秦丹　杜志雯　閆金秀　武培

摘要[目的]研究無花果葉和博落回葉幾種不同有機(jī)溶劑提取液對松材線蟲的殺蟲活性。[方法]采用浸漬生測法研究了無花果葉和博落回葉甲醇、乙醇、乙醚、丙酮4種分析純有機(jī)溶劑提取液對松材線蟲的抑制作用。[結(jié)果]無花果葉和博落回葉的不同溶劑提取液均對松材線蟲有抑制作用，其中無花果葉提取液濃度在200 mg/ml時(shí)，甲醇提取液的松材線蟲死亡率（54.5%）最高；博落回葉提取液濃度在200 mg/ml時(shí)，蒸餾水對照組和甲醇提取液在72 h校正死亡率分別達(dá)到94.4%和88.9%，在20 mg/ml時(shí)2種溶劑提取液校正死亡率也分別達(dá)到73.3%和67.6%。[結(jié)論]為新型殺松材線蟲藥劑的綜合開發(fā)利用提供了理論依據(jù)。

關(guān)鍵詞無花果；博落回；提取物；松材線蟲；毒殺作用

中圖分類號S482.39文獻(xiàn)標(biāo)識碼A文章編號0517-6611（2014）22-07412-02

松材線蟲病是我國二類檢疫病害，它是由松材線蟲（Bursaphelenchus xylophilus）寄生在松樹體內(nèi)所引起的一種毀滅性病害。松材線蟲主要危害日本黑松、馬尾松、西黃松、歐洲赤松、海岸松和黃山松等松屬植物[1]。目前對松材線蟲有毒殺作用的化學(xué)物質(zhì)由于水溶性、內(nèi)吸性差、結(jié)構(gòu)復(fù)雜以及合成困難、毒性高、成本高等原因影響實(shí)際應(yīng)用，迫切需要研發(fā)出經(jīng)濟(jì)環(huán)保的新型殺松材線蟲藥劑。

博落回（Macleaya cordata），又名落回、號筒草等，為多年生大型草本，基部灌木狀，主要分布在日本和我國淮河以南。莖葉中的生物堿對蠅蛆[2]和糞線蟲有較好的滅殺活性[3]，葉中分離得到的血根堿能殺滅魚類指環(huán)蟲[4]，具有良好的抑菌活性。無花果（Ficus carica Linn），屬于?？疲∕oraceae）榕屬（Ficus），葉片寬大，表面光滑，具有抗病毒、抗菌、降血糖、降血脂、抗腫瘤、降血壓、治療白癜風(fēng)等作用[5]，其所含化學(xué)成分有呋喃香豆素、補(bǔ)骨脂素、黃酮、果膠、香檸檬內(nèi)酯、樹脂、糖類和VC等[6-9]，是一種具有開發(fā)應(yīng)用前景的資源。筆者利用不同溶劑對無花果葉和博落回葉進(jìn)行了粗提，并對制成的提取液進(jìn)行了殺松材線蟲活性研究，以期為新型殺松材線蟲藥劑的綜合開發(fā)利用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1材料 供試無花果葉和博落回葉采自安徽科技學(xué)院；供試線蟲從安徽省鳳陽縣病區(qū)松樹分離，在25 ℃培養(yǎng)箱中用玉米粒培養(yǎng)基培養(yǎng)的盤多毛孢（Pestalotia sp.）培養(yǎng)15 d后，用改良貝曼漏斗法分離收集線蟲。

1.2方法

1.2.1 無花果粗提液的制備。無花果鮮葉用清水洗凈泥土，取10 g晾干后的鮮葉剪碎于研缽中，加少許石英砂和提取劑，在冷水中充分研磨，完全轉(zhuǎn)移至500 ml錐形瓶中。加入150 ml提取劑，用超聲波振蕩器處理10 min，用保鮮膜封口，靜置過夜。然后將提取液在真空抽濾機(jī)上抽濾，濾渣再加入50 ml提取劑，輕輕搖晃并靜置30 min后過濾，合并濾液，制得粗提取液[10]。

1.2.2 博落回粗提液的制備。因博落回有毒，處理材料時(shí)要戴手套，洗凈泥土，剪去莖。取10 g晾干后的鮮葉剪碎于研缽中，加少許石英砂和提取劑，在冷水中充分研磨，完全轉(zhuǎn)移至500 ml錐形瓶中。加入150 ml提取劑，用超聲波振蕩器處理10 min，用保鮮膜封口，靜置過夜。然后將提取液在真空抽濾機(jī)上抽濾，濾渣中再加入50 ml提取劑，輕輕搖晃并靜置30 min后過濾，合并濾液，制得粗提取液。

1.2.3 提取液的濃縮。將粗提取液倒入蒸發(fā)瓶中，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上蒸發(fā)濃縮至黏稠狀，用少量蒸餾水多次沖洗蒸發(fā)瓶，將葉的提取液完全轉(zhuǎn)移到容量瓶中，用蒸餾水定容。無花果葉提取液定容至50 ml，配制成相當(dāng)于無花果鮮葉200 mg/ml的溶液；博落回葉提取液分別定容至50和500 ml的溶液，配制成相當(dāng)于博落回鮮葉200和20 mg/ml的溶液，搖勻，置于4 ℃冰箱中備用[11]。

1.2.4殺線蟲活性的測定。采用浸漬生測法[11]。取3 ml提取物加入直徑為3 cm的培養(yǎng)皿，向培養(yǎng)皿中挑入大小一致、生長狀態(tài)良好的松材線蟲30條，每個(gè)培養(yǎng)皿作為1個(gè)處理，每處理3個(gè)重復(fù)，對照為蒸餾水。加蓋，置于25 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24、48、72 h，用體式顯微鏡（COVS50G）檢查線蟲死亡或存活數(shù)量[12]。各處理校正死亡率按Abbott公式計(jì)算，按照文獻(xiàn)[13]方法對殺線蟲活性強(qiáng)弱進(jìn)行如下分級：“-”表示校正死亡率≤10%，無殺線蟲活性；“+”表示校正死亡率為10%～30%，殺線蟲活性弱；“++”表示校正死亡率為30%～50%，殺線蟲活性中等；“+++”表示校正死亡率為50%～80%，殺線蟲活性較強(qiáng)；“++++”表示校正死亡率>80%，殺線蟲活性強(qiáng)。通過SAS（V6.2）程序求解毒力回歸方程。

2結(jié)果與分析

2.1 200 mg/ml無花果葉不同溶劑提取液對松材線蟲的毒力 由表1可知，200 mg/ml無花果葉不同溶劑提取液處理24 h，只有甲醇提取液有殺線蟲活性，72 h后4種溶劑提取液