王吉祥，向文娟，王亞琴，馮雷，祝紅昆

（云南省產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗研究院，云南昆明650223）

有機磷農(nóng)藥作為廣譜殺蟲劑，曾廣泛使用于農(nóng)牧業(yè)生產(chǎn)，由于其毒性大，易產(chǎn)生殘留毒性，引發(fā)食品安全問題，目前各地均有相關(guān)的限制性法規(guī)[1]?，F(xiàn)在一些不法廠家為獲取更多利益，生產(chǎn)反季節(jié)火腿，并在生產(chǎn)過程中違法使用敵敵畏浸泡或熏蒸火腿，衛(wèi)生部要求加強對火腿中的敵敵畏等有機磷農(nóng)藥的檢測[2]?；鹜葮悠返奶崛∥镏泻写罅縿游镏愇镔|(zhì)，難以氣化，并會沉積在進樣口，影響定性、定量的準確性。因此，對樣品的凈化工作顯得非常有必要，傳統(tǒng)的前處理方法有液液分配，柱層析等，這些方法有操作比較復(fù)雜，穩(wěn)定性不夠高等缺點[3－11]。凝膠滲透色譜作為一種新的凈化方法和技術(shù)，在國外已廣泛使用，在我國的運用也日漸增多。本研究采用凝膠滲透色譜－氣相色譜－質(zhì)譜（GPCGC/MS）法同時檢測火腿中敵敵畏、氧化樂果、樂果、馬拉硫磷、對硫磷的殘留量，去除了油脂類物質(zhì)的干擾，同時進行定量測定，該方法的建立可以更有效地監(jiān)控火腿產(chǎn)品的農(nóng)藥殘留，希望能為火腿中5種農(nóng)藥殘留的檢測提供新的方法。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

QP 2010 Plus氣相色譜/質(zhì)譜儀：日本島津GPCGC/MS，配有 AOC－5000 自動進樣器，電子轟擊（EI）離子源；GPC ULTRA凝膠滲透色譜儀：德國LC tech公司；JNC OA－SYS氮吹濃縮儀：美國Organomation Associates；渦旋混勻器：上海精科；1210型超聲波清洗儀：美國 Branson；微量可調(diào)移液槍：200 μL，德國 Eppendorf。

敵敵畏、氧化樂果、樂果、馬拉硫磷、對硫磷（質(zhì)量濃度均為100 mg/L）：購自農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護科研監(jiān)測所；丙酮、環(huán)己烷、乙酸乙酯、正己烷：均為色譜純，F(xiàn)isher Scientific。

1.2 氣相色譜—質(zhì)譜條件

1.2.1 氣相色譜條件

色譜柱：DB－5（0.25 mm×0.25 μm×30 m）石英毛細管柱；載氣：氦氣，純度≥99.999%；進樣口溫度：250℃；柱溫：初始溫度82℃，保持5min，然后以8℃/min程序升溫到280℃，保持15 min；柱流速：1.75 mL/min；進樣量：1 μL；進樣方式：不分流進樣，1 min 后開閥。

1.2.2 質(zhì)譜條件

電子轟擊（EI）離子源；離子源溫度230℃；色譜－質(zhì)譜接口溫度280℃；溶劑延遲時間3.5 min；全掃描范圍50 m/z～450 m/z用于測定樣品凈化效果選擇離子監(jiān)測用于定性和定量測定。

用敵敵畏等5種農(nóng)藥的混合標準溶液，在上述GC－MS條件下用Scan方式先測得其總離子流圖，然后根據(jù)各農(nóng)藥的保留時間和質(zhì)譜圖，確定各待測化合物在SIM測定方式中的采集時間和監(jiān)測離子。

1.3 凝膠色譜（GPC）條件

GPC 凈化柱（25 mm×400 mm）；填料 Bio Beads SX3（38 μm～75 μm）；流動相環(huán)己烷∶乙酸乙酯=（1∶1，體積比）；流速 5.0 mL/min；雜質(zhì)丟棄時間（GPC－Forerun）：1 020s；主要收集時間（GPC－Mainfaction）：1200s；高位激光真空度：220 mbar；低位激光真空度：240 mbar。

1.4 方法

稱取解凍后的試樣20.00g（精確到0.01g）于250mL具塞錐形瓶中，加入60 mL丙酮，均質(zhì)提取3 min。將提取液過濾于250 mL濃縮瓶中，于50℃水浴中濃縮至約20 mL。將濃縮提取液轉(zhuǎn)移至250 mL分液漏斗中，加入150 mL氯化鈉水溶液和50 mL二氯甲烷，振搖3 min，靜置分層，收集二氯甲烷相。水相再用50 mL二氯甲烷重復(fù)提取兩次，合并二氯甲烷相。經(jīng)無水硫酸鈉脫水，收集于250 mL濃縮瓶中，于50℃水浴中濃縮至近干。加入10 mL環(huán)己烷－乙酸乙酯溶解殘渣，用0.45 μm濾膜過濾，待凝膠色譜（GPC）凈化。

將10 mL待凈化液按1.3規(guī)定的條件進行凈化，收集液在50℃水浴中用氮氣吹干，加1.0 mL正己烷溶解以備GC/MS測定。

2 結(jié)果與討論

2.1 GPC凈化

火腿中含有大量的油脂和蛋白質(zhì)等物質(zhì)，如果不能有效的去除這些雜質(zhì)，對色譜分析會產(chǎn)生一定的干擾，影響定性定量分析的準確性。目前通常使用的凈化方法主要是柱凈化法、反提法、固相萃取凈化法等，操作程序較為復(fù)雜，自動化程度不高，重現(xiàn)性、精密度等完全依賴操作人員的水平，對分析人員的要求較高。由于GPC是依靠被分離物質(zhì)本身相對分子質(zhì)量的大小對樣品進行分離的，凝膠本身與被分離試樣之間沒有相互作用，因此被分離物質(zhì)在分離過程中不會發(fā)生化學變化。GPC的條件溫和，對農(nóng)藥的性質(zhì)沒有特殊要求，不同類型的農(nóng)藥可同時分析，不但技術(shù)成熟、廉價，而且重現(xiàn)性高、凈化和回收效果良好。本實驗采用凝膠凈化技術(shù)去除分析物中的色素、脂肪類及大分子干擾物以此達到分析的要求，操作簡便，自動化程度高，并且可以通過軟件方法設(shè)置將處理好的樣品定量濃縮，直接在色譜上分析即可。

在確定GPC去雜時間和主要收集時間時，要充分考慮被滲透排阻的干擾組分和目標化合物的分離情況，要在回收率滿足條件的情況下，盡量將干擾物去除。經(jīng)過實驗發(fā)現(xiàn)在1 000 s～2 200 s 5種有機磷農(nóng)藥流出，考慮到樣品的凈化、脫色，確定去雜時間為1 020 s，主要收集時間為1 200 s。

2.2 線性范圍和檢出限

取5支10 mL具塞比色管，把五種農(nóng)藥配制成濃度1.0 μg/mL標準使用液，以正己烷作為溶劑分別配制成 0.02、0.05、0.10、0.15、0.20 μg/mL 不同濃度的 5 個點，以濃度為橫坐標，所對應(yīng)的峰面積為縱坐標，繪制標準曲線，見表1，其標準物質(zhì)色譜圖如圖1。

2.3 方法的回收率和精密度

稱取空白火腿樣品20.00 g各5份，分別加入濃度為 0.02、0.05、0.10 μg/mL 的 5 種農(nóng)藥混標 1.0 mL，按上述樣品的處理及凈化步驟進行前處理，并測定，結(jié)果見表2。不同濃度的五種農(nóng)藥回收率86.75%～101.84%，RSD1.46%～5.19%，準確度和精密度均達到殘留分析的要求。其加標回收色譜圖見圖2。

3 小結(jié)

雖然檢測肉制品中敵敵畏、樂果、馬拉硫磷、對硫磷的農(nóng)藥殘留已有國家標準[1]和其他檢測方法（氧化樂果的檢測至今尚無國家標準），但均存在前處理步驟繁瑣，花費時間比較長，不利于樣品的大規(guī)模批量檢驗，GPC結(jié)合GC/MS－SIM法可以對火腿中5種農(nóng)藥殘留同時進行定量測定，既大大簡化了前處理步驟，最大程度的避免了人為操作的誤差對實驗結(jié)果的影響，又避免了氣相色譜法中當干擾物的保留時間與被測物非常接近時而引起的陽性判斷錯誤。

圖1 GC/MS-SIM測定方式下5種農(nóng)藥（0.1 mg/L）的總離子流圖Fig.1 GC/MS-SIM ion monitoring chromatograms of 5 pesticides

表1 5種農(nóng)藥的線性方程及線性范圍Table 1 Five kinds of pesticides linear equations and linearity ranges

圖2 GC/MS-SIM測定方式下5種農(nóng)藥加標回收的總離子流圖Fig.2 GC/MS-SIM addition standard ion monitoring chromatograms of 5 pesticides

表2 火腿中5種農(nóng)殘回收率及精密度Table 2 The recoveries and precisions of five kinds of residues in honey

GC/MS法中的SIM測定方式基線噪聲小、干擾少、具有與GC－FPD法相當或者更高的靈敏度；測定敵敵畏、氧化樂果、樂果、馬拉硫磷和對硫磷5種農(nóng)藥殘留的檢出限量完全可以滿足檢測要求。試樣用丙酮、二氯甲烷提取，GPC進行前處理，回收率、精密度較好、簡捷、快速，適用于在短時間內(nèi)大批量樣品的分析，所以該方法的建立能夠更加有效的監(jiān)控肉制品中的農(nóng)藥殘留，對于食品檢驗工作中肉制品的檢測具有很好的應(yīng)用價值。

[1]中華人民共和國衛(wèi)生部,中國國家標準化管理委員會.GB/T 5009.20-2003食品中有機磷農(nóng)藥殘留量的測定[S].北京：中國標準出版社,2003

[2]朱愛民.環(huán)境溫度對火腿中農(nóng)殘敵敵畏提取效率的影響[J].中國衛(wèi)生檢驗雜志,2006,16(5):554-555,627

[3] 王建,林秋萍,雷鄭莉,等.氣相色譜－質(zhì)譜法測定蔬菜中有機磷殺蟲劑和克百威的殘留量[J].分析實驗室,2002,21(2):282-284

[4] 魏冬旭,江連洲,郭偉,等.ASE-GPC-GC法測定大豆及豆制品中六六六、滴滴涕農(nóng)藥殘留[J].食品科學,2009,30(24):351-354

[5] 陳躍,盧曉宇,趙汗青,等.氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法對農(nóng)產(chǎn)品中8種衣劑農(nóng)藥殘留的同時測定[J].分析測試學報,2008,27(10):1084-1087

[6] 劉詠梅,王志華,儲曉剛.凝膠滲透色譜技術(shù)在農(nóng)藥殘留分析中的應(yīng)用[J].分析測試學報,2005,24(2):123-127

[7] 劉詠梅,王志華,儲曉剛.凝膠滲透色譜凈化-氣相色譜測定糙米中7種常見有機磷農(nóng)藥殘留[J].農(nóng)藥,2004,43(10):460-462

[8] Guangming Huang,Jin Ougang,Willy R G Baeyens,et al.Highperformance liquid chromatographic assay of dichlor-VOS,isocarbophos and methyl parathion from plant leavesusing chemiluminescence detection[J].Anal Chim Acta,2002,474(1/2):21-29

[9] Holst ege D M,Scharberg D L,Richardson E R,et al.Multiresiduescreen for organophorus insecticides us ing gel permeation chromatography-silica gel cleanup[J].J AOAC Int,1996,74(2):394-399

[10]TOMOMI G,YUKO I.Simple and rapid determination of Nmethylcarbamate pesticides incitrus fruits by electro spray ionization tandem mass spectrometry[J].Analytica chimica acta,2003,487(2):201-209

[11]ERIC J,JOSEP M B.Trace level determination of organochlorine,organophosphorus and pyrethroid pesticides in lanolin using gel permeation chromatography followed by dual gas chromatography and gas chromatography-negative chemical ionization mass spectrometric confirmation[J].Journal of chromatography A,2002,950(1/2):213-220