李靜虹等

摘要：以贊皇大棗（Ziziphus jujuba ‘Zanhuang Dazao）黑腐病主要病原菌莖點霉菌（Phoma sp.）為靶標，對分離自土壤中的10株芽孢桿菌（Bacillus spp.）菌株進行室內多重篩選，并通過單因素試驗對篩選獲得的目標菌進行發(fā)酵培養(yǎng)基和發(fā)酵條件優(yōu)化。結果表明，芽孢桿菌菌株B01對靶標菌有明顯而穩(wěn)定的拮抗效果；其最佳發(fā)酵培養(yǎng)基配方為蔗糖

中圖分類：S476；S436.65 文獻標識碼：A 文章編號：0439-8114（2014）04-0809-05

In vitro Multiple Screening of Antagonistic Bacillus against Phoma sp. and Optimizing Its Fermentation Factors

LI Jing-hong，GAO Fen，WANG Jun-hong，WANG Meng-liang

（Institute of Applied Chemistry， Shanxi University， Taiyuan 030006，China）

贊皇大棗（Ziziphus jujuba ‘Zanhuang Dazao）又名金絲大棗，是中國700多個棗品種中惟一的自然三倍體[1]，整齊個大、皮薄肉厚、可食率高、營養(yǎng)豐富，是天然的營養(yǎng)保健食品，具有較高的商品價值[2]。黑腐病是贊皇大棗主要果實病害之一，近幾年來該病害發(fā)生日趨嚴重，一般年份病果率20%～30%，流行年份可達50%以上， 甚至可使棗果絕收[3]，極大地影響了贊皇大棗的產量、果實品質和商品價值。

贊皇大棗作為鮮食加工兼用品種，對防治果實病害的農藥使用具有較高的要求。生物農藥相對于化學農藥具有對環(huán)境、生態(tài)友好，對人類安全、無毒等優(yōu)點，得到了廣泛重視并發(fā)揮著越來越重要的作用，其中多種有益微生物及其代謝產物已成功應用于植物病害的生物防治中，取得了較好的經濟和社會效益[4]?？莶菅挎邨U菌（Bacillus subtilis）GBO3（美國）、A213（澳大利亞）、RB-14（日本）、B916（中國）、B908（中國）等具有優(yōu)良性狀的菌株已經應用于生產實踐[5]；蠟質芽孢桿菌（Bacillus cereus）菌株BC98-I[6]發(fā)酵液與菌絲粗提物對黃瓜枯萎病菌（Fusarium oxysporium）具有良好抑制作用，可降低孢子萌發(fā)率，使菌絲生長形態(tài)異常，且抑菌特性穩(wěn)定，對外界環(huán)境有很強的適應力和耐受性。目前有關棗黑腐病的生物防治報道較少，陳貽金等[7]將農用鏈霉素（70～140 IU/mL）、DT（50%， 600倍稀釋液）、卡那霉素（140 IU/mL）和土霉素（210 IU/mL）等在棗黑腐病發(fā)病期內混合使用，保果率在90% 以上；李志清等[8]將3%中生菌素（800倍稀釋液）、4%農抗120（400倍稀釋液）和4%雙抗（400倍稀釋液）等與化學農藥甲基托布津等交替使用，防治棗黑腐病效果也較好，但利用芽孢桿菌（Bacillus spp.）開發(fā)防治棗黑腐病生防制劑的研究鮮見報道。為尋找棗果實病害無公害防治的新途徑，本研究以莖點霉菌（Phoma sp.）為靶標，對前期自土壤中分離獲得的10株具抗真菌活性的芽孢桿菌菌株進行了室內多重篩選和發(fā)酵培養(yǎng)基及發(fā)酵條件優(yōu)化試驗，為后續(xù)研究奠定基礎。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 靶標菌 贊皇大棗黑腐病主要病原菌莖點霉菌，從山西省石樓縣患贊皇大棗黑腐病的病果中分離獲得，由山西大學應用化學研究所實驗室分離鑒定。

1.2 拮抗芽孢桿菌的多重篩選

1.2.1 病原菌培養(yǎng)

芽孢桿菌屬細菌，因具有生長速度快、營養(yǎng)需求簡單、有較強的耐熱性及抗逆性、在植物表面易于存活與繁殖、對人畜無害、不污染環(huán)境、制劑穩(wěn)定、施用方便等優(yōu)點[13]而備受關注。一些芽孢桿菌菌株已經開發(fā)成生物農藥投入到植物病害的防治中。本研究篩選獲得的芽孢桿菌B01雖然在室內篩選中表現出了良好的抑菌效果，具有作為生物農藥的潛力，但還需對其田間效果作進一步試驗研究。此外，還需對該菌株進行鑒定及抑菌有效組分分離、理化性質測定、劑型研制、安全性試驗等方面的研究工作，為開發(fā)具有實際應用價值的生物農藥奠定基礎。

參考文獻：

[1] 及 華，關軍鋒，竇世娟，等.采后贊皇大棗不同包裝處理的生理生化性狀差異[J].果樹學報，2004，21（6）：540-543.

[2] 趙叢枝. 贊皇大棗采后生理及其貯藏技術研究[D].河北保定： 河北農業(yè)大學，2004.

[3] 李志清，常聚普，程國華，等.棗黑腐病防治技術研究[J].林業(yè)科技通訊，2000（12）：10-12.

[4] 張麗萍，張貴云.微生物農藥研究進展[J].北京農業(yè)科學，2000（4）：22-24.

[5] 李 明，雙 寶，李海濤，等.枯草芽孢桿菌的研究與應用[J].東北農業(yè)大學學報，2009，40（9）：111-114.

[6] 高 芬，馬利平，喬雄梧，等.蠟質芽孢桿菌BC98-I發(fā)酵液與粗提物對黃瓜枯萎病菌的抑菌特性研究[J].中國生態(tài)農業(yè)學報， 2006，14（1）：189-192.

[7] 陳貽金，陳謨林，朱林元.棗縮果病及其防治技術研究[J].林業(yè)科技通訊，1989（8）：3-7.

[8] 李志清，張兆欣，田國忠，等.棗黑腐病田間藥劑防治技術研究[J].中國森林病蟲，2005（5）：3-6.

[9] 沈 萍，范秀容，李廣武.微生物學實驗[M].北京：高等教育出版社，2001.

[10] 林福呈，李德葆.枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis）S9對植物病原真菌的溶菌作用[J].植物病理學報，2003，33（2）：174-177.

[11] 董金甫，李瑤卿.茶多酚抑菌作用的研究[J].茶葉，1992（3）：46-49.

[12] 沈光斌，周明國.水稻白葉枯病菌對噻枯唑的抗藥性監(jiān)測[J].植物保護，2002，28（1）：9-11.

[13] 朱玥妍，劉 姣，杜春梅.芽孢桿菌生物防治植物病害研究進展[J].安徽農業(yè)科學，2012，40（34）：16635-16638.

摘要：以贊皇大棗（Ziziphus jujuba ‘Zanhuang Dazao）黑腐病主要病原菌莖點霉菌（Phoma sp.）為靶標，對分離自土壤中的10株芽孢桿菌（Bacillus spp.）菌株進行室內多重篩選，并通過單因素試驗對篩選獲得的目標菌進行發(fā)酵培養(yǎng)基和發(fā)酵條件優(yōu)化。結果表明，芽孢桿菌菌株B01對靶標菌有明顯而穩(wěn)定的拮抗效果；其最佳發(fā)酵培養(yǎng)基配方為蔗糖

中圖分類：S476；S436.65 文獻標識碼：A 文章編號：0439-8114（2014）04-0809-05

In vitro Multiple Screening of Antagonistic Bacillus against Phoma sp. and Optimizing Its Fermentation Factors

LI Jing-hong，GAO Fen，WANG Jun-hong，WANG Meng-liang

（Institute of Applied Chemistry， Shanxi University， Taiyuan 030006，China）

贊皇大棗（Ziziphus jujuba ‘Zanhuang Dazao）又名金絲大棗，是中國700多個棗品種中惟一的自然三倍體[1]，整齊個大、皮薄肉厚、可食率高、營養(yǎng)豐富，是天然的營養(yǎng)保健食品，具有較高的商品價值[2]。黑腐病是贊皇大棗主要果實病害之一，近幾年來該病害發(fā)生日趨嚴重，一般年份病果率20%～30%，流行年份可達50%以上， 甚至可使棗果絕收[3]，極大地影響了贊皇大棗的產量、果實品質和商品價值。

贊皇大棗作為鮮食加工兼用品種，對防治果實病害的農藥使用具有較高的要求。生物農藥相對于化學農藥具有對環(huán)境、生態(tài)友好，對人類安全、無毒等優(yōu)點，得到了廣泛重視并發(fā)揮著越來越重要的作用，其中多種有益微生物及其代謝產物已成功應用于植物病害的生物防治中，取得了較好的經濟和社會效益[4]。枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis）GBO3（美國）、A213（澳大利亞）、RB-14（日本）、B916（中國）、B908（中國）等具有優(yōu)良性狀的菌株已經應用于生產實踐[5]；蠟質芽孢桿菌（Bacillus cereus）菌株BC98-I[6]發(fā)酵液與菌絲粗提物對黃瓜枯萎病菌（Fusarium oxysporium）具有良好抑制作用，可降低孢子萌發(fā)率，使菌絲生長形態(tài)異常，且抑菌特性穩(wěn)定，對外界環(huán)境有很強的適應力和耐受性。目前有關棗黑腐病的生物防治報道較少，陳貽金等[7]將農用鏈霉素（70～140 IU/mL）、DT（50%， 600倍稀釋液）、卡那霉素（140 IU/mL）和土霉素（210 IU/mL）等在棗黑腐病發(fā)病期內混合使用，保果率在90% 以上；李志清等[8]將3%中生菌素（800倍稀釋液）、4%農抗120（400倍稀釋液）和4%雙抗（400倍稀釋液）等與化學農藥甲基托布津等交替使用，防治棗黑腐病效果也較好，但利用芽孢桿菌（Bacillus spp.）開發(fā)防治棗黑腐病生防制劑的研究鮮見報道。為尋找棗果實病害無公害防治的新途徑，本研究以莖點霉菌（Phoma sp.）為靶標，對前期自土壤中分離獲得的10株具抗真菌活性的芽孢桿菌菌株進行了室內多重篩選和發(fā)酵培養(yǎng)基及發(fā)酵條件優(yōu)化試驗，為后續(xù)研究奠定基礎。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 靶標菌 贊皇大棗黑腐病主要病原菌莖點霉菌，從山西省石樓縣患贊皇大棗黑腐病的病果中分離獲得，由山西大學應用化學研究所實驗室分離鑒定。

1.2 拮抗芽孢桿菌的多重篩選

1.2.1 病原菌培養(yǎng)

芽孢桿菌屬細菌，因具有生長速度快、營養(yǎng)需求簡單、有較強的耐熱性及抗逆性、在植物表面易于存活與繁殖、對人畜無害、不污染環(huán)境、制劑穩(wěn)定、施用方便等優(yōu)點[13]而備受關注。一些芽孢桿菌菌株已經開發(fā)成生物農藥投入到植物病害的防治中。本研究篩選獲得的芽孢桿菌B01雖然在室內篩選中表現出了良好的抑菌效果，具有作為生物農藥的潛力，但還需對其田間效果作進一步試驗研究。此外，還需對該菌株進行鑒定及抑菌有效組分分離、理化性質測定、劑型研制、安全性試驗等方面的研究工作，為開發(fā)具有實際應用價值的生物農藥奠定基礎。

參考文獻：

[1] 及 華，關軍鋒，竇世娟，等.采后贊皇大棗不同包裝處理的生理生化性狀差異[J].果樹學報，2004，21（6）：540-543.

[2] 趙叢枝. 贊皇大棗采后生理及其貯藏技術研究[D].河北保定： 河北農業(yè)大學，2004.

[3] 李志清，常聚普，程國華，等.棗黑腐病防治技術研究[J].林業(yè)科技通訊，2000（12）：10-12.

[4] 張麗萍，張貴云.微生物農藥研究進展[J].北京農業(yè)科學，2000（4）：22-24.

[5] 李 明，雙 寶，李海濤，等.枯草芽孢桿菌的研究與應用[J].東北農業(yè)大學學報，2009，40（9）：111-114.

[6] 高 芬，馬利平，喬雄梧，等.蠟質芽孢桿菌BC98-I發(fā)酵液與粗提物對黃瓜枯萎病菌的抑菌特性研究[J].中國生態(tài)農業(yè)學報， 2006，14（1）：189-192.

[7] 陳貽金，陳謨林，朱林元.棗縮果病及其防治技術研究[J].林業(yè)科技通訊，1989（8）：3-7.

[8] 李志清，張兆欣，田國忠，等.棗黑腐病田間藥劑防治技術研究[J].中國森林病蟲，2005（5）：3-6.

[9] 沈 萍，范秀容，李廣武.微生物學實驗[M].北京：高等教育出版社，2001.

[10] 林福呈，李德葆.枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis）S9對植物病原真菌的溶菌作用[J].植物病理學報，2003，33（2）：174-177.

[11] 董金甫，李瑤卿.茶多酚抑菌作用的研究[J].茶葉，1992（3）：46-49.

[12] 沈光斌，周明國.水稻白葉枯病菌對噻枯唑的抗藥性監(jiān)測[J].植物保護，2002，28（1）：9-11.

[13] 朱玥妍，劉 姣，杜春梅.芽孢桿菌生物防治植物病害研究進展[J].安徽農業(yè)科學，2012，40（34）：16635-16638.

摘要：以贊皇大棗（Ziziphus jujuba ‘Zanhuang Dazao）黑腐病主要病原菌莖點霉菌（Phoma sp.）為靶標，對分離自土壤中的10株芽孢桿菌（Bacillus spp.）菌株進行室內多重篩選，并通過單因素試驗對篩選獲得的目標菌進行發(fā)酵培養(yǎng)基和發(fā)酵條件優(yōu)化。結果表明，芽孢桿菌菌株B01對靶標菌有明顯而穩(wěn)定的拮抗效果；其最佳發(fā)酵培養(yǎng)基配方為蔗糖

中圖分類：S476；S436.65 文獻標識碼：A 文章編號：0439-8114（2014）04-0809-05

In vitro Multiple Screening of Antagonistic Bacillus against Phoma sp. and Optimizing Its Fermentation Factors

LI Jing-hong，GAO Fen，WANG Jun-hong，WANG Meng-liang

（Institute of Applied Chemistry， Shanxi University， Taiyuan 030006，China）

贊皇大棗（Ziziphus jujuba ‘Zanhuang Dazao）又名金絲大棗，是中國700多個棗品種中惟一的自然三倍體[1]，整齊個大、皮薄肉厚、可食率高、營養(yǎng)豐富，是天然的營養(yǎng)保健食品，具有較高的商品價值[2]。黑腐病是贊皇大棗主要果實病害之一，近幾年來該病害發(fā)生日趨嚴重，一般年份病果率20%～30%，流行年份可達50%以上， 甚至可使棗果絕收[3]，極大地影響了贊皇大棗的產量、果實品質和商品價值。

贊皇大棗作為鮮食加工兼用品種，對防治果實病害的農藥使用具有較高的要求。生物農藥相對于化學農藥具有對環(huán)境、生態(tài)友好，對人類安全、無毒等優(yōu)點，得到了廣泛重視并發(fā)揮著越來越重要的作用，其中多種有益微生物及其代謝產物已成功應用于植物病害的生物防治中，取得了較好的經濟和社會效益[4]?？莶菅挎邨U菌（Bacillus subtilis）GBO3（美國）、A213（澳大利亞）、RB-14（日本）、B916（中國）、B908（中國）等具有優(yōu)良性狀的菌株已經應用于生產實踐[5]；蠟質芽孢桿菌（Bacillus cereus）菌株BC98-I[6]發(fā)酵液與菌絲粗提物對黃瓜枯萎病菌（Fusarium oxysporium）具有良好抑制作用，可降低孢子萌發(fā)率，使菌絲生長形態(tài)異常，且抑菌特性穩(wěn)定，對外界環(huán)境有很強的適應力和耐受性。目前有關棗黑腐病的生物防治報道較少，陳貽金等[7]將農用鏈霉素（70～140 IU/mL）、DT（50%， 600倍稀釋液）、卡那霉素（140 IU/mL）和土霉素（210 IU/mL）等在棗黑腐病發(fā)病期內混合使用，保果率在90% 以上；李志清等[8]將3%中生菌素（800倍稀釋液）、4%農抗120（400倍稀釋液）和4%雙抗（400倍稀釋液）等與化學農藥甲基托布津等交替使用，防治棗黑腐病效果也較好，但利用芽孢桿菌（Bacillus spp.）開發(fā)防治棗黑腐病生防制劑的研究鮮見報道。為尋找棗果實病害無公害防治的新途徑，本研究以莖點霉菌（Phoma sp.）為靶標，對前期自土壤中分離獲得的10株具抗真菌活性的芽孢桿菌菌株進行了室內多重篩選和發(fā)酵培養(yǎng)基及發(fā)酵條件優(yōu)化試驗，為后續(xù)研究奠定基礎。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 靶標菌 贊皇大棗黑腐病主要病原菌莖點霉菌，從山西省石樓縣患贊皇大棗黑腐病的病果中分離獲得，由山西大學應用化學研究所實驗室分離鑒定。

1.2 拮抗芽孢桿菌的多重篩選

1.2.1 病原菌培養(yǎng)

芽孢桿菌屬細菌，因具有生長速度快、營養(yǎng)需求簡單、有較強的耐熱性及抗逆性、在植物表面易于存活與繁殖、對人畜無害、不污染環(huán)境、制劑穩(wěn)定、施用方便等優(yōu)點[13]而備受關注。一些芽孢桿菌菌株已經開發(fā)成生物農藥投入到植物病害的防治中。本研究篩選獲得的芽孢桿菌B01雖然在室內篩選中表現出了良好的抑菌效果，具有作為生物農藥的潛力，但還需對其田間效果作進一步試驗研究。此外，還需對該菌株進行鑒定及抑菌有效組分分離、理化性質測定、劑型研制、安全性試驗等方面的研究工作，為開發(fā)具有實際應用價值的生物農藥奠定基礎。

參考文獻：

[1] 及 華，關軍鋒，竇世娟，等.采后贊皇大棗不同包裝處理的生理生化性狀差異[J].果樹學報，2004，21（6）：540-543.

[2] 趙叢枝. 贊皇大棗采后生理及其貯藏技術研究[D].河北保定： 河北農業(yè)大學，2004.

[3] 李志清，常聚普，程國華，等.棗黑腐病防治技術研究[J].林業(yè)科技通訊，2000（12）：10-12.

[4] 張麗萍，張貴云.微生物農藥研究進展[J].北京農業(yè)科學，2000（4）：22-24.

[5] 李 明，雙 寶，李海濤，等.枯草芽孢桿菌的研究與應用[J].東北農業(yè)大學學報，2009，40（9）：111-114.

[6] 高 芬，馬利平，喬雄梧，等.蠟質芽孢桿菌BC98-I發(fā)酵液與粗提物對黃瓜枯萎病菌的抑菌特性研究[J].中國生態(tài)農業(yè)學報， 2006，14（1）：189-192.

[7] 陳貽金，陳謨林，朱林元.棗縮果病及其防治技術研究[J].林業(yè)科技通訊，1989（8）：3-7.

[8] 李志清，張兆欣，田國忠，等.棗黑腐病田間藥劑防治技術研究[J].中國森林病蟲，2005（5）：3-6.

[9] 沈 萍，范秀容，李廣武.微生物學實驗[M].北京：高等教育出版社，2001.

[10] 林福呈，李德葆.枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis）S9對植物病原真菌的溶菌作用[J].植物病理學報，2003，33（2）：174-177.

[11] 董金甫，李瑤卿.茶多酚抑菌作用的研究[J].茶葉，1992（3）：46-49.

[12] 沈光斌，周明國.水稻白葉枯病菌對噻枯唑的抗藥性監(jiān)測[J].植物保護，2002，28（1）：9-11.

[13] 朱玥妍，劉 姣，杜春梅.芽孢桿菌生物防治植物病害研究進展[J].安徽農業(yè)科學，2012，40（34）：16635-16638.