王吉祥，向文娟，王亞琴，馮雷，祝紅昆

（云南省產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)研究院，云南昆明650223）

有機(jī)磷農(nóng)藥作為廣譜殺蟲(chóng)劑，曾廣泛使用于農(nóng)牧業(yè)生產(chǎn)，由于其毒性大，易產(chǎn)生殘留毒性，引發(fā)食品安全問(wèn)題，目前各地均有相關(guān)的限制性法規(guī)[1]?，F(xiàn)在一些不法廠家為獲取更多利益，生產(chǎn)反季節(jié)火腿，并在生產(chǎn)過(guò)程中違法使用敵敵畏浸泡或熏蒸火腿，衛(wèi)生部要求加強(qiáng)對(duì)火腿中的敵敵畏等有機(jī)磷農(nóng)藥的檢測(cè)[2]?；鹜葮悠返奶崛∥镏泻写罅縿?dòng)物脂類物質(zhì)，難以氣化，并會(huì)沉積在進(jìn)樣口，影響定性、定量的準(zhǔn)確性。因此，對(duì)樣品的凈化工作顯得非常有必要，傳統(tǒng)的前處理方法有液液分配，柱層析等，這些方法有操作比較復(fù)雜，穩(wěn)定性不夠高等缺點(diǎn)[3－11]。凝膠滲透色譜作為一種新的凈化方法和技術(shù)，在國(guó)外已廣泛使用，在我國(guó)的運(yùn)用也日漸增多。本研究采用凝膠滲透色譜－氣相色譜－質(zhì)譜（GPCGC/MS）法同時(shí)檢測(cè)火腿中敵敵畏、氧化樂(lè)果、樂(lè)果、馬拉硫磷、對(duì)硫磷的殘留量，去除了油脂類物質(zhì)的干擾，同時(shí)進(jìn)行定量測(cè)定，該方法的建立可以更有效地監(jiān)控火腿產(chǎn)品的農(nóng)藥殘留，希望能為火腿中5種農(nóng)藥殘留的檢測(cè)提供新的方法。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

QP 2010 Plus氣相色譜/質(zhì)譜儀：日本島津GPCGC/MS，配有 AOC－5000 自動(dòng)進(jìn)樣器，電子轟擊（EI）離子源；GPC ULTRA凝膠滲透色譜儀：德國(guó)LC tech公司；JNC OA－SYS氮吹濃縮儀：美國(guó)Organomation Associates；渦旋混勻器：上海精科；1210型超聲波清洗儀：美國(guó) Branson；微量可調(diào)移液槍：200 μL，德國(guó) Eppendorf。

敵敵畏、氧化樂(lè)果、樂(lè)果、馬拉硫磷、對(duì)硫磷（質(zhì)量濃度均為100 mg/L）：購(gòu)自農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護(hù)科研監(jiān)測(cè)所；丙酮、環(huán)己烷、乙酸乙酯、正己烷：均為色譜純，F(xiàn)isher Scientific。

1.2 氣相色譜—質(zhì)譜條件

1.2.1 氣相色譜條件

色譜柱：DB－5（0.25 mm×0.25 μm×30 m）石英毛細(xì)管柱；載氣：氦氣，純度≥99.999%；進(jìn)樣口溫度：250℃；柱溫：初始溫度82℃，保持5min，然后以8℃/min程序升溫到280℃，保持15 min；柱流速：1.75 mL/min；進(jìn)樣量：1 μL；進(jìn)樣方式：不分流進(jìn)樣，1 min 后開(kāi)閥。

1.2.2 質(zhì)譜條件

電子轟擊（EI）離子源；離子源溫度230℃；色譜－質(zhì)譜接口溫度280℃；溶劑延遲時(shí)間3.5 min；全掃描范圍50 m/z～450 m/z用于測(cè)定樣品凈化效果選擇離子監(jiān)測(cè)用于定性和定量測(cè)定。

用敵敵畏等5種農(nóng)藥的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，在上述GC－MS條件下用Scan方式先測(cè)得其總離子流圖，然后根據(jù)各農(nóng)藥的保留時(shí)間和質(zhì)譜圖，確定各待測(cè)化合物在SIM測(cè)定方式中的采集時(shí)間和監(jiān)測(cè)離子。

1.3 凝膠色譜（GPC）條件

GPC 凈化柱（25 mm×400 mm）；填料 Bio Beads SX3（38 μm～75 μm）；流動(dòng)相環(huán)己烷∶乙酸乙酯=（1∶1，體積比）；流速 5.0 mL/min；雜質(zhì)丟棄時(shí)間（GPC－Forerun）：1 020s；主要收集時(shí)間（GPC－Mainfaction）：1200s；高位激光真空度：220 mbar；低位激光真空度：240 mbar。

1.4 方法

稱取解凍后的試樣20.00g（精確到0.01g）于250mL具塞錐形瓶中，加入60 mL丙酮，均質(zhì)提取3 min。將提取液過(guò)濾于250 mL濃縮瓶中，于50℃水浴中濃縮至約20 mL。將濃縮提取液轉(zhuǎn)移至250 mL分液漏斗中，加入150 mL氯化鈉水溶液和50 mL二氯甲烷，振搖3 min，靜置分層，收集二氯甲烷相。水相再用50 mL二氯甲烷重復(fù)提取兩次，合并二氯甲烷相。經(jīng)無(wú)水硫酸鈉脫水，收集于250 mL濃縮瓶中，于50℃水浴中濃縮至近干。加入10 mL環(huán)己烷－乙酸乙酯溶解殘?jiān)?.45 μm濾膜過(guò)濾，待凝膠色譜（GPC）凈化。

將10 mL待凈化液按1.3規(guī)定的條件進(jìn)行凈化，收集液在50℃水浴中用氮?dú)獯蹈桑?.0 mL正己烷溶解以備GC/MS測(cè)定。

2 結(jié)果與討論

2.1 GPC凈化

火腿中含有大量的油脂和蛋白質(zhì)等物質(zhì)，如果不能有效的去除這些雜質(zhì)，對(duì)色譜分析會(huì)產(chǎn)生一定的干擾，影響定性定量分析的準(zhǔn)確性。目前通常使用的凈化方法主要是柱凈化法、反提法、固相萃取凈化法等，操作程序較為復(fù)雜，自動(dòng)化程度不高，重現(xiàn)性、精密度等完全依賴操作人員的水平，對(duì)分析人員的要求較高。由于GPC是依靠被分離物質(zhì)本身相對(duì)分子質(zhì)量的大小對(duì)樣品進(jìn)行分離的，凝膠本身與被分離試樣之間沒(méi)有相互作用，因此被分離物質(zhì)在分離過(guò)程中不會(huì)發(fā)生化學(xué)變化。GPC的條件溫和，對(duì)農(nóng)藥的性質(zhì)沒(méi)有特殊要求，不同類型的農(nóng)藥可同時(shí)分析，不但技術(shù)成熟、廉價(jià)，而且重現(xiàn)性高、凈化和回收效果良好。本實(shí)驗(yàn)采用凝膠凈化技術(shù)去除分析物中的色素、脂肪類及大分子干擾物以此達(dá)到分析的要求，操作簡(jiǎn)便，自動(dòng)化程度高，并且可以通過(guò)軟件方法設(shè)置將處理好的樣品定量濃縮，直接在色譜上分析即可。

在確定GPC去雜時(shí)間和主要收集時(shí)間時(shí)，要充分考慮被滲透排阻的干擾組分和目標(biāo)化合物的分離情況，要在回收率滿足條件的情況下，盡量將干擾物去除。經(jīng)過(guò)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)在1 000 s～2 200 s 5種有機(jī)磷農(nóng)藥流出，考慮到樣品的凈化、脫色，確定去雜時(shí)間為1 020 s，主要收集時(shí)間為1 200 s。

2.2 線性范圍和檢出限

取5支10 mL具塞比色管，把五種農(nóng)藥配制成濃度1.0 μg/mL標(biāo)準(zhǔn)使用液，以正己烷作為溶劑分別配制成 0.02、0.05、0.10、0.15、0.20 μg/mL 不同濃度的 5 個(gè)點(diǎn)，以濃度為橫坐標(biāo)，所對(duì)應(yīng)的峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，見(jiàn)表1，其標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)色譜圖如圖1。

2.3 方法的回收率和精密度

稱取空白火腿樣品20.00 g各5份，分別加入濃度為 0.02、0.05、0.10 μg/mL 的 5 種農(nóng)藥混標(biāo) 1.0 mL，按上述樣品的處理及凈化步驟進(jìn)行前處理，并測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表2。不同濃度的五種農(nóng)藥回收率86.75%～101.84%，RSD1.46%～5.19%，準(zhǔn)確度和精密度均達(dá)到殘留分析的要求。其加標(biāo)回收色譜圖見(jiàn)圖2。

3 小結(jié)

雖然檢測(cè)肉制品中敵敵畏、樂(lè)果、馬拉硫磷、對(duì)硫磷的農(nóng)藥殘留已有國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)[1]和其他檢測(cè)方法（氧化樂(lè)果的檢測(cè)至今尚無(wú)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)），但均存在前處理步驟繁瑣，花費(fèi)時(shí)間比較長(zhǎng)，不利于樣品的大規(guī)模批量檢驗(yàn)，GPC結(jié)合GC/MS－SIM法可以對(duì)火腿中5種農(nóng)藥殘留同時(shí)進(jìn)行定量測(cè)定，既大大簡(jiǎn)化了前處理步驟，最大程度的避免了人為操作的誤差對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，又避免了氣相色譜法中當(dāng)干擾物的保留時(shí)間與被測(cè)物非常接近時(shí)而引起的陽(yáng)性判斷錯(cuò)誤。

圖1 GC/MS-SIM測(cè)定方式下5種農(nóng)藥（0.1 mg/L）的總離子流圖Fig.1 GC/MS-SIM ion monitoring chromatograms of 5 pesticides

表1 5種農(nóng)藥的線性方程及線性范圍Table 1 Five kinds of pesticides linear equations and linearity ranges

圖2 GC/MS-SIM測(cè)定方式下5種農(nóng)藥加標(biāo)回收的總離子流圖Fig.2 GC/MS-SIM addition standard ion monitoring chromatograms of 5 pesticides

表2 火腿中5種農(nóng)殘回收率及精密度Table 2 The recoveries and precisions of five kinds of residues in honey

GC/MS法中的SIM測(cè)定方式基線噪聲小、干擾少、具有與GC－FPD法相當(dāng)或者更高的靈敏度；測(cè)定敵敵畏、氧化樂(lè)果、樂(lè)果、馬拉硫磷和對(duì)硫磷5種農(nóng)藥殘留的檢出限量完全可以滿足檢測(cè)要求。試樣用丙酮、二氯甲烷提取，GPC進(jìn)行前處理，回收率、精密度較好、簡(jiǎn)捷、快速，適用于在短時(shí)間內(nèi)大批量樣品的分析，所以該方法的建立能夠更加有效的監(jiān)控肉制品中的農(nóng)藥殘留，對(duì)于食品檢驗(yàn)工作中肉制品的檢測(cè)具有很好的應(yīng)用價(jià)值。

[1]中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部,中國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì).GB/T 5009.20-2003食品中有機(jī)磷農(nóng)藥殘留量的測(cè)定[S].北京：中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社,2003

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