毛柯，陳寧，盧定強

南京工業(yè)大學(xué) 1藥學(xué)院；2江蘇省藥物研究所，南京 211800

坎地沙坦酯氨氯地平片含量測定

毛柯1，2，陳寧2*，盧定強1，2

南京工業(yè)大學(xué)1藥學(xué)院；2江蘇省藥物研究所，南京 211800

建立HPLC法同時測定坎地沙坦酯氨氯地平片兩組分含量。色譜條件：采用C18色譜柱，流動相為甲醇-乙腈-20 mmol·L-1癸烷磺酸鈉溶液[含0.04 mol·L-1KH2PO4（磷酸調(diào)pH 3.5）]=600∶100∶300，檢測波長238 nm。坎地沙坦酯和氨氯地平分別在64.61～96.91 μg·mL-1、40.13～60.19 μg·mL-1濃度范圍內(nèi)雜質(zhì)與原藥較好分離。

高效液相色譜法；坎地沙坦酯；氨氯地平；含量測定

坎地沙坦酯氨氯地平片是由日本武田公司開發(fā)的治療高血壓的復(fù)方制劑，其主要組分為坎地沙坦酯和苯磺酸氨氯地平，于2010年4月在日本批準(zhǔn)上市，商品名為“UNISIA”。本品為血管緊張肽Ⅱ受體阻斷藥和鈣離子拮抗藥的組合，能夠大大提高降壓達標(biāo)率，長期接受治療的安全性和耐受性顯著提高[1]。有文獻報道[2]同時測定坎地沙坦酯、氨氯地平含量，但是分析時間過長（約90 min）；本實驗在17 min內(nèi)即可完成測定，且具有較高的專屬性。

1 儀器與試藥

LC-20A型高效液相色譜儀，LC-Solution型色譜工作站（日本島津）。

坎地沙坦酯對照品（純度：100.0%，批號：100685-200401）、苯磺酸氨氯地平對照品（純度：99.67%，批號：100374-200903）均由中國藥品生物制品檢定所提供；坎地沙坦酯氨氯地平片（自制，批號：110301、110302、110303，規(guī)格：每片含坎地沙坦酯8 mg，氨氯地平5 mg）；坎地沙坦酯雜質(zhì)A、B、C、D、E、F由Toronto Research Chemicals Inc提供；氨氯地平雜質(zhì)A由USP Rockville提供。甲醇、乙腈為色譜純；其它試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 溶液配制

對照品溶液：精密稱取坎地沙坦酯和苯磺酸氨氯地平對照品20.19 mg和17.39 mg，置100 mL量瓶中，加60%乙腈適量，超聲使溶解，放至室溫，加60%乙腈稀釋至刻度，搖勻，得兩者濃度分別為201.9 μg·mL-1和173.9 μg·mL-1的對照品儲備液。精密量取對照品儲備液4 mL，置100 mL量瓶中，加60%乙腈定容，搖勻，制成濃度分別為80.76 μg·mL-1和50.16 μg·mL-1的對照品溶液。

供試品溶液：取本品20片，研細(xì)，精密稱取細(xì)粉適量（約1片量），置100 mL量瓶中，加60%乙腈適量，超聲處理15 min，放至室溫，加60%乙腈稀釋至刻度，搖勻，過濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

空白溶液：精密稱取處方量的空白輔料適量，按供試品溶液制備方法操作，制成空白溶液。

2.2 色譜條件及系統(tǒng)適用性

色譜柱Inertsil ODS-SP C18（150 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：甲醇-乙腈-20 mmol·L-1癸烷磺酸鈉溶液[含0.04 mol·L-1磷酸二氫鉀（磷酸調(diào)pH 3.5）]= 600∶100∶300；柱溫：35℃；檢測波長：238 nm；流速1.0 mL·min-1；進樣量：20 μL。

取空白溶液、對照品溶液和供試品溶液，在上述條件下進樣，坎地沙坦酯和氨氯地平分離完全，空白輔料不干擾測定，理論板數(shù)按兩者峰計均大于8000。見圖1。

圖1 對照品溶液（A）和供試品溶液（B）HPLC圖譜

2.3 專屬性試驗

取坎地沙坦酯、苯磺酸氨氯地平，坎地沙坦酯雜質(zhì)A、B、C、D、E、F，氨氯地平雜質(zhì)A適量，用60%乙腈配制成混合溶液，各雜質(zhì)的濃度為對應(yīng)主藥濃度的20%。結(jié)果表明，各雜質(zhì)均不干擾主峰測定。見圖2。

圖2 專屬性HPLC圖譜

2.4 線性關(guān)系考察

分別精密量取坎地沙坦酯、氨氯地平對照品儲備液3.2、3.6、4.0、4.4、4.8 mL，各置10 mL量瓶中，加60%乙腈稀釋至刻度，搖勻。制成坎地沙坦酯濃度為64.61、72.68、80.76、88.84、96.91 μg·mL-1，氨氯地平濃度為40.13、45.14、50.16、55.18、60.19 μg·mL-1的溶液，分別進樣測定。以濃度C為橫坐標(biāo)，以各組分峰面積A為縱坐標(biāo)，進行線性回歸，得回歸方程為坎地沙坦酯：A=3.76×104C+7.20×104，r=0.9993；氨氯地平：A=5.32×104C+5.41×104，r=0.9993。結(jié)果表明，坎地沙坦酯、氨氯地平分別在64.61～96.91 μg·mL-1、40.13～60.19 μg·mL-1濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.5 進樣精密度、重復(fù)性和穩(wěn)定性試驗

取對照品溶液，連續(xù)進樣5次，計算得坎地沙坦酯、氨氯地平峰面積的RSD為0.045%和0.038%。

精密稱取同批號（110301）樣品，共6份，按供試品溶液制備方法操作，分別進樣測定，計算得坎地沙坦酯、氨氯地平含量的RSD為0.58%和0.72%。

取供試品溶液，室溫放置，分別于0、2、4、6、8 h進樣，計算得坎地沙坦酯、氨氯地平峰面積的RSD為0.61%和0.57%，結(jié)果表明本品溶液在8h內(nèi)穩(wěn)定。

2.6 回收率試驗

按照處方量的20倍，精密稱取處方量的空白輔料適量，分別精密加入坎地沙坦酯、氨氯地平對照品適量，按處方比例，制成相當(dāng)于標(biāo)示量80%、100%和120%的樣品粉末，各3份，按供試品溶液制備方法操作，進樣測定，計算得兩者的平均回收率為99.94%和100.1%，RSD為1.06%和1.37%。

2.7 樣品含量測定

取對照品溶液及3批供試品溶液，分別進樣測定，按外標(biāo)法計算樣品含量，3批樣品中坎地沙坦酯、氨氯地平的標(biāo)示含量（%）分別為99.85、100.1、100.3和99.21、99.74、99.83。

3 討論

3.1 流動相的選擇。由于坎地沙坦酯、氨氯地平極性差別較大，為使兩者保留時間不要相差過大，在本流動相中添加了離子對試劑，使氨氯地平在有機相比例較高的條件下增加保留。

3.2 專屬性考察。在JP16版中坎地沙坦酯片有關(guān)物質(zhì)中以RRT方式提到了5個坎地沙坦酯雜質(zhì)，經(jīng)定性，分別為坎地沙坦酯雜質(zhì)B、C、D、E、F；USP35版中苯磺酸氨氯地平片有關(guān)物質(zhì)中提到了氨氯地平有關(guān)物質(zhì)A，這些特異性雜質(zhì)在本含量測定條件下均不干擾坎地沙坦酯和氨氯地平的測定。在本品的初步穩(wěn)定性考察中，觀察到這幾個特異性雜質(zhì)是其主要降解產(chǎn)物。

[1] 李勇.2007歐洲高血壓指南——聯(lián)合抗高血壓藥物治療應(yīng)成為普遍適用臨床策略[J].心血管病學(xué)進展，2007，28（6）：847.

[2] 趙曉妍，李麗.坎地沙坦酯氨氯地平片中兩種組分的含量測定[J].醫(yī)藥導(dǎo)報，2012，31（9）：1203-5.

Content Determination of Candesartan Cilexetil and Amlodipine Tablets by HPLC

MAO Ke1,2,CHEN Ning2*,LU Ding-qiang1,2
1School of Pharmaceutical Sciences;2Jiangsu Province Institute of Materia Medica,Nanjing University of Technology,Nanjing 211800,China

An HPLC method was established for the content determination of candesartan cilexetil and amlodipine tablets.A C18column was used with the mobile phase of methanol-acetonitrile-20mmol·L-1sodium decane-1-sulfonate with 0.04mol·L-1potassium dihydrogen phoshate(pH adjusted to 3.5 with phosphoric acid)-(600∶100∶300)at the detection wavelength of 238nm.This method showed to be specific with better separation of the original drugs from impurities and main degradation products.The calibration curves of candesartan cilexetil and amlodipine were linear in the ranges of 64.61～96.91 μg·mL-1and 40.13～60.19 μg·mL-1,respectively.

RP-HPLC;Candesartan cilexetil;Amlodipine;Determination

R927.2

A

1673-7806（2014）03-226-02

毛柯，女，研究實習(xí)員 E-mail:maoke0216@126.com

*通訊作者 陳寧，女，副研究員 E-mail:chening9317@163.com

2014-02-27

2014-03-19