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        無花果葉和博落回葉提取液對松材線蟲的毒殺作用

        2014-04-29 00:44:03秦丹杜志雯閆金秀武培
        安徽農(nóng)業(yè)科學(xué) 2014年22期
        關(guān)鍵詞:博落回提取物

        秦丹 杜志雯 閆金秀 武培

        摘要[目的]研究無花果葉和博落回葉幾種不同有機(jī)溶劑提取液對松材線蟲的殺蟲活性。[方法]采用浸漬生測法研究了無花果葉和博落回葉甲醇、乙醇、乙醚、丙酮4種分析純有機(jī)溶劑提取液對松材線蟲的抑制作用。[結(jié)果]無花果葉和博落回葉的不同溶劑提取液均對松材線蟲有抑制作用,其中無花果葉提取液濃度在200 mg/ml時(shí),甲醇提取液的松材線蟲死亡率(54.5%)最高;博落回葉提取液濃度在200 mg/ml時(shí),蒸餾水對照組和甲醇提取液在72 h校正死亡率分別達(dá)到94.4%和88.9%,在20 mg/ml時(shí)2種溶劑提取液校正死亡率也分別達(dá)到73.3%和67.6%。[結(jié)論]為新型殺松材線蟲藥劑的綜合開發(fā)利用提供了理論依據(jù)。

        關(guān)鍵詞無花果;博落回;提取物;松材線蟲;毒殺作用

        中圖分類號S482.39文獻(xiàn)標(biāo)識碼A文章編號0517-6611(2014)22-07412-02

        松材線蟲病是我國二類檢疫病害,它是由松材線蟲(Bursaphelenchus xylophilus)寄生在松樹體內(nèi)所引起的一種毀滅性病害。松材線蟲主要危害日本黑松、馬尾松、西黃松、歐洲赤松、海岸松和黃山松等松屬植物[1]。目前對松材線蟲有毒殺作用的化學(xué)物質(zhì)由于水溶性、內(nèi)吸性差、結(jié)構(gòu)復(fù)雜以及合成困難、毒性高、成本高等原因影響實(shí)際應(yīng)用,迫切需要研發(fā)出經(jīng)濟(jì)環(huán)保的新型殺松材線蟲藥劑。

        博落回(Macleaya cordata),又名落回、號筒草等,為多年生大型草本,基部灌木狀,主要分布在日本和我國淮河以南。莖葉中的生物堿對蠅蛆[2]和糞線蟲有較好的滅殺活性[3],葉中分離得到的血根堿能殺滅魚類指環(huán)蟲[4],具有良好的抑菌活性。無花果(Ficus carica Linn),屬于??疲∕oraceae)榕屬(Ficus),葉片寬大,表面光滑,具有抗病毒、抗菌、降血糖、降血脂、抗腫瘤、降血壓、治療白癜風(fēng)等作用[5],其所含化學(xué)成分有呋喃香豆素、補(bǔ)骨脂素、黃酮、果膠、香檸檬內(nèi)酯、樹脂、糖類和VC等[6-9],是一種具有開發(fā)應(yīng)用前景的資源。筆者利用不同溶劑對無花果葉和博落回葉進(jìn)行了粗提,并對制成的提取液進(jìn)行了殺松材線蟲活性研究,以期為新型殺松材線蟲藥劑的綜合開發(fā)利用提供理論依據(jù)。

        1 材料與方法

        1.1材料 供試無花果葉和博落回葉采自安徽科技學(xué)院;供試線蟲從安徽省鳳陽縣病區(qū)松樹分離,在25 ℃培養(yǎng)箱中用玉米粒培養(yǎng)基培養(yǎng)的盤多毛孢(Pestalotia sp.)培養(yǎng)15 d后,用改良貝曼漏斗法分離收集線蟲。

        1.2方法

        1.2.1 無花果粗提液的制備。無花果鮮葉用清水洗凈泥土,取10 g晾干后的鮮葉剪碎于研缽中,加少許石英砂和提取劑,在冷水中充分研磨,完全轉(zhuǎn)移至500 ml錐形瓶中。加入150 ml提取劑,用超聲波振蕩器處理10 min,用保鮮膜封口,靜置過夜。然后將提取液在真空抽濾機(jī)上抽濾,濾渣再加入50 ml提取劑,輕輕搖晃并靜置30 min后過濾,合并濾液,制得粗提取液[10]。

        1.2.2 博落回粗提液的制備。因博落回有毒,處理材料時(shí)要戴手套,洗凈泥土,剪去莖。取10 g晾干后的鮮葉剪碎于研缽中,加少許石英砂和提取劑,在冷水中充分研磨,完全轉(zhuǎn)移至500 ml錐形瓶中。加入150 ml提取劑,用超聲波振蕩器處理10 min,用保鮮膜封口,靜置過夜。然后將提取液在真空抽濾機(jī)上抽濾,濾渣中再加入50 ml提取劑,輕輕搖晃并靜置30 min后過濾,合并濾液,制得粗提取液。

        1.2.3 提取液的濃縮。將粗提取液倒入蒸發(fā)瓶中,在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上蒸發(fā)濃縮至黏稠狀,用少量蒸餾水多次沖洗蒸發(fā)瓶,將葉的提取液完全轉(zhuǎn)移到容量瓶中,用蒸餾水定容。無花果葉提取液定容至50 ml,配制成相當(dāng)于無花果鮮葉200 mg/ml的溶液;博落回葉提取液分別定容至50和500 ml的溶液,配制成相當(dāng)于博落回鮮葉200和20 mg/ml的溶液,搖勻,置于4 ℃冰箱中備用[11]。

        1.2.4殺線蟲活性的測定。采用浸漬生測法[11]。取3 ml提取物加入直徑為3 cm的培養(yǎng)皿,向培養(yǎng)皿中挑入大小一致、生長狀態(tài)良好的松材線蟲30條,每個(gè)培養(yǎng)皿作為1個(gè)處理,每處理3個(gè)重復(fù),對照為蒸餾水。加蓋,置于25 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24、48、72 h,用體式顯微鏡(COVS50G)檢查線蟲死亡或存活數(shù)量[12]。各處理校正死亡率按Abbott公式計(jì)算,按照文獻(xiàn)[13]方法對殺線蟲活性強(qiáng)弱進(jìn)行如下分級:“-”表示校正死亡率≤10%,無殺線蟲活性;“+”表示校正死亡率為10%~30%,殺線蟲活性弱;“++”表示校正死亡率為30%~50%,殺線蟲活性中等;“+++”表示校正死亡率為50%~80%,殺線蟲活性較強(qiáng);“++++”表示校正死亡率>80%,殺線蟲活性強(qiáng)。通過SAS(V6.2)程序求解毒力回歸方程。

        2結(jié)果與分析

        2.1 200 mg/ml無花果葉不同溶劑提取液對松材線蟲的毒力 由表1可知,200 mg/ml無花果葉不同溶劑提取液處理24 h,只有甲醇提取液有殺線蟲活性,72 h后4種溶劑提取液

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