姚冬穎，張華英，許欣

(河北醫(yī)科大學(xué)附屬邢臺市人民醫(yī)院病理科，河北邢臺054031)

Fascin在大腸癌中的表達(dá)及其與預(yù)后的關(guān)系

姚冬穎，張華英，許欣

(河北醫(yī)科大學(xué)附屬邢臺市人民醫(yī)院病理科，河北邢臺054031)

目的探討Fascin在大腸癌組織中的表達(dá)及臨床意義。方法采用免疫組化Elivision法檢測Fascin蛋白在130例大腸癌組織和30例大腸正常組織中的表達(dá)情況，分析其與臨床病理特征的關(guān)系及對患者預(yù)后的影響。結(jié)果Fascin蛋白在大腸癌組織中的陽性率為54.6%，明顯高于正常大腸組織中的陽性率(16.7%)。在大腸癌中，F(xiàn)ascin蛋白的表達(dá)與組織學(xué)分級、漿膜侵犯、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及臨床分期有關(guān)(P＜0.05)，與患者的年齡、性別及腫瘤大小無關(guān)(P＞0.05)。多因素Cox回歸分析顯示：淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期及Fascin蛋白表達(dá)為影響患者預(yù)后的獨(dú)立危險因素(P＜0.05)。Kaplan-Meier生存曲線顯示，F(xiàn)ascin蛋白的陽性表達(dá)組的生存時間低于陰性組(P＜0.05)。結(jié)論Fascin蛋白的表達(dá)上調(diào)可能促進(jìn)大腸癌的侵襲轉(zhuǎn)移，對評價大腸癌的生物學(xué)行為和預(yù)后具有一定的參考價值。

結(jié)直腸腫瘤；Fascin；免疫組織化學(xué)；預(yù)后

大腸癌是一種常見的惡性腫瘤，早期不易發(fā)現(xiàn)，侵襲和轉(zhuǎn)移是導(dǎo)致大腸癌患者死亡主要因素。Fascin是一種細(xì)胞骨架蛋白，能與F-肌動蛋白結(jié)合，加強(qiáng)細(xì)胞的運(yùn)動能力，在細(xì)胞遷移、細(xì)胞粘附以及細(xì)胞間信息交流等過程中發(fā)揮作用[1]。本研究試圖通過檢測大腸癌中Fascin蛋白的表達(dá)情況，探討其在腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移中的作用，分析其與患者預(yù)后的關(guān)系，希望為臨床治療和預(yù)后判斷提供新的參考指標(biāo)。

1 材料與方法

1.1 一般資料選取我院2006年1月至2008年2月期間130例大腸癌石蠟組織標(biāo)本，均有完整的臨床和病理資料，患者術(shù)前均未接受過任何抗腫瘤治療。男性70例，女性60例；年齡37～83歲，中位年齡56歲；腫瘤直徑小于4 cm者51例，大于4cm者79例；組織學(xué)分級高-中分化77例，低分化53例；未侵及漿膜39例，侵及漿膜91例；淋巴結(jié)無轉(zhuǎn)移82例，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移48例；Dukes分期A+B期72例，C+D期48例。取30例大腸正常組織作為對照(距腫瘤5 cm以上)。所有標(biāo)本均采用常規(guī)取材，福爾馬林液固定，石蠟包埋。

1.2 方法免疫組織化學(xué)采用Elivision兩步法，鼠抗人Fascin單克隆抗體及Elivision免疫組化試劑盒購于福州邁新生物技術(shù)有限公司，磷酸鹽緩沖液(PBS)及APES防脫片劑購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。主要步驟：4 μm厚連續(xù)切片，常規(guī)脫蠟至水，檸檬酸鹽緩沖液高溫修復(fù)，3%H2O2溶液阻斷內(nèi)源性過氧化物酶活性，PBS漂洗3×5 min，滴加一抗，濕盒內(nèi)4℃過夜，PBS漂洗3×5 min，滴加聚合物增強(qiáng)劑，滴加酶標(biāo)抗鼠/兔聚合物，3，3-二氨基聯(lián)笨胺DAB顯色，蘇木精襯染，鹽酸酒精分化，梯度酒精脫水、二甲苯透明、中性樹膠封片。用PBS代替一抗作為空白陰性對照，試劑公司提供的陽性切片作為陽性對照。

1.3 結(jié)果判定采用雙盲閱片，隨機(jī)計數(shù)5個高倍視野，共計數(shù)1 000個瘤細(xì)胞，先按染色強(qiáng)度評分：0分為無色，1分為淡黃色，2分為棕黃色，3分為棕褐色，再按細(xì)胞百分比評分：1分為陽性細(xì)胞＜25%，2分為陽性細(xì)胞25%～50%，3分為陽性細(xì)胞51%～75%，4分為陽性細(xì)胞＞75%，最后將兩者相乘：0～3分為陰性，4分以上為陽性[2]。

1.4 隨訪通過電話或信件對患者進(jìn)行隨訪獲取生存或死亡信息，隨訪截止日期為2013年4月，生存時間的計算從手術(shù)日期到隨訪截止日期，或由于復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移而死亡的日期為止。本組患者死亡91例，截尾39例，生存時間為22～80個月。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法應(yīng)用SPSS19.0軟件進(jìn)行分析，組間表達(dá)率的比較采用χ2檢驗，Kaplan-Meier法繪制生存曲線，組間比較用Log-rank檢驗，多因素Cox模型進(jìn)行回歸分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 大腸癌組織和正常大腸組織中Fascin蛋白的表達(dá)Fascin蛋白在大腸癌中主要表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)，少量表達(dá)于細(xì)胞膜(見圖1)，在大腸正常組織中僅少量微弱表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)(見圖2)。Fascin蛋白在130例大腸癌組織中有71例呈陽性表達(dá)，陽性表達(dá)率為54.6%，30例大腸正常組織中僅5例呈陽性表達(dá)，陽性表達(dá)率為16.7%，組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=14.076，P＜0.01)。

圖1 大腸癌組織中Fascin蛋白呈陽性表達(dá)（IHC 200×）

圖2 大腸正常組織中Fascin蛋白呈陰性表達(dá)（IHC 200×）

2.2 大腸癌組織中Fascin蛋白的表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系Fascin蛋白的表達(dá)與組織學(xué)分級、漿膜侵犯、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、Dukes分期有相關(guān)性，低分化組高于高中分化組，侵及漿膜組高于未侵及漿膜組，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組，Dukes分期為C+ D期組高于A+B期組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。Fascin蛋白的表達(dá)與患者的年齡、性別和腫瘤大小無明顯相關(guān)性(P＞0.05)，見表1。

表1 大腸癌Fascin的表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系（例）

2.3 大腸癌臨床病理特征與患者生存時間的關(guān)系用Kaplan-Meier法經(jīng)Log-rank檢驗行單因素分析顯示，組織學(xué)分級(χ2=21.276，P＜0.05)、漿膜侵犯(χ2=12.842，P＜0.05)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(χ2=32.196，P＜0.01)、Dukes分期(χ2=38.783，P＜0.05)和Fascin的表達(dá)情況(χ2=35.538，P＜0.05)與大腸癌患者的生存時間有關(guān)。

2.4 影響患者生存時間的多因素Cox分析將經(jīng)單因素分析出的的各個因素進(jìn)行Cox多因素分析，結(jié)果顯示淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、Dukes分期及Fascin的表達(dá)(P＜0.05)為影響患者生存時間的獨(dú)立危險因素，見表2。

表2 多因素Cox回歸分析結(jié)果

2.5 大腸癌組織中Fascin蛋白的表達(dá)與生存時間的關(guān)系Fascin蛋白的陽性表達(dá)組的五年生存率為32.4%(23/71)，陰性表達(dá)組的五年生存率為69.5% (41/59)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。繪制Kaplan-Meier生存曲線，F(xiàn)ascin蛋白的陽性表達(dá)組的中位生存時間為42個月，陰性表達(dá)組的中位生存時間為71個月。經(jīng)Log-rank檢驗發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)ascin蛋白的陽性表達(dá)組生存期顯著低于陰性組(P＜0.05)，見圖3。

圖3 大腸癌患者的生存曲線

3 討論

侵襲、轉(zhuǎn)移行為是惡性腫瘤的重要致死原因。腫瘤浸潤包括粘附、溶解和移動等過程。腫瘤細(xì)胞需經(jīng)歷從原發(fā)灶破裂脫落、細(xì)胞粘附并穿過基底膜、細(xì)胞向遠(yuǎn)處移動進(jìn)入周圍組織或進(jìn)入血液循環(huán)及淋巴系統(tǒng)[3]。

人類Fascin基因是定位于染色體7q22，編碼一種分子量為55 kDa的細(xì)胞骨架蛋白，又稱為聚束蛋白，定位于細(xì)胞質(zhì)張力纖維和細(xì)胞膜皺褶邊緣的絲狀偽足、微棘的核心肌動蛋白束中，細(xì)胞的絲狀偽足和微棘與細(xì)胞的運(yùn)動、癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移有密切關(guān)系[4-5]。Fascin蛋白可以增多細(xì)胞膜表面突起，改變細(xì)胞骨架、細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)的粘附，降低細(xì)胞間聯(lián)系的完整性，以及通過細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路等途徑加快細(xì)胞的遷移，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移[7]。近年來的研究發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)ascin蛋白在不同類型的細(xì)胞中表達(dá)不一樣，在正常上皮細(xì)胞中不表達(dá)或低表達(dá)，在多種惡性腫瘤中高表達(dá)，與腫瘤的浸潤轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，且影響預(yù)后[7]。Takikita等[8]研究發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)ascin在食管正常組織、異常增生組織和鱗狀細(xì)胞癌組織中的表達(dá)率分別為26%、46%、48%，呈逐漸升高的趨勢，說明其過表達(dá)在食管癌的惡性進(jìn)程中可能發(fā)揮作用。Kim等[9]研究了胃癌的組織標(biāo)本，結(jié)果Fascin在腫瘤組織分化低、有局部浸潤和遠(yuǎn)處淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的病例中表達(dá)更高，且患者的術(shù)后生存時間更短，說明Fascin的表達(dá)情況可用于判斷患者的預(yù)后。

本實驗結(jié)果顯示，F(xiàn)ascin蛋白在大腸癌組織中的表達(dá)明顯高于其在大腸正常組織中的表達(dá)，提示Fascin蛋白的表達(dá)可能促進(jìn)了大腸癌的發(fā)生。本研究還表明，F(xiàn)ascin蛋白的表達(dá)情況與腫瘤惡性程度相關(guān)指標(biāo)如組織學(xué)分級、漿膜侵犯、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期有關(guān)，在低分化組的表達(dá)高于高中分化組、有漿膜浸潤組的表達(dá)高于無漿膜浸潤組，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組，Dukes C+D期高于Dukes A+B期，提示Fascin蛋白的表達(dá)在大腸癌的局部浸潤和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮了促進(jìn)作用。推測Fascin蛋白可能參與了大腸癌的惡性轉(zhuǎn)化進(jìn)程，改變了大腸癌細(xì)胞骨架結(jié)構(gòu)，提高了其運(yùn)動能力，使之具有更高的侵襲性和轉(zhuǎn)移傾向。對患者進(jìn)行隨訪獲取生存時間，Cox分析顯示淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、Dukes分期及Fascin的表達(dá)為影響大腸癌患者預(yù)后的獨(dú)立危險因素。Kaplan-Meier生存曲線顯示Fascin蛋白的陽性表達(dá)組生存時間顯著低于陰性組。這一結(jié)果與Jung等[10]的研究一致。因此，檢測Fascin對于判斷腫瘤的惡性程度和評估患者預(yù)后具有重要的參考價值。

總之，本實驗結(jié)果提示Fascin的高表達(dá)可能在大腸癌的發(fā)生發(fā)展和浸潤轉(zhuǎn)移中發(fā)揮作用，進(jìn)一步研究Fascin在大腸癌中的作用機(jī)制，有望為腫瘤的基因治療開辟新的途徑。

參考資料：

[1]Hashimoto Y,Kim DJ,Adams JC.The roles of fascins in health and disease[J].J Pathol,2011,224(3):289-300.

[2]許良中,楊文濤.免疫組織化學(xué)反應(yīng)結(jié)果的判斷標(biāo)準(zhǔn)[J].中國癌癥雜志,1996,6(4):229-231.

[3]Alam H,Bhate AV,Gangadaran P,et al.Fascin overexpression promotes neoplastic progression in oral squamous cell carcinoma[J]. BMC Cancer,2012,12:32.

[4]Ono S,Yamakita Y,Yamashiro S,et al.Identification of an actin binding region and a protein kinase C phosphorylation site on human fascin[J].J Biol Chem,1997,272(4):2527-2533.

[5]Adams JC,Clelland JD,Collett GD.Cell-matrix adhesions differentially regulate fascin phosphorylation[J].Mol Biol Cell,1999,10 (12):4177-4190.

[6]張寧,沈洋.Fascin蛋白在腫瘤中的研究現(xiàn)狀和進(jìn)展[J].現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志,2011,20(21):2723-2725.

[7]Machesky LM,Li A.Fascin:invasive filopodia prmomting metastasis[J].Commun Integr Biol,2010,3(3):263-270.

[8]Takikita M,Hu N,Shou JZ,et al.Fascin and CK4 as biomarkers for esophageal squamous cell carcinoma[J].Anticancer Res,2011,31 (3):945-952.

[9]Kim SJ,Kim DC,Kim MC,et al.Fascin expression is related to poor survival in gastric cancer[J].Pathol Int,2012,62(12): 777-784.

[10]Jung EJ,Lee JH,Min BW,et al.Clinicopathologic significance of fascin,extracellular matrix metalloproteinase inducer,and ezrin expressions in colorectal adenocarcinoma[J].Indian J Pathol Microbiol,2011,54(1):32-36.

Expression of Fascin in colorectal carcinoma and its correlation with prognosis.

YAO Dong-ying,ZHANG Hua-ying,XU Xin.Department of Pathology,Xingtai People's Hospital Affiliated to Hebei Medical University,Xingtai 054031,Hebei,CHINA

ObjectiveTo investigate the expression and clinical significance of Fascin in colorectal carcinoma.MethodsWith Elivision immunohistochemistry,the expression of Fascin was detected in 130 patients of colorectal carcinoma and 30 patients of normal tissue.Its clinicopathological characteristics and prognostic significance was analyzed.ResultsThe positive expression rate of Fascin was 54.6%in colorectal carcinoma,which was significantly higher than that 16.7%in normal tissus.In colorectal carcinoma,the expression of Fascin was correlated with degree of differentiation,serosal invasion,lymph node metastasis and dukes stage,and irrelevant with age,gender,size of tumor.Multivariate Cox regression analysis showed that lymph node metastasis,dukes stage and Fascin over expression were independent risk factors affecting the prognosis of patients.The plotted survival curves by the Kaplan-Meier method demonstrated that overall survival was significantly shorter in patients with high expression than in patients with low expression of Fascin protein.ConclusionThe expression of Fascin may ultimately promote tumor invasion and metastasis of colorectal carcinoma.It can be used as important parameters for judgement of biological behavior and prognosis.

Colorectal neoplasms;Fascin；Immunohistochemistry;Prognosis

R735

A

1003—6350（2014）20—3089—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2014.20.1212

2014-03-03)

姚冬穎。E-mail：yaodongying11@126.com