摘要：目的 建立加味逍遙丸中芍藥苷含量的測定方法。方法 采用HPLC，流動相為乙腈-0.1%磷酸溶液（13：87），流速為1.0mL/min，檢測波長為230am，柱溫為室溫。結(jié)果 芍藥苷在0.1184～1.0656μg范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好，r=0.9998，平均回收率為99.02%，RSD為1.07%。HPLC法定了芍藥苷的含量。結(jié)論 鑒別方法重復性好，專屬性強；含量測定方法簡便、準確。

關(guān)鍵詞：加味逍遙丸；芍藥苷；高效液相；含量測定

加味逍遙丸為柴胡，當歸，白芍，茯苓，甘草，牡丹皮，梔子（姜炙），薄荷，白術(shù)（麩炒）九味中藥材組成的復方制劑，其功能主治為疏肝清熱，健脾養(yǎng)血。用于肝郁血虛，肝脾不和，兩脅脹痛，頭暈目眩，倦怠食少，月經(jīng)不調(diào)，臍腹脹痛。收載于中國藥典中，在該標準中采用HPLC法測定芍藥苷的含量。

1 儀器與試藥

高效液相色譜儀：儀器型號Lab Alliance；檢測器：Model 500； 泵：Series III；色譜工作站：ANASTAR；Agilent C18柱：5μm ，4.6×250mm AB135-S電子天平 ；Model C3860A 超聲波儀（上海超聲儀器廠）；島津UV260紫外分光光度計（日本島津公司）。對照品：芍藥苷對照品，中國藥品生物制品檢定所，批號：110736-201132。試劑：乙腈為色譜純；水為二次蒸餾水；其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1色譜條件 色譜柱：十八烷基硅烷鍵合硅膠柱（5μm，4.6×250mm）；流動相：乙腈一0.1%磷酸溶液（13：87）；檢測波長：230nm；流速：1.0mL/min。柱溫：室溫；進樣量：10μL。在此色譜條件下，芍藥苷與其他組分均達到基線分離，理論板數(shù)按芍藥苷峰計算應不低于5000。

2.2 對照品溶液的制備 精密稱取芍藥苷對照品適量，精密稱定，加稀乙醇制成每1mL含60ug的溶液，搖勻，即得。

2.3供試品溶液的制備 取本品研細，取約1g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入稀乙醇50mL，密塞，稱定重量，超聲處理（功率260W，頻率40kHz）30min，放冷，再稱定重量，用稀乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

2.4陰性干擾試驗 按處方量稱取除白芍和牡丹皮以外的藥材，同制備工藝制成陰性樣品，再以供試品溶液的制備方法，制備白芍和牡丹皮陰性對照溶液。分別精密吸取陰性對照溶液、供試品溶液及對照品溶液各10uL，注入液相色譜儀，繪制液相色譜圖，由色譜圖提示，在對照品色譜相應的位置上，供試品溶液具有相同保留時間的色譜峰，陰性溶液在此峰位無吸收，對本品中芍藥苷含量測定無干擾，方法專屬性良好。

2.5波長的選擇 稱取芍藥苷對照品適量，加稀乙醇溶液配成每1ml含0.06mg的溶液，在200～500nm的波長的范圍內(nèi)掃描。結(jié)果本品在230nm處有最大吸收。

2.6流動相的選擇 參照《中國藥典》2005年版一部加味逍遙丸含量測定[1]項下以甲醇-0.05mol/L磷酸氫二鈉溶液（用0.05mol/L磷酸二氫鉀調(diào)節(jié)pH值至7.4）（23：37）為流動相，結(jié)果顯示芍藥苷峰與雜質(zhì)峰未完全分開而且理論塔板數(shù)小于5000。

參照《中國藥典》2005年版一部白芍含量測定[2]項下及相關(guān)參考文獻[3-4]以乙腈-0.1%磷酸溶液（14：86）為流動相， 結(jié)果顯示：乙腈-0.1% 磷酸溶液（14：86）作為流動相，峰形好，較穩(wěn)定，芍藥苷色譜峰能基本達到基線分離，對此流動相稍作調(diào)整即可達到完全分離，故將流動相調(diào)整為乙腈-0.1% 磷酸溶液（13：87）。

2.7供試品提取方法的選擇 加味逍遙丸中所含藥味較多，其他藥味對芍藥苷的影響較大，如在相同的提取時間下分別用甲醇及稀乙醇作為溶劑結(jié)果發(fā)現(xiàn)兩種溶劑提取芍藥苷均較完全且含量相差較小，但采用稀乙醇為提取溶劑雜質(zhì)峰少，故選用稀乙醇為提取溶劑，本品對超聲的時間也進行了考察，即分別超聲20、30、40min結(jié)果發(fā)現(xiàn)在超聲30min時有效成分基本提取完全。

2.8線性范圍考察 精密吸取芍藥苷對照品溶液適量，配成濃度為118.4μg/ml的溶液，精密量取1、3、5、7、9 ～10 ml容量瓶定溶，按擬定的色譜條件分別進量10μl測定峰面積，以峰面積為縱坐標，芍藥苷進樣量（μg）為橫坐標繪制標準曲線，計算得回歸方程：Y=1353112X+10449.9 r=0.9999。

2.9穩(wěn)定性試驗 取樣品（批號081217），研細，取粉末1g，精密稱定，按正文[2.3溶液的制備]項下制備供試液，精密吸取同一供試液，分別于0、2、4、6、8 h進樣分析，測定色譜峰面積，試驗結(jié)果提示：供試液制備后8h內(nèi)測定，色譜峰面積無明顯變化，在此時間內(nèi)，待測組分化學性質(zhì)穩(wěn)定。

2.10 精密度試驗 取同一份供試品溶液10μl，連續(xù)進樣5次，記錄色譜圖，結(jié)果如下：

測定結(jié)果表明，本品精密度試驗符合有關(guān)規(guī)定。

2.11重復性試驗 取本品（批號081217），研細，分別取粉末1g，五份，精密稱定，分別按正文[2.3溶液的制備]項下方法操作，測定（見表2）。

測定結(jié)果表明，本試驗重復性良好。

2.12 回收率試驗考察 精密稱取本品（批號081217，含量4.848mg/g）五份，分別加入對照品約7.57mg，按正文[2.3溶液的制備]項下制備供試品溶液，按上述色譜條件依法測定，測定結(jié)果提示：本方法回收率在97.3 ～99.9%，RSD為1.07%，符合有關(guān)規(guī)定。

2.13樣品含量測定數(shù)據(jù) 經(jīng)采用正文[2.3溶液的制備]項下方法，測定十批樣品中芍藥苷的含量（見表3）。

參照《中國藥典》2010年版一部白芍項下芍藥苷的含量規(guī)定：本品每1g含白芍和牡丹皮以芍藥苷（C23H28O11）計，不得少于1.9mg。

3 討論

3.1檢測波長的選擇 經(jīng)紫外光譜掃描，芍藥苷在 230nm有最大吸收，故選用230nm為檢測波長。

3.2 流動相的選擇 通過實驗顯示乙腈-0.1%磷酸溶液（13：87）較乙腈-0.1%磷酸溶液（14：86）分離度效果好，能使芍藥苷與雜質(zhì)峰的分離度符合規(guī)定，故選用乙腈-0.1%磷酸溶液（13：87）為流動相。

3.3供試品提取方法的選擇 采用稀乙醇為提取溶劑雜質(zhì)峰少，故選用稀乙醇為提取溶劑，對超聲的時間也進行了考察， 結(jié)果發(fā)現(xiàn)在超聲30min時有效成分基本提取完全。

結(jié)果表明，選用芍藥苷作為定量檢測指標以及建立的HPLC色譜條件，方法靈敏度高，專屬性強，重現(xiàn)性好并通過對10批樣品含量進行考察，可作為加味逍遙丸質(zhì)量控制指標之一。

參考文獻：

[1]中國藥典2010年版一部P428.

[2]中國藥典2010年版一部P68.

[3]國家藥典委員會.中國藥典（一部）[S].北京：化學工業(yè)出版社，2005，564-565.

4]李雁玲，杜發(fā)斌.HPLC測定芍地蘭片中芍藥苷的含量[J].中成藥，2004，ll：103-105.

編輯/蘇小梅