(duì)真菌感染所致的腹瀉、咳嗽、吐痰、炎癥及發(fā)熱等均有較好的作用。

臨床上由于長(zhǎng)時(shí)間使用廣譜抗菌藥物、糖皮質(zhì)激素等,導(dǎo)致深部真菌感染發(fā)病率較高,治療上常采用氟康唑、伊曲康唑,特別是抗真菌藥卡泊芬凈、米卡芬凈、兩性霉素B等,由于其價(jià)格昂貴、腎毒性等,在抗菌藥物的分級(jí)管理中被列入特殊使用級(jí)抗菌藥物,使其臨床應(yīng)用受到一定的限制,本研究結(jié)果為開(kāi)發(fā)抗深部真菌感染的中藥制劑提供了參考。

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DOI 10.3870/yydb.2014.03.014

R286;R965

A

1004-0781(2014)03-0325-04

2012-10-22

2012-12-05

*河北省中醫(yī)藥管理局科研計(jì)劃課題資助項(xiàng)目(2012083)

劉紅淼(1977-),男,河北巨鹿人,副主任中藥師,學(xué)士,研究方向:中藥制劑與新藥研發(fā)。電話:0311-85917269,E-mail：liu8720285@126.com。

楊繼章(1957-),男,河北邢臺(tái)人,主任藥師,教授,碩士生導(dǎo)師,學(xué)士,研究方向:藥物新劑型、藥物穩(wěn)定性。電話:0311-85917352,E-mail：yjzh1957@163.com。