摘要：目的 運用RT-PCR技術(shù)在核酸水平上檢測甲狀腺細針穿刺提取的甲狀腺腫瘤組織中的TFF3、C1orf24基因的表達，評估其是否可用于臨床上甲狀腺濾泡型腫瘤良惡性的鑒別。方法 選取我院2013年4月～2011年4月的細針穿刺甲狀腺結(jié)節(jié)組織標(biāo)本279例。然后運用RT-PCR技術(shù)在核酸水平上分別檢測各樣本組織中目的TFF3、C1orf24的表達水平。對照細胞學(xué)和術(shù)后病理學(xué)檢查結(jié)果，了解TFF3、C1orf24在良性甲狀腺濾泡型腫瘤和惡性甲狀腺濾泡型腫瘤中是否存在差異。結(jié)果 TFF3在濾泡狀癌中的表達高于濾泡狀腺瘤（P<0.05）。C1orf24在濾泡狀癌中的表達高于濾泡狀腺瘤（P<0.05）。結(jié)論 兩種分子標(biāo)記物能較好的幫助臨床鑒別甲狀腺濾泡型腫瘤的良惡性。

關(guān)鍵詞：細針穿刺活檢（FNAB）；甲狀腺結(jié)節(jié)；甲狀腺濾泡狀腺瘤；甲狀腺濾泡狀癌；生物標(biāo)記物；TFF3；C1orf24；RT-PCR

甲狀腺結(jié)節(jié)（Thyroid nodule，TN）是內(nèi)分泌科常見疾病之一。大多數(shù)結(jié)節(jié)為良性，惡性結(jié)節(jié)僅占4.0%～6.5%[1]。甲狀腺細針抽吸活檢細胞學(xué)檢查（FNAB）是鑒別甲狀腺結(jié)節(jié)良惡性最有效的診斷工具[2]。濾泡狀癌占甲狀腺癌總數(shù)的10%～15%，其診斷要點是是否侵入包膜，血管或周圍組織。因此難以依靠FNAB診斷甲狀腺濾泡狀癌。隨著分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展，研究發(fā)現(xiàn)許多分子生物標(biāo)記物的基因表達在良惡性結(jié)節(jié)中的表達存在差異。例如HBME-1，PAX-8-PPARγ，RAS等。但目前分子標(biāo)記物鑒別甲狀腺結(jié)節(jié)良惡性，仍停留在早期研究階段。我們在前期研究中，發(fā)現(xiàn)TFF3和 C1orf24在濾泡狀癌和濾泡狀腺瘤中的表達存在有統(tǒng)計學(xué)意義的差異[3]。本研究選擇TFF3和 C1orf24，運用RT-PCR技術(shù)檢測其在FNAB樣本中的表達水平，結(jié)合隨訪的病理檢查結(jié)果和細胞學(xué)檢查結(jié)果，評估其在甲狀腺濾泡狀癌和濾泡狀腺瘤臨床鑒別中的價值。

1資料與方法

1.1一般資料 選取南京軍區(qū)南京總醫(yī)院2013年4月～2014年4月FNAB抽取的組織樣本，總計279例，隨訪行手術(shù)治療共39例，術(shù)后病理報告提示：濾泡狀腺瘤27例，濾泡狀癌6例，乳頭狀癌1例，結(jié)節(jié)性甲狀腺腫2例，未分化癌1例，橋本甲狀腺炎2例。

1.2方法 第一步，提取組織中的總RNA，后用紫外分光光度法和瓊脂糖凝膠電泳鑒定提取的RNA的數(shù)量和質(zhì)量。第二步，以β-actin為內(nèi)參基因.采用RT-PCR方法經(jīng)過反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)、擴增反應(yīng)檢測的基因TFF3、C10rf24及內(nèi)參基因的ct值。

1.3統(tǒng)計學(xué)處理 運用SPSS 19.0軟件進行統(tǒng)計處理。本實驗采用PCR 相對定量分析，樣本中目的基因的表達強度（△CT）用對應(yīng)的內(nèi)參基因Beta-actin基因的CT值進行校正，具體操作： △CT =CT（目的基因）-CT（Beta-actin 基因）。然后對各組的△CT進行秩和檢驗。如果P<0.05，則表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1 TFF3 mRNA TFF3在27例濾泡狀腺瘤中的表達顯著低于6例濾泡狀癌中的表達（P<0.05），見圖1。

圖1 TFF3 mRNA

2.2 C1orf24 mRNA C1orf24在27例濾泡狀腺瘤中的表達顯著低于6例濾泡狀癌中的表達（P<0.05），見圖2。

圖2 C1orf24 mRNA

3討論

甲狀腺濾泡狀癌約占甲狀腺惡性腫瘤的11%～15%[4]。目前最主要的困難在于濾泡狀癌和濾泡狀腺瘤的鑒別。術(shù)前FNAB診斷甲狀腺濾泡狀癌的十分困難。隨著分子生物技術(shù)的發(fā)展，許多的研究發(fā)現(xiàn)分子生物標(biāo)記物可能對甲狀腺濾泡狀癌和甲狀腺濾泡狀腺瘤鑒別有幫助。我們通過前期的研究發(fā)現(xiàn)TFF3、C1orf24在甲狀腺濾泡狀腺瘤和濾泡狀癌中的表達存在差異。

三葉肽（trefoil peptide）是主要由消化道粘膜上皮杯狀細胞合成和分泌的多肽物質(zhì)，具有保護和修復(fù)粘膜、抑制炎癥反應(yīng)、調(diào)節(jié)細胞免疫和細胞凋亡等功能，目前在人體內(nèi)已發(fā)現(xiàn)種三葉肽， 包括乳癌相關(guān)肽（TFF1）、解痙多肽（TFF2）和腸三葉因子（TFF3）。TFF3主要在胃竇粘膜和小腸結(jié)腸中高表達，其余各段小腸中TFF3含量無明顯差異[5]。病理狀態(tài)下，TFF3的表達發(fā)生明顯改變，其分布無組織專一性。在食管腸化生，胃食管反流病，胃潰瘍，腸道慢性炎癥以及腺瘤腺癌等中均見表達。TFF3 mRNA的高表達可能促使細胞間失去粘連，加速細胞的遷移[6]。我們的研究對甲狀腺結(jié)節(jié)FNAB樣本的TFF3 mRNA的表達進行檢測，發(fā)現(xiàn)TFF3 mRNA相對于濾泡狀腺瘤在濾泡狀癌中高表達，這與前人的研究結(jié)果一致。這幫助我們，鑒別FNAB檢查中無法鑒別的甲狀腺濾泡腺瘤和濾泡癌樣本。

C1orf24在正常的胰腺、肌肉和結(jié)腸中均表達，前人的研究發(fā)現(xiàn)C1orf24與甲狀腺癌的發(fā)生有關(guān)，我們前期的研究發(fā)現(xiàn)在甲狀濾泡癌的患者中C1orf24高表達，在甲狀腺濾泡腺瘤中C1orf24低表達或不表達，其可能可以作為鑒別良惡性甲狀腺濾泡型腫瘤的分子標(biāo)記物。我們的研究結(jié)果顯示在FNAB抽吸樣本中C1orf24的 mRNA表達水平在甲狀腺濾泡狀癌和濾泡狀腺瘤的表達存在顯著性差異（P<0.05）。

綜上所述，本研究檢測279例FNAB抽吸樣本中TFF3、C1orf24的表達水平，與細胞學(xué)和術(shù)后病理學(xué)結(jié)果相比對，發(fā)現(xiàn)這兩種分子標(biāo)記物均能較好的鑒別甲狀腺濾泡型腫瘤的良惡性。但目前的研究仍有局限性：①收集的惡性腫瘤病例數(shù)太少，影響結(jié)果的準(zhǔn)確性；②FNAB抽吸樣本的組織量很少，后期提取組織中mRNA難度較大，且其對樣本組織的保存等技術(shù)要求較高。因此，TFF3、C1orf24在甲狀腺濾泡型腫瘤的良惡性的臨床鑒別中的運用可能有廣闊空間，但尚需更多的基礎(chǔ)研究和臨床實踐。

參考文獻：

[1]WERK E E Jr，VERNON B M，GONZALEZ J J，et a1.Cancer in thyroidnodules.A community hospital survey[J].Arch Intern Med，1984，144（3）：474-476.

[2]Kondo T， Ezzat S， Asa SL. Pathogenetic mechanisms in thyroid follicular-cell neoplasia. Nat Rev Cancer. 2006. 6（4）： 292-306.

[3]張久丹，熊金華，王堅，等.新型分子標(biāo)記物對甲狀腺濾泡型腫瘤良惡性的鑒別診斷[J].中華內(nèi)分泌代謝雜志，2013，29：1018-1020.

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[5]Taupin D， Pedersen J， Familari M， et al. Augmente dintestinal trefoil factor（TFF3） and loss of pS2（TFF1） expression precedes metaplstic differentiation of gastric epithelium[J]. Lab Invest， 2001， 81 （3）： 397408.

[6]Rodrigues S， Van Aken E， Van Bocxlaer S， et al. Trefoil peptides as proangiogenic factors in vivo and in vitro： implication of cyclooxygenase-2 and EGF receptor signaling[J]. FASEB J. 2003. 17（1）： 7-16.

編輯/申磊