韓慶安等

高致病性禽流感對養(yǎng)禽業(yè)的危害非常嚴重，世界動物衛(wèi)生組織（OIE）將高致病性禽流感列為必須報告的動物傳染病和A類傳染病，我國將其列為一類動物疫病。為了有效預(yù)防和控制禽流感，減少對養(yǎng)禽業(yè)的危害，我國對高致病性禽流感實行強制免疫政策。為了解不同廠家禽流感疫苗的免疫效果，為禽流感疫苗的選擇提供參考，2012年5-12月份，對當(dāng)年中標(biāo)的9個廠家生產(chǎn)3種不同類型14個批次禽流感疫苗進行免疫效果的比對試驗?，F(xiàn)將試驗結(jié)果報告如下。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 試驗用疫苗

禽流感滅活疫苗共分三種類型，其中重組禽流感H5N1（Re-4+Re-6株）二價滅活疫苗7個批次、重組禽流感H5N1（Re-6株）單價滅活疫苗5個批次、H5（Re-6株）+H9亞型禽流感二聯(lián)滅活疫苗2個批次。

1.1.2 實驗動物

保定某規(guī)模蛋雞場，整棟2000只120日齡海蘭褐雞群，按照飼養(yǎng)籠，隨機分成14個實驗組，每個實驗組試驗雞100～200只。該棟雞群分別于10日齡和38日齡注射重組禽流感H5N1（Re-4+Re-6株）二價滅活疫苗各1次，劑量分別為0.3 mL/只和0.5 mL/只；75日齡注射禽流感H5（Re-6株）+H9二聯(lián)滅活苗1次，劑量為0.5 mL/只，現(xiàn)產(chǎn)蛋率為20%，雞群健康狀況良好。

1.1.3 主要試劑

H5亞型禽流感Re-4株、Re-6株HI標(biāo)準(zhǔn)抗原以及相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)陽性血清，H9亞型禽流感HI標(biāo)準(zhǔn)抗原以及相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)陽性血清均購于國家禽流感參考實驗室。

1.2 方法

1.2.1 疫苗樣品的準(zhǔn)備

疫苗樣品從我單位疫苗供應(yīng)科隨機抽取14個批次中標(biāo)產(chǎn)品，編號后進行免疫效果試驗。其中7個批次不同廠家重組禽流感H5N1（Re-4+Re-6株）二價滅活疫苗編號為A1、B1、C1、D1、E1、F1和G1（批次號分別為：2012009、2012057、2013036、2012048、2011079、2012039和2012024），5個批次不同廠家重組禽流感H5N1（Re-6株單價滅活疫苗編號為C2、E2、G2、H2和I2（批次號分別為：2012018、2012034、2012004、2012016和20120403），2個批次不同廠家禽流感H5（Re-6株）+H9亞型禽流感二聯(lián)滅活疫苗編號為B3和F3（批次號分別為2012014和2012018）。

1.2.2 免疫程序

每實驗組隨機選用一種疫苗進行免疫，劑量0.5 mL/只。

1.2.3 實驗方案

在分組前從整個雞群中隨機抽取30枚雞蛋進行禽流感抗體檢測，了解當(dāng)前抗體水平。免疫后每隔1個月每組隨機收集雞蛋20～30枚，進行卵黃禽流感抗體檢測，直至群體免疫抗體合格率低于國家規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)為止。

1.2.4 檢測及結(jié)果判定方法

檢測方法按照國標(biāo)《高致病性禽流感診斷技術(shù)》（GB/T 18936-2003）中血凝和血凝抑制試驗（HA-HI）進行，結(jié)果判定方法按照《蛋禽H5亞型禽流感免疫抗體卵黃檢測技術(shù)規(guī)程》（DB 13/946-2008）規(guī)定方法進行。

2 結(jié)果

2.1 母源抗體水平

對30枚120日齡雞群的雞蛋進行禽流感H5N1（Re-4株）、禽流感H5N1（Re-6株）和禽流感H9亞型免疫抗體檢測，結(jié)果抗體水平范圍介于（3～6）lg2之間，其中H5亞型Re-4株禽流感群體免疫抗體合格率為63.33%，H5亞型Re-6株禽流感群體免疫抗體合格率為53.33%，H9亞型禽流感群體免疫抗體合格率為56.66%，均低于國家規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)。

2.2 疫苗免疫結(jié)果

雙價疫苗免疫效果見圖1和圖2，單價疫苗免疫效果見圖3，二聯(lián)疫苗免疫效果見圖4和圖5。

3 小結(jié)與討論

從圖1和圖2可以看出，7個不同廠家的高致病性禽流感重組二價疫苗免疫1個月后抗體效價基本上均達到峰值，然后逐步緩慢下降，到5～7個月后免疫抗體群體合格率低于國家規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)（70%）。總體分析，盡管禽流感H5N1（Re-4株）免疫抗體效價相對要高于H5N1（Re-6株），但7個廠家疫苗中H5N1 Re-4株和Re-6株病毒含量配比還是比較合理的，它們的免疫抗體保護期均比較一致（只有C1疫苗兩個不同重組毒株免疫抗體保護期有所不同，其中H5N1 Re-4株免疫抗體保護期均為5個月，而H5N1 Re-6株免疫抗體保護期為6個月）。從免疫保護期長短分析，A1疫苗質(zhì)量最好，兩個不同重組毒株免疫抗體保護期均為7個月，其次是D1和G1，兩個不同重組毒株免疫抗體保護期均為6個月。

圖3結(jié)果顯示，5個不同廠家的H5N1（Re-6株）免疫抗體值和免疫抗體保護期均相差不大，同圖2結(jié)果比較可以看出，單苗無論是在免疫抗體值方面，還是在免疫保護期方面，均好于聯(lián)苗，這可能與疫苗中毒株的有效含量配比有關(guān)。

圖4和圖5的結(jié)果表明，兩個廠家的H5+H9二聯(lián)滅活疫苗中H9亞型禽流感的免疫效果要好于H5亞型禽流感的免疫效果。

在對不同廠家不同品種禽流感疫苗免疫效果進行統(tǒng)計分析的同時，我們也對抗體值進行離散度分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，A1、B1、D1、G1、C2、G2、H2、B3和F3疫苗免疫抗體值整齊度較好，離散度相對較低，均低于40%；保護期中段抗體值離散度明顯低于保護期前段和后端，尤其是后端。當(dāng)群體免疫抗體合格率接近或低于70%時，其離散度值偏高，有的甚至超過80%。所以，養(yǎng)雞場使用上述免疫抗體保護期為5個月的疫苗對產(chǎn)蛋雞群進行免疫時，我們建議其免疫間隔期為4個月。

本次比對試驗的開展，摸清了2012年部分禽流感疫苗質(zhì)量，確保了使用這些廠生產(chǎn)的疫苗的養(yǎng)雞場雞群的免疫效果，促進了疫苗廠家對其產(chǎn)品質(zhì)量的重視，同時為以后的禽流感疫苗的選擇提供了參考。

（編輯：郭遠）