摘要：目的 對(duì)ALISEI酶標(biāo)儀的性能進(jìn)行評(píng)價(jià)。方法 參考NCCLS EP5文件[1]，以重鉻酸鉀為測(cè)試物，于波長(zhǎng)450 nm處，分別通過(guò)零點(diǎn)漂移實(shí)驗(yàn)、加樣精度實(shí)驗(yàn)、孔間差實(shí)驗(yàn)、通道差實(shí)驗(yàn)、精密度實(shí)驗(yàn)、線(xiàn)性實(shí)驗(yàn)、交叉污染實(shí)驗(yàn)及洗板殘液量實(shí)驗(yàn)對(duì)酶標(biāo)儀的加樣系統(tǒng)、讀板系統(tǒng)和洗板系統(tǒng)進(jìn)行評(píng)價(jià)。結(jié)果 ALISEI全自動(dòng)酶標(biāo)儀零點(diǎn)漂移為±0.001；加樣精度變異系數(shù)為0.43%，<1%，符合儀器標(biāo)準(zhǔn)；孔間差為±0.0032；通道差為0.009；高、中、低值樣本的批內(nèi)不密度分別為0.31%、0.24%、0.63%；批間不精密度分別為0.85%、0.49%、0.62%；日間不精密度分別為1.03%、0.49%、0.63%；總不精密度分別為1.105%、0.613%、0.701%；線(xiàn)性實(shí)驗(yàn)得到回歸方程為Y=0.004+0.836X，相關(guān)系數(shù)r=0.9991；交叉污染率為0.86%；洗板殘液量平均每孔為0.0125～0.25 uL。結(jié)論 ALISEI全自動(dòng)酶標(biāo)儀加樣系統(tǒng)、讀板系統(tǒng)、洗板系統(tǒng)性能優(yōu)良，且操作簡(jiǎn)便，較適合臨床實(shí)驗(yàn)室ELISA試驗(yàn)的自動(dòng)化。

關(guān)鍵詞：全自動(dòng)酶標(biāo)儀；性能評(píng)價(jià)

隨著免疫學(xué)檢測(cè)新技術(shù)的不斷發(fā)展，臨床免疫檢驗(yàn)手段逐漸從手工操作向全自動(dòng)檢測(cè)過(guò)渡，酶標(biāo)儀在臨床實(shí)驗(yàn)室中的應(yīng)用越來(lái)越普及，使得ELISA法整個(gè)操作過(guò)程更加標(biāo)準(zhǔn)化、規(guī)范化、自動(dòng)化，減少了操作過(guò)程中認(rèn)為因素的誤差。筆者對(duì)意大利SEAC公司的ALISEI全自動(dòng)酶標(biāo)儀從加樣系統(tǒng)、讀板系統(tǒng)、洗板系統(tǒng)及交叉污染等方面進(jìn)行了評(píng)價(jià)，現(xiàn)報(bào)告如下。

1資料與方法

1.1儀器 ALISEI全自動(dòng)酶標(biāo)儀，意大利SEAC公司生產(chǎn)；TG328B電光分析天平，上海天平儀器廠(chǎng)生產(chǎn)，感量0.1mg。

1.2主要材料 U型酶標(biāo)微孔板條（北京萬(wàn)泰公司）；重鉻酸鉀（分析純，天津化學(xué)試劑廠(chǎng)）；自配0.2 mol/L硫酸；用硫酸配置濃度為0.015%、0.030%、0.060%、0.075%、0.090%共5個(gè)濃度的重鉻酸鉀溶液待用。

1.3評(píng)價(jià)指標(biāo)及方法

1.3.1零點(diǎn)漂移實(shí)驗(yàn) 取8只微孔杯分別置于8個(gè)通道的相應(yīng)位置，分別加入200 uL蒸餾水，調(diào)至零點(diǎn)，于450 nm處測(cè)定1次/30 min，連續(xù)測(cè)定4 h，其偏于零點(diǎn)的差值即為零點(diǎn)漂移。

1.3.2加樣精度實(shí)驗(yàn) 分離單個(gè)板孔，于酶標(biāo)儀上只進(jìn)行加樣操作，每孔加入蒸餾水100 uL，用分析天平稱(chēng)量加樣前后板孔的重量，純水稱(chēng)重法計(jì)算實(shí)際加樣量，并計(jì)算 、S、CV%，同時(shí)分析儀器的加樣精度。

1.3.3孔間差實(shí)驗(yàn)[2] 選擇同一批號(hào)酶標(biāo)微孔板條（8×12，共96孔），分離單個(gè)板孔，分別加入濃度為0.075%的重鉻酸鉀溶液，依次置于同一通道，以蒸餾水調(diào)零，于450nm處檢測(cè)，其誤差大小用±1.96S表示。

1.3.4通道差實(shí)驗(yàn)[2] 酶標(biāo)儀的測(cè)量通道有8、12、96之分，ALISEI酶標(biāo)儀為8通道。分離一個(gè)微孔杯，加入200 uL濃度為0.075%的重鉻酸鉀溶液，先后置于8個(gè)通道的相應(yīng)位置，以蒸餾水調(diào)零，于450 nm處進(jìn)行測(cè)定，各通道間的差用極差（最大值-最小值）來(lái)表示。

1.3.5精密度實(shí)驗(yàn)[3] 分離單個(gè)板孔，每個(gè)通道放置3只微孔杯，分別加入高、中、低3種濃度的重鉻酸鉀溶液，蒸餾水調(diào)零，于450 nm處做雙份平行測(cè)定，每天做2批，批間相隔時(shí)間≥2 h，連續(xù)測(cè)定20 d，分別計(jì)算批內(nèi)、批間、日間和總不精密度（CV%）。

1.3.6線(xiàn)性實(shí)驗(yàn) 于450 nm處，以蒸餾水調(diào)零，分別測(cè)定5個(gè)系列濃度的重鉻酸鉀溶液，每個(gè)濃度測(cè)定4次，且必須在當(dāng)日內(nèi)完成，計(jì)算回歸方程及相關(guān)系數(shù)。

1.3.7交叉污染實(shí)驗(yàn) 采用Bioughton法測(cè)定，即用高低2個(gè)濃度的血清，先測(cè)定高值樣本3次（H1、H2、H3），再測(cè)定低值樣本3次（L1、L2、L3），計(jì)算污染率=（L1-L3）/（H3-H1）×100%。

1.3.8洗板殘液量實(shí)驗(yàn) 取8孔微孔板條12條，放置于洗板機(jī)上，用蒸餾水洗板，用分析天平測(cè)量洗板前后板條的重量，用純水稱(chēng)重法計(jì)算平均每孔的洗板殘液量。

2結(jié)果

2.1零點(diǎn)漂移 8個(gè)通道的零點(diǎn)漂移值均在±0.001內(nèi)。

2.2加樣精度實(shí)驗(yàn) 加樣100 uL前后單個(gè)板孔的比較，x=98.79，s=0.4291，CV=0.43%，符合儀器標(biāo)準(zhǔn)。

2.3孔間差實(shí)驗(yàn) 孔間差為±0.0032。

2.4通道差實(shí)驗(yàn) 一束光在各個(gè)通道均能給出同樣的吸光度為理想狀態(tài)，該儀器通道差很小，僅為0.009，可以保證各個(gè)通道結(jié)果的準(zhǔn)確性。

3討論

通過(guò)對(duì)ALISEI酶標(biāo)儀的加樣系統(tǒng)、讀板系統(tǒng)、洗板系統(tǒng)各的測(cè)評(píng)，各指標(biāo)評(píng)價(jià)結(jié)果皆符合儀器的設(shè)計(jì)性能，結(jié)果比較滿(mǎn)意。筆者僅僅對(duì)于450 nm這個(gè)ELISA法常用的波長(zhǎng)下各指標(biāo)進(jìn)行了評(píng)價(jià)，其它波長(zhǎng)，如490 nm應(yīng)該用甲基橙溶液來(lái)測(cè)試，620 nm應(yīng)該用伊文思藍(lán)溶液來(lái)測(cè)試，測(cè)試方法相同。

ALISEI作為第三代酶標(biāo)儀，同手工方法相比有了很大程度的提高，其標(biāo)本加注量為7～300 uL（步進(jìn)1ul），試劑加注量10～300 uL（步進(jìn)1 uL），且有其獨(dú)特的三波長(zhǎng)讀板模式，吸光度最大達(dá)9.0，有效的去除了雜散光及微孔板劃痕的干擾，并解決了部分高濃度樣本的\"前帶現(xiàn)象\"；溫育系統(tǒng)有6個(gè)獨(dú)立的孵育位置，溫度獨(dú)立控制，可單獨(dú)孵育，并且無(wú)需機(jī)械抓板系統(tǒng)，在原加樣位置孵育，減少了機(jī)械磨損及交叉污染率。

綜上所述，ALISEI酶標(biāo)儀各系統(tǒng)性能優(yōu)良，較適合臨床實(shí)驗(yàn)室使用，是ELISA試驗(yàn)自動(dòng)化操作的較理想的全自動(dòng)儀器。

參考文獻(xiàn)：

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編輯/張燕