摘要：目的 研究并比較可見分光光度法及紫外分光光度法測定中藥復(fù)方總黃酮含量。方法 可見分光光度法以蘆丁為參照品，顯色劑為NaNO2-Al（NO3）3-NaOH體系，在510nm波長處測定吸光度，計算中藥復(fù)方總黃酮含量；紫外分光光度法以蘆丁為參照品，在359nm波長處測定吸光度，計算中藥復(fù)方總黃酮含量。結(jié)果 可見分光光度法掃描曲線有較大差異，吸收峰紅移，在510 nm處吸光度值最大。紫外分光光度法掃描曲線在紫外光譜圖上顯示兩個吸收峰，在359 nm處吸光度值最大，500～800 nm處無吸收峰； 可見分光光度法測定的中藥復(fù)方總黃酮含量比紫外分光光度法的測定值高，含量高低成正比。結(jié)論 采用NaNO2-Al（NO3）3-NaOH體系可見分光光度法穩(wěn)定中藥復(fù)方總黃酮方法可靠，是測定中藥復(fù)方總黃酮含量的理想方法。

關(guān)鍵詞：可見分光光度法；紫外分光光度法；中藥復(fù)方；總黃酮；含量

紫外-可見分光光度法具有穩(wěn)定性好、準(zhǔn)確度高、儀器設(shè)備操作簡單等優(yōu)點，常被應(yīng)用與植物中黃酮含量的測定[1-3]。NaNO2-Al（NO3）3-NaOH體系則是藥典中廣泛應(yīng)用的總黃酮含量測定法。本文采用可見分光光度法及紫外分光光度法測定白頭翁湯加減復(fù)方總黃酮的含量，通過比較直接測定法與顯色測定法，為中藥復(fù)方總黃酮含量測定提供參考依據(jù)。

1 資料與方法

1.1儀器設(shè)備 紫外-可見光分光光度計（UV-BluestarPlus，北京萊伯泰科儀器有限公司）；分析電子天平（AUW120D，日本津島公司）；臺式低速多管架自動平衡離心機(jī)（TD5A-WS，長沙湘儀離心機(jī)儀器有限公司）；微量移液器（印pendorf，德國）；超聲波清洗器（SB-5200 DTN，寧波新芝生物科技股份有限公司）；隔膜真空泵（GM-0.5B，天津市津騰實驗設(shè)備有限公司）；雷磁酸度計PH計（PHSJ-4A，上海精密科學(xué)儀器公司）；常規(guī)玻璃儀器。

1.2試藥 蘆丁為參照品（批號：100080-20070，質(zhì)量分?jǐn)?shù)92.5%，中國藥品生物制品檢定所，供含量測定用）。甲醇、乙醇（分析純，天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所），純化水、自制超純水。中藥成分為甘草、白頭翁、秦皮、南山楂、粉葛根、車前子、黃連、藿香、地榆、白芍，購自安徽滬譙中藥飲片廠（生產(chǎn)許可證號：皖Y20050027，批號：060904）。

1.3方法

1.3.1樣品制備 白頭翁湯加減復(fù)方以甘草、白頭翁、秦皮、南山楂、粉葛根、車前子、黃連、藿香、地榆、白芍=1：3：2：4：3：2：115：3：3：2配制。弄成碎末，加水2次煎熬后提取，濃縮，添加乙醇致含醇量為65%，離心去掉沉淀后蒸干，添加甲醇溶解，離心，取上清液加甲醇定容到原藥材量1：1。

1.3.2 參照品溶液制備 取蘆丁參照品12mg，精密稱取，置于50ml瓶中，加70%乙醇溶解并稀釋到刻度，得質(zhì)量濃度為0.24mg/ml的蘆丁參照品溶液。

1.3.3紫外-可見分光光度法掃描與標(biāo)準(zhǔn)曲線制備

1.3.3.1可見分光光度法 精密稱定蘆丁參照品溶液1.00ml、2.00ml、3.00ml、4.00ml、5.00ml、6.00ml分別置25 ml容量瓶中，均加水到6.00ml；加5%的NaNO2溶液1.00 ml，搖勻，放置6min；加10%的Al（NO3）3溶液1.00ml，搖勻，放置6min；加4%的NaOH溶液10.00 ml，再加水到刻度，搖勻，放置15min。以相應(yīng)試劑為空白，在400～800 nm范圍內(nèi)進(jìn)行光譜掃描，得510 nm處為可見最大吸收峰。以空白試劑為參照，將6個標(biāo)準(zhǔn)品溶液分別在510 nm下測定吸光度，得回歸方程A=0.00988C+0.00523，r=0.9997。蘆丁濃度在9.6～57.6 mg/L范圍線性關(guān)系佳。

1.3.3.2 紫外分光光度法 精密稱定蘆丁參照品溶液0.10ml、0.20ml、0.40ml、0.60ml、0.80ml、1.00ml于5ml容量瓶中，均加甲醇到刻度，搖勻。以甲醇作為空白試劑參照，在400～800nm范圍內(nèi)進(jìn)行光譜掃描，得359nm處為紫外最大吸收峰。以空白試劑為參照，將6個標(biāo)準(zhǔn)品溶液分別在359nm下測定吸光度，得回歸方程A=0.02503C+0.02367，r=0.9995。蘆丁濃度在4.8～48mg/L范圍線性關(guān)系佳。

1.3.4紫外-可見分光光度法測定中藥復(fù)方總黃酮含量

1.3.4.1可見分光光度法 精密稱定復(fù)方樣品1.00ml置于10ml容量瓶中，加甲醇到刻度，再取1.50ml置于25ml容量瓶中，加水到6.00ml，加5%的NaNO2溶液1.00ml，搖勻，放置6min；加10%的Al（NO3）3溶液1.00ml，搖勻，放置6min；加4%的NaOH溶液10.00 ml，再加水到刻度，搖勻，放置15min。平行測定吸光度3次，儀器自動計算樣品總黃酮含量。

1.3.4.2 紫外分光光度法 精密稱定復(fù)方樣品1.00ml置于10ml容量瓶中，再取1.50ml置于25ml容量瓶中，均加甲醇到刻度，搖勻。平行測定吸光度3次，儀器自動計算樣品總黃酮含量。

2 結(jié)果

2.1兩種掃描曲線比較 可見分光光度法掃描曲線：蘆丁參照品溶液添加NaNO2-Al（NO3）3-NaOH體系顯色后，在堿性環(huán)境下鋁離子與黃酮化合物形成穩(wěn)定有色金屬絡(luò)合物，吸收光譜的曲線有較大差異，吸收峰紅移，在510 nm處吸光度值最大。紫外分光光度法掃描曲線：按照黃銅的結(jié)構(gòu)特點，在紫外光譜圖上顯示兩個吸收峰，在359 nm處吸光度值最大，500～800 nm處無吸收峰。

2.2 兩種測定法比較 比較可見分光光度法與紫外分光光度法測定全方與缺藥方中的黃酮含量，如表1所示。結(jié)果表明，可見分光光度法測定的中藥復(fù)方總黃酮含量比紫外分光光度法測定值高，含量高低成正比。

3 討論

可見-紫外分光光度法的研究已經(jīng)得到廣泛認(rèn)可，它在單一成分的測定中具有穩(wěn)定性好、精密度高等優(yōu)勢[4]，而對于成分較多的藥品，因為受到儀器設(shè)備、數(shù)據(jù)自動處理等因素限制，采用NaNO2-Al（NO3）3-NaOH體系可見分光光度法進(jìn)行含量測定更為理想[5]。白頭翁湯加減復(fù)方成分較多，在提取和制備過程中可能會產(chǎn)生各種化學(xué)反應(yīng)，黃酮類化合物在紫外區(qū)間的吸光度值有變化，添加Al（NO3）3顯色劑后在堿性環(huán)境下可與黃酮組成血紅色螯合物，在510 nm形成新的吸收峰，以測定黃酮含量。

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編輯/哈濤