摘要：目的 明確克勞斯法測(cè)定纖維蛋白原的影響因素有哪些。方法 分為觀察組和對(duì)照組，對(duì)90例（其中30例正常人血漿、24例正常參比血漿、36例異質(zhì)血漿）不同類(lèi)型的血漿進(jìn)行克勞斯法測(cè)定纖維蛋白原的實(shí)驗(yàn)分析。結(jié)果 觀察組測(cè)定纖維蛋白原結(jié)果可靠，對(duì)照組數(shù)據(jù)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論 影響克勞斯法測(cè)定纖維蛋白原的因素有試劑因素、標(biāo)本因素以及實(shí)驗(yàn)操作因素。

關(guān)鍵詞：克勞斯法；纖維蛋白原；影響因素

克勞斯法測(cè)定纖維蛋白原法屬于功能型方法，具體是指將足量的凝血酶加到稀釋的血漿中去，根據(jù)其與纖維蛋白原的時(shí)間相關(guān)度得出相應(yīng)的纖維蛋白原的含量與功能的結(jié)論，是目前世界各國(guó)醫(yī)學(xué)界測(cè)定纖維蛋白原的主要方法之一[1]?？藙谒狗y(cè)定纖維蛋白原結(jié)果的影響因素有很多，本文具體明確克勞斯法測(cè)定纖維蛋白原的影響因素為試劑、標(biāo)本以及操作過(guò)程，同時(shí)給出關(guān)于與克勞斯法測(cè)定纖維蛋白原影響因素相關(guān)注意事項(xiàng)和有效結(jié)論。

1 資料與方法

1.1血漿 分別選取正常人血漿、異常血漿以及正常參比血漿。其中正常血漿取自獻(xiàn)血員和健康體檢人員，異常血漿取自取自臨床心血管疾病、血栓病、糖尿病、惡性腫瘤和術(shù)后抗凝治療的患者，正常參比血漿取自取多個(gè)獻(xiàn)血員抗凝血，按上述方法制備乏血小板血漿。見(jiàn)表1。

1.2方法 運(yùn)用克勞斯法測(cè)定纖維蛋白原，文中所涉及的合格試劑貯存工具為Fibri-prest試劑盒，購(gòu)自Diagnostica Stago公司 。數(shù)據(jù)分的統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用Excel 97統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件。

1.2.1對(duì)克勞斯法測(cè)定纖維蛋白原的試劑影響因素分析 將正常人血漿分為觀察組15例和對(duì)照組15例進(jìn)行不同試劑影響因素的分析，其中觀察組嚴(yán)格遵守檢測(cè)儀器的相關(guān)要求，嚴(yán)格選定試劑產(chǎn)品，杜絕試劑使用中出現(xiàn)的錯(cuò)誤；對(duì)照組相對(duì)實(shí)驗(yàn)程序不嚴(yán)謹(jǐn)。

1.2.2克勞斯法測(cè)定纖維蛋白原的標(biāo)本因素 將正常參比血漿分為觀察組12例和對(duì)照組12例進(jìn)行標(biāo)本收集的不同實(shí)驗(yàn)，在收集、運(yùn)送和貯藏方面進(jìn)行分析。見(jiàn)表2。

1.2.3克勞斯法測(cè)定纖維蛋白原的實(shí)驗(yàn)操作因素 將異質(zhì)血漿分為觀察組18例和對(duì)照組18例，其中觀察組要求血漿預(yù)熱時(shí)間≤10min，試劑預(yù)熱時(shí)間≤30min，對(duì)照組血漿預(yù)熱時(shí)間為15min試劑預(yù)熱時(shí)間為35min。

2 結(jié)果

結(jié)果顯示，無(wú)論是在進(jìn)行試劑影響因素實(shí)驗(yàn)、標(biāo)本影響因素實(shí)驗(yàn)還是實(shí)驗(yàn)操作影響因素實(shí)驗(yàn)，對(duì)照組的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)對(duì)于克勞斯法測(cè)定纖維蛋白原均沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，觀察組中共計(jì)45例血漿的測(cè)量結(jié)果都在（2.95±0.41）（這個(gè)范圍是克勞斯法測(cè)定纖維蛋白原的標(biāo)準(zhǔn)數(shù)據(jù)值）范圍內(nèi)。

3 討論

3.1克勞斯法測(cè)定纖維蛋白原的試劑因素 運(yùn)用克勞斯法測(cè)定纖維蛋白原要求一方面注重試劑盒的質(zhì)量，另一方面在使用過(guò)程中嚴(yán)謹(jǐn)細(xì)致。試劑質(zhì)量的好壞是檢測(cè)結(jié)果是否準(zhǔn)確的最重要影響條件之一，這就要求實(shí)驗(yàn)者具備專(zhuān)業(yè)的鑒別試劑盒以及試劑的能力。具體可從3個(gè)方面明確試劑以及試劑盒鑒別中易出現(xiàn)的問(wèn)題：①盡管檢測(cè)儀器有所不同，測(cè)定者還是進(jìn)行相同的相應(yīng)試劑選擇；②纖維蛋白原的標(biāo)準(zhǔn)品定值不準(zhǔn)確；③試劑產(chǎn)品的選擇不慎重。在克勞斯法測(cè)定纖維蛋白原的過(guò)程中，試劑使用的細(xì)節(jié)決定整個(gè)測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確程度，這里具體明確一下在纖維蛋白原的測(cè)定過(guò)程試劑使用中最容易出現(xiàn)的9點(diǎn)錯(cuò)誤：①進(jìn)行試劑溶解時(shí)沒(méi)有嚴(yán)格按照試劑盒上的說(shuō)明要求；②在進(jìn)行試劑復(fù)溶時(shí)溶液量的劑量把握不得當(dāng)；③正常情況下進(jìn)行纖維蛋白原檢測(cè)時(shí)，要求要在使用前10min就對(duì)試劑進(jìn)行溶解，很多實(shí)驗(yàn)人員未遵循此要求；④沒(méi)有對(duì)溶解好的試劑進(jìn)行分開(kāi)裝放，造成試劑的多次使用，污染嚴(yán)重；⑤纖維蛋白原的復(fù)溶試劑儲(chǔ)存條件不合理，導(dǎo)致試劑失效；⑥試劑緩沖液的PH值不合理；⑦使用上次實(shí)驗(yàn)中沒(méi)有用完的試劑；⑧混用不同成分的同種命名試劑；⑨使用過(guò)期的試劑。

因此測(cè)定者在進(jìn)行試劑盒方面的鑒定和選擇時(shí)，一方面要根據(jù)檢測(cè)儀器的不同，進(jìn)行不同的相應(yīng)試劑選擇，同時(shí)還要保證纖維蛋白原的標(biāo)準(zhǔn)品定值的準(zhǔn)確性；另一方面在進(jìn)行試劑盒選擇的過(guò)程中要盡量選擇知名度高的試劑盒，要求試劑產(chǎn)品有國(guó)家的正式批號(hào)，并且經(jīng)過(guò)質(zhì)量檢測(cè)認(rèn)證。并注意試劑的生產(chǎn)日期、應(yīng)用范圍等多個(gè)因素。

3.2克勞斯法測(cè)定纖維蛋白原的標(biāo)本因素 克勞斯法測(cè)定纖維蛋白的過(guò)程中無(wú)論是標(biāo)本的收集、運(yùn)送還是貯存，都要嚴(yán)格遵循相關(guān)的要求，做到每一步都科學(xué)有序，嚴(yán)謹(jǐn)沒(méi)有漏洞[2]。具體說(shuō)來(lái)，克勞斯法測(cè)定纖維蛋白原的標(biāo)本收集要做到以下幾點(diǎn)：①采血的器具要符合規(guī)定，不能應(yīng)用玻璃注射器或者是玻璃試管，同時(shí)要求采血的器具不能夠含有去污劑、清洗劑等，嚴(yán)禁采血器具受到污染；②采血部位不能夠扎束的過(guò)緊或者是時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，另外在進(jìn)行進(jìn)針和抽血的過(guò)程中要保證速度勻速；③在進(jìn)行抽血時(shí)，要求患者的情緒穩(wěn)定、平靜；④在測(cè)定過(guò)程中要采用規(guī)定的抗凝劑，同時(shí)抗凝劑的加量要適當(dāng)有度，建議應(yīng)用枸櫞酸鈉抗凝劑；⑤血液與抗凝劑要遵循一定的比例，最佳比例為血液與抗凝劑的比例為1：9；⑥要求取血量準(zhǔn)確，取血量注入抗凝管的劑量合理。

在克勞斯法測(cè)定纖維蛋白原的標(biāo)本運(yùn)送方面要做到以下幾點(diǎn)：①要求血液與抗凝劑充分混合，只有這樣才能夠避免溶血、黃疸的現(xiàn)象發(fā)生，影響試驗(yàn)的準(zhǔn)確性；②要求在去血厚要盡快分離標(biāo)本，并及時(shí)制成乏血血小板漿，同時(shí)還要及時(shí)將吸出的血漿放入相應(yīng)器皿中，保證PH值的不發(fā)生變化；③從抽血到檢測(cè)的整個(gè)時(shí)間間斷不能超過(guò)2h，并且在標(biāo)本的運(yùn)送過(guò)程中不能夠有劇烈的震動(dòng)或者是日光的直射?？藙谒狗y(cè)定纖維蛋白原的貯藏方面也有一定的要求，其中最重要的2點(diǎn)：①要求將血漿標(biāo)本冷凍保存，冷凍的時(shí)間要快，同時(shí)要注意融化的溫度控制在35°左右，一經(jīng)融化要立刻取出，嚴(yán)禁反復(fù)凍融；②纖維蛋白原具有異質(zhì)性，同時(shí)纖維蛋白原中存在FDPs等抗凝物，這些抗凝物在標(biāo)本貯存的過(guò)程中會(huì)影響貯藏結(jié)果。

因此建議測(cè)定者能夠在測(cè)定的過(guò)程中嚴(yán)格遵循標(biāo)本的收集步驟，在運(yùn)送與貯存的過(guò)程中嚴(yán)謹(jǐn)細(xì)致，最終達(dá)到保證測(cè)定結(jié)果真實(shí)有效的目的[3]。

3.3克勞斯法測(cè)定纖維蛋白原的實(shí)驗(yàn)操作因素 溫度、時(shí)間、試劑量，還是規(guī)范與否，都是實(shí)驗(yàn)操作的重要影響因素，本部分系統(tǒng)介紹實(shí)驗(yàn)操作中的具體注意事項(xiàng)?？藙谒狗y(cè)定纖維蛋白原的整個(gè)實(shí)驗(yàn)操作流程，要從以下幾點(diǎn)進(jìn)行完善和改進(jìn)：①首先要嚴(yán)格遵循實(shí)驗(yàn)中所應(yīng)用的試劑盒和儀器的說(shuō)明說(shuō)進(jìn)行相應(yīng)的操作，嚴(yán)格規(guī)范實(shí)驗(yàn)者的每一個(gè)細(xì)節(jié)動(dòng)作和環(huán)節(jié)，保證實(shí)驗(yàn)成功的大前提；②實(shí)驗(yàn)中標(biāo)本與試劑的溫度方面有著嚴(yán)格的要求，具體按照相應(yīng)實(shí)驗(yàn)的要求來(lái)確定，但切記不能過(guò)高或者是過(guò)低；③血漿與試劑的預(yù)熱時(shí)間方面，要求血漿預(yù)熱時(shí)間≤10min，試劑預(yù)熱時(shí)間≤30min；④加熱試劑的同時(shí)要進(jìn)行計(jì)時(shí)，要保證計(jì)時(shí)的科學(xué)和準(zhǔn)確；⑤實(shí)驗(yàn)對(duì)試劑順序有著嚴(yán)格的要求，要求實(shí)驗(yàn)試劑加入順序有序；⑥實(shí)驗(yàn)對(duì)血漿稀釋同樣有著相應(yīng)的要求，要求血漿稀釋適度合理；⑦纖維蛋白原的含量高低，決定了整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中血漿的凝固時(shí)間，通常在手工法的測(cè)定過(guò)程中，測(cè)定終點(diǎn)的明確由于血漿凝固時(shí)間的不確定而難以確定，這就要求測(cè)定者把握好實(shí)驗(yàn)的測(cè)定終點(diǎn)；⑧要根據(jù)儀器的靈敏度和相關(guān)的操作要求，進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制的多點(diǎn)選擇；⑨要定時(shí)檢查實(shí)驗(yàn)條件，當(dāng)實(shí)驗(yàn)條件有一定的變動(dòng)或者是改變時(shí)，要進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)曲線的及時(shí)更改，重新繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。實(shí)驗(yàn)操作環(huán)節(jié)是整個(gè)測(cè)定過(guò)程中的最核心部分，因此測(cè)定者在整個(gè)實(shí)驗(yàn)操作的環(huán)節(jié)必須做到細(xì)致并且有序，保證準(zhǔn)確無(wú)誤。

在整個(gè)測(cè)定的過(guò)程中，如果說(shuō)試劑因素是測(cè)定過(guò)程的前提保障，那么標(biāo)本的收集、運(yùn)送和貯藏則是整個(gè)測(cè)定過(guò)程中的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，而實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程無(wú)疑就是在前兩者基礎(chǔ)上整個(gè)測(cè)定過(guò)程的核心部分。需要我們掌握住克勞斯測(cè)定法中的每一個(gè)影響因素，注重細(xì)節(jié)，合理測(cè)定，掌控住整個(gè)測(cè)定流程。

綜上所述，克勞斯法測(cè)定纖維蛋白原是一個(gè)較為有效和前景看好的功能法。希望通過(guò)本文能夠使更多的相關(guān)方面工作者了解到克勞斯測(cè)定纖維蛋白原法，以及其在整個(gè)測(cè)定過(guò)程中的相關(guān)影響因素，并具體掌握在進(jìn)行纖維蛋白測(cè)定過(guò)程中應(yīng)注意的一些細(xì)小環(huán)節(jié)和注意事項(xiàng)，最終起到良好的指引效果，達(dá)到科學(xué)合理測(cè)定纖維蛋白原的目的。

參考文獻(xiàn)：

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[3]王希平.兩種纖維蛋白原的測(cè)定方法比較[J].實(shí)用醫(yī)技雜，2003，7（7）：750-751.

編輯/哈濤