葉漢深，何本夫

(中國(guó)人民解放軍第421醫(yī)院醫(yī)務(wù)處1、腫瘤科2，廣東廣州510318)

·臨床病理·

ALK、K-ras蛋白表達(dá)與非小細(xì)胞肺癌病理關(guān)系研究

葉漢深1，何本夫2

(中國(guó)人民解放軍第421醫(yī)院醫(yī)務(wù)處1、腫瘤科2，廣東廣州510318)

目的探討ALK、K-ras蛋白表達(dá)與非小細(xì)胞肺癌的病理關(guān)系。方法分別采用免疫組織化學(xué)放大聚合物法、EUvison法檢測(cè)120例NSCLC患者手術(shù)切除石蠟標(biāo)本中ALK、K-ras蛋白的表達(dá)情況，分析ALK和K-ras蛋白的陽性表達(dá)與病理指標(biāo)之間的關(guān)系。結(jié)果本研究中120例患者ALK蛋白陽性表達(dá)17例(14.17%)，ALK蛋白主要位于腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞漿內(nèi)，少數(shù)位于細(xì)胞膜上；K-ras蛋白陽性表達(dá)66例(55.00%)，K-ras蛋白廣泛分布于腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞漿內(nèi)和細(xì)胞膜上；ALK和K-ras蛋白均在抽煙史、病理類型和分化程度分布上差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義：ALK蛋白在有抽煙史的患者中陽性表達(dá)率顯著低于無抽煙史者，在腺癌中陽性表達(dá)率顯著高于鱗癌，在高～中分化癌中陽性表達(dá)率顯著低于低分化癌，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；K-ras蛋白在有抽煙史的患者中陽性表達(dá)率顯著高于無抽煙史者，在腺癌中陽性表達(dá)率顯著高于鱗癌，在高～中分化癌中陽性表達(dá)率顯著高于低分化癌，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。結(jié)論ALK和K-ras蛋白的表達(dá)與NSCLC患者是否有抽煙史、臨床病理類型以及腫瘤分化程度有緊密聯(lián)系。

ALK蛋白；K-ras蛋白；非小細(xì)胞肺癌；病理指標(biāo)

肺癌是臨床常見惡性腫瘤，其中以非小細(xì)胞肺癌(Non-small-cell lung cancer，NSCLC)最為常見[1]。NSCLC治療方法較多，包括手術(shù)、放療、化療以及生物免疫治療等[2]。近幾年對(duì)肺癌發(fā)病機(jī)制的研究不斷取得新進(jìn)展，已有研究指出ALK和K-ras蛋白的表達(dá)與NSCLC的病理指標(biāo)有緊密聯(lián)系，可為分子靶向治療的研究提供參考[3]。本文通過回顧性分析我院收治的120例NSCLC患者ALK和K-ras蛋白的表達(dá)情況，探討ALK和K-ras蛋白的表達(dá)與病理指標(biāo)之間的關(guān)系，報(bào)道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料選取2012年1月至2014年1月我院收治的120例NSCLC患者作為研究對(duì)象。所有患者均經(jīng)常規(guī)病理組織學(xué)檢查及影像學(xué)檢查確診，術(shù)后留取石蠟標(biāo)本。其中男性48例，女性72例，年齡35～80歲，≤55歲者52例，＞55歲者68例，55例有抽煙史。參照2012年第4版《WHO乳腺腫瘤組織學(xué)分類》[4]標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行病理組織學(xué)分型，腺癌73例，鱗癌47例；高～中分化癌77例，低分化癌43例；Ⅰ～Ⅱ期83例，Ⅲ～Ⅳ期37例；61例有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。

1.2 方法

1.2.1 檢測(cè)方法分別采用免疫組織化學(xué)放大聚合物法、EUvison法檢測(cè)所有患者手術(shù)切除石蠟標(biāo)本中ALK、K-ras蛋白的表達(dá)情況[5]。ALK蛋白檢測(cè)選用已診斷ALK陽性的間變性大細(xì)胞淋巴瘤患者的石蠟標(biāo)本組織切片做陽性對(duì)照；K-ras蛋白檢測(cè)選用已診斷K-ras蛋白陽性的結(jié)腸癌患者的石蠟標(biāo)本組織切片做陽性對(duì)照；陰性對(duì)照一律選用磷酸鹽緩沖液(PBS)代替一抗，即用型鼠抗人ALK蛋白單克隆抗體(CD246)和兔抗人K-ras蛋白單克隆抗體(ab84573)以及相關(guān)試劑盒，均購(gòu)自美國(guó)Sigma公司，實(shí)驗(yàn)操作按照試劑盒說明進(jìn)行。

1.2.2 免疫組織化學(xué)結(jié)果判定ALK和K-ras蛋白的表達(dá)陽性判定標(biāo)準(zhǔn)：腫瘤細(xì)胞胞槳和(或)細(xì)胞膜出現(xiàn)棕黃色顆粒[6]。陽性程度判斷標(biāo)準(zhǔn)：0分：腫瘤細(xì)胞不顯色或顯色(+)細(xì)胞所占比例低于10%；1分：顯色(+)且顯色細(xì)胞所占比例為10%～30%，或顯色(++)～(+++)且顯色細(xì)胞所占比例低于10%；2分：顯色(+)且顯色細(xì)胞所占比例超過30%，或顯色(++)～(+++)且顯色細(xì)胞所占比例為10%～30%；3分：顯色(++)～(+++)且顯色細(xì)胞所占比例超過30%[7]。0分為陰性，＞1分為陽性。

1.3 觀察指標(biāo)記錄ALK和K-ras蛋白的表達(dá)情況，分析ALK和K-ras蛋白的陽性表達(dá)與病理指標(biāo)之間的關(guān)系。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法應(yīng)用SPSS17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，以P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 ALK和K-ras蛋白的表達(dá)情況120例患者中ALK蛋白陽性表達(dá)17例(14.17%)，ALK蛋白主要位于腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞漿內(nèi)，少數(shù)位于細(xì)胞膜上(見圖1)； K-ras蛋白陽性表達(dá)66例(55.00%)，K-ras蛋白廣泛分布于腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞漿內(nèi)和細(xì)胞膜上(見圖2)。

圖1 ALK蛋白在肺腺癌(a)、肺鱗癌(b)中的陽性表達(dá)(×100)

圖2 K-ras蛋白在肺腺癌(a)、肺鱗癌(b)的陽性表達(dá)(×100)

2.2 ALK和K-ras蛋白的陽性表達(dá)與病理指標(biāo)間相關(guān)性分析ALK和K-ras蛋白均在抽煙史、病理類型和分化程度分布上差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義：ALK蛋白在有抽煙史的患者中陽性表達(dá)率顯著低于無抽煙史者，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；ALK蛋白在腺癌中陽性表達(dá)率顯著高于鱗癌，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；ALK蛋白在高～中分化癌中陽性表達(dá)率顯著低于低分化癌，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；K-ras蛋白在有抽煙史的患者中陽性表達(dá)率顯著高于無抽煙史者，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；K-ras蛋白在腺癌中陽性表達(dá)率顯著高于鱗癌，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；K-ras蛋白在高～中分化癌中陽性表達(dá)率顯著高于低分化癌，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，見表1。

表1 ALK和K-ras蛋白的陽性表達(dá)與病理指標(biāo)間相關(guān)性分析[例（%）]

3 討論

肺癌是全球發(fā)病率和死亡率較高的惡性腫瘤，其中NSCLC占大多數(shù)。臨床研究表明，60%以上的NSCLC患者確診時(shí)病情已進(jìn)展至中晚期，導(dǎo)致NSCLC患者總體預(yù)后較差，生存期較短[8]。NSCLC的傳統(tǒng)治療方法較多，包括手術(shù)治療、放療、化療及生物免疫治療等，隨著近幾年腫瘤發(fā)病機(jī)制研究中不斷取得新進(jìn)展，分子靶向治療以其特異性強(qiáng)、藥物毒性反應(yīng)輕、患者耐受性好等優(yōu)點(diǎn)已經(jīng)逐漸成為了臨床研究的熱點(diǎn)[9]。多數(shù)NSCLC患者表達(dá)EGFR及其天然配體，而針對(duì)表皮生長(zhǎng)因子受體(Epidermal growth factor receptor，EGFR)的酪氨酸激酶抑制劑(Tyrosine kinase inhibitors，TKIs)，在臨床治療中取得了良好效果[10]。但也有部分藥物如吉非替尼等在二線和三線治療中效果并不能令人滿意，部分學(xué)者指出可能與EGFR下游基因ALK、ras的表達(dá)及突變有關(guān)[11]。

ALK基因位于2號(hào)常染色體短臂(p23)，編碼屬于胰島素受體超家族的ALK蛋白(跨膜蛋白)，定位于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)和細(xì)胞膜上，主要功能為結(jié)合配體的膜外區(qū)、跨膜區(qū)和富含酷氨酸激酶的膜內(nèi)區(qū)組成[12]。ALK蛋白能夠活化下游的STAT3和MAPK信號(hào)傳導(dǎo)通路，也可激活RAS/ERK、PI3K/AKT等多條其他的細(xì)胞通路，具有調(diào)控胞增殖和調(diào)亡的作用。該蛋白可與棘皮動(dòng)物微管相關(guān)蛋白樣4(Echinoderm microtubule-associated protein-like 4，EML4)發(fā)生融合突變，具有導(dǎo)致細(xì)胞發(fā)生惡變的潛能。

ras基因能夠在多種腫瘤中表達(dá)和發(fā)生突變，也可在Ras/Raf/MEK/ERK通路的激活過程中直接發(fā)揮作用[13]。ras基因中K-ras基因與NSCLC的發(fā)生有密切聯(lián)系，該基因位于12號(hào)染色體(p21)，編碼屬于磷蛋白，定位于細(xì)胞質(zhì)膜內(nèi)面，主要功能為接受和傳遞細(xì)胞外生長(zhǎng)刺激信號(hào)而對(duì)細(xì)胞內(nèi)核酶等生物大分子合成產(chǎn)生印象，從而控制細(xì)胞的生長(zhǎng)和分化[14]。K-ras基因突變可引起p21蛋白關(guān)鍵位點(diǎn)的氨基酸改變，導(dǎo)致K-ras蛋白表達(dá)出現(xiàn)異常，從增加癌細(xì)胞的增生和浸潤(rùn)能力，加劇了NSCLC的惡性程度[15]。

本研究結(jié)果顯示，ALK和K-ras蛋白均在抽煙史、病理類型和分化程度分布上差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示兩種蛋白的表達(dá)與患者抽煙史、病理類型及腫瘤分化程度有緊密聯(lián)系。而ALK和K-ras蛋白在性別、年齡、臨床分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移分布上差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示性別、年齡不是影響ALK和K-ras蛋白表達(dá)的因素，而ALK和K-ras蛋白的表達(dá)也不會(huì)對(duì)NSCLC分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移產(chǎn)生明顯影響。但ALK和K-ras基因表達(dá)和突變對(duì)NSCLC患者治療及預(yù)后的影響本研究尚未進(jìn)行深入探究，有待進(jìn)行大量研究和總結(jié)。

總之，ALK和K-ras蛋白的表達(dá)與NSCLC患者是否有抽煙史、臨床病理類型以及腫瘤分化程度有緊密聯(lián)系，能夠?yàn)榉肿影邢蛑委熖峁┲匾獏⒖家罁?jù)。

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Pathological relationship between expression of ALK,K-ras protein and non-small cell lung cancer.

YE Han-shen1,HE Ben-fu2.Department of Medical Affairs1,Department of Oncology2,the 421stHospital of Chinese PLA, Guangzhou 510318,Guangdong,CHINA

ObjectiveTo explore the pathological relationship between expression of ALK,K-ras protein and non-small cell lung cancer.MethodsOne hundred and twenty patients with non-small cell lung cancer were enrolled. The expression of ALK,K-ras protein was tested by immunohistochemical method of polymer,EUvison.The relationship between positive expression and pathological features forALK,K-ras expression were analyzed.ResultsOf the 120 cases,17 were ALK positive(14.17%).The ALK were located in the cytoplasm of tumor cells,a few were located in cytomembrane.66 cases were found with K-ras positive(55.00%).The K-ras were located in the cytoplasm of tumor cells and cytomembrane.The expression of ALK and K-ras showed significant difference in smoking history,pathological pattern, degrees of differentiation(P＜0.05).The positive expression rate of ALK protein was lower in patients with smoking history than those without history of smoking,in squamous cell carcinoma than adenocarcinoma,in highly and moderately differentiated carcinoma than poorly differentiated adenocarcinoma(P＜0.05).The positive expression rate of K-ras was higher in patients with smoking history than those without history of smoking,in adenocarcinoma than squamous cell carcinoma,in highly and moderately differentiated carcinoma than poorly differentiated adenocarcinoma(P＜0.05).ConclusionThe expression of ALK,K-ras protein has a close relationship with history of smoking,pathological features and tumor differentiation degree.

ALK protein;K-ras protein;Non-small cell lung cancer;Pathological index

R734.2

A

1003—6350（2014）20—3086—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2014.20.1211

2014-08-07)

廣東省科技計(jì)劃項(xiàng)目(編號(hào)：2009B030801007)

葉漢深。E-mail：yehanshen2014@163.com