王友等

摘 要：本研究分別測(cè)定了兩種病毒性關(guān)節(jié)炎活疫苗ZJS株和S1133株的TCID50。其中ZJS疫苗株的TCID50為104.5TCID50/羽份，S1133疫苗株的TCID50為103.5TCID50/羽份。通過(guò)進(jìn)一步的攻毒保護(hù)實(shí)驗(yàn)，證實(shí)ZJS疫苗株對(duì)SPF雞的臨床保護(hù)力明顯優(yōu)于S1133疫苗株。

關(guān)鍵詞：病毒性關(guān)節(jié)炎；活疫苗；臨床保護(hù)力

Abstract： The TCID50 of Viral arthritis live vaccine ZJS strain and S1133 strain were determined in this research. The result displayed ZJS strain is 104.5TCID50/dose， and S1133 strain is 103.5TCID50/dose. The further SPF chicken protection experiment indicated that ZJS vaccine strain is much better than S1133strain in the clinical protection of SPF chicken.

Key Words：viral arthritis； live vaccine； protection

病毒性關(guān)節(jié)炎是一種可以由不同血清型和致病型呼腸弧病毒引起導(dǎo)致重大經(jīng)濟(jì)損失的疾病。該病主要侵害肉雞，也可見(jiàn)于商品蛋雞和火雞。該病主要表現(xiàn)為患病雞輕度呼吸道疾病、肝臟壞死及腱和滑膜的炎癥。選擇對(duì)雞致病的呼腸弧病毒人工接種火雞可以產(chǎn)生與病毒性關(guān)節(jié)炎一致的病變。

本病可以使用致弱活疫苗和滅活全病毒疫苗接種來(lái)控制典型的雞呼腸弧病毒感染。母源抗體的保護(hù)對(duì)于該病的防控具有重要意義，種雞接種活苗和滅活疫苗后產(chǎn)生抗體可以防止后代發(fā)生接觸傳染和經(jīng)卵垂直傳播。

Vander Heide等利用禽呼腸弧病毒S1133株開(kāi)發(fā)了第一代商品化的活疫苗，雖然父母代種雞都在免疫該毒株，但是仍有很多免疫失敗的現(xiàn)象發(fā)生。一株新鑒定的呼腸弧病毒毒株，命名為ZJS株，該毒株具有良好的免疫原性和穩(wěn)定性，能夠在雞胚成纖維細(xì)胞上穩(wěn)定傳代，該毒株通過(guò)致弱后，可制作成活疫苗。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)對(duì)SPF雞攻毒保護(hù)實(shí)驗(yàn)，比較了兩種病毒性關(guān)節(jié)炎活疫苗的臨床保護(hù)效果，結(jié)果顯示ZJS株疫苗臨床保護(hù)效果明顯優(yōu)于傳統(tǒng)的S1133株疫苗。

1材料

1.1疫苗和種毒

雞病毒性關(guān)節(jié)炎活疫苗-ZJS株由瑞普（保定）生物藥業(yè)有限公司生產(chǎn)；雞病毒性關(guān)節(jié)炎活疫苗S1133株由國(guó)外某藥業(yè)公司生產(chǎn)；攻毒用種毒為S1133野毒株，由中國(guó)獸藥監(jiān)察所提供。

1.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

SPF雞胚購(gòu)自北京梅里亞維通實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司，7日齡SPF雛雞由瑞普（保定）公司疫苗研發(fā)實(shí)驗(yàn)室孵化。

1.3實(shí)驗(yàn)試劑

細(xì)胞培養(yǎng)液，胰酶，胎牛血清，細(xì)胞培養(yǎng)板，肉雞1#料等，其他試劑均為國(guó)內(nèi)分析純產(chǎn)品。

1.4實(shí)驗(yàn)儀器

CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱，剪刀，鑷子，離心機(jī)，渦旋儀，注射器，SPF雞負(fù)壓隔離器等。

2方法

2.1 ZJS疫苗和S1133疫苗TCID50的測(cè)定

2.1.1 按照常規(guī)方法制備雞胚成纖維細(xì)胞（參考王友 尤永君等《一種優(yōu)化的雞胚成纖維細(xì)胞制備方法及細(xì)胞生長(zhǎng)曲線測(cè)定》）。

2.1.2取1瓶ZJS凍干苗（1 000dose）用200 mL疫苗稀釋液稀釋后。取0.2 mL做病毒原液，從0.2 mL原液中取20 μL加到180 μL稀釋液中充分混勻；從此稀釋液中取20 μL加到180 μL稀釋液中充分混勻；依次倍比稀釋至10-10。取1塊鋪滿(mǎn)單層次代CEF細(xì)胞的96孔板。前4排接種ZJS株，后4排接種S1133株。每種病毒作11個(gè)梯度，每孔加20μL病毒稀釋液，每個(gè)稀釋度重復(fù)4個(gè)孔，第12孔做陰性對(duì)照只加20 μL不含病毒的稀釋液。于37℃，5% CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)5～7 d，每天觀察細(xì)胞病變記錄并拍照，按照Reed-Munech方法計(jì)算病毒的TCID50。測(cè)定方法同上。

2.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組

1日齡健康REO抗體檢測(cè)陰性的SPF雞隨機(jī)分成4組。A組為ZJS免疫組；B組為S1133免疫組；C組為不免疫只攻毒對(duì)照；D組為不免疫不攻毒對(duì)照。A組、B組和C組每組14只雞，D組6只雞

2.3免疫實(shí)驗(yàn)

飼養(yǎng)至7日齡的SPF雞，A組每羽頸皮下接種1dose ZJS株疫苗，B組每羽頸皮下接種1dose S1133株疫苗，C組和D組每羽頸皮下注射0.2 mL疫苗稀釋液。免疫后每日觀察雞群采食和精神狀態(tài)。

2.4攻毒實(shí)驗(yàn)

免疫后21 d，A組、B組和C組所有雞均經(jīng)左側(cè)足墊以104.0EID50的劑量（按照標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程劑量）注射攻毒，D組左側(cè)足墊注射0.2 mL無(wú)菌稀釋液。攻毒后每天觀察雞群采食狀況，精神狀態(tài)以及足部和腿部關(guān)節(jié)變化情況，并記錄。

3結(jié)果

3.1 ZJS株與S113株疫苗TCID50測(cè)定結(jié)果

結(jié)果測(cè)得ZJS株疫苗為104.38 TCID50/羽份，S1133株疫苗為103.5 TCID50/羽份。

3.2 SPF雞群生長(zhǎng)狀況（見(jiàn)圖1～3）

3.3攻毒后雞群發(fā)病情況統(tǒng)計(jì)

攻毒對(duì)照組的雞群在攻毒后2 d開(kāi)始發(fā)病，可以見(jiàn)到明顯的左側(cè)足墊腫脹，趾關(guān)節(jié)腫脹。攻毒后第7天，A組有1只左側(cè)足墊出現(xiàn)非常輕微的腫脹；B組有2只出現(xiàn)輕微腫脹，另外有3只出現(xiàn)趾部破損；C組14只雞全部都出現(xiàn)左側(cè)趾部腫脹，并且其中有9只腫脹嚴(yán)重的出現(xiàn)趾部破損；D組不免疫不攻毒對(duì)照組一直正常（見(jiàn)圖4～13）。

從圖中臨床癥狀可以看出ZJS株和S1133株均能對(duì)呼腸弧病毒強(qiáng)毒產(chǎn)生保護(hù)。S1133組雖然也出現(xiàn)足部腫脹和皮膚破損病例，但是發(fā)病情況明顯輕于攻毒組，說(shuō)明S1133疫苗可以對(duì)病關(guān)強(qiáng)毒產(chǎn)生一定的抵抗；ZJS株僅造成一例輕微腫脹也沒(méi)有皮膚破損病例出現(xiàn)，可見(jiàn)ZJS疫苗株對(duì)強(qiáng)毒的保護(hù)力明顯高于S1133疫苗株。

4討論

呼腸弧病毒感染雞特別是肉雞導(dǎo)致病毒性關(guān)節(jié)炎、腱鞘炎，雞群常因跛行和總體生產(chǎn)性能低下，包括增重減少、飼料轉(zhuǎn)化率降低、淘汰率高（有時(shí)廢棄率高達(dá)20%～40%）、屠宰率下降、死亡增加，種雞產(chǎn)蛋下降、受精率降低及垂直傳鼻病毒等降低了雞的經(jīng)濟(jì)價(jià)值，造成嚴(yán)重經(jīng)濟(jì)損失。種雞在育雛和育成期接種活苗和滅活疫苗是控制本病的經(jīng)典方法。

在開(kāi)發(fā)用于雛雞免疫，預(yù)防病毒性關(guān)節(jié)炎的活疫苗時(shí)，需要建立效檢用強(qiáng)毒株，用于評(píng)價(jià)雛雞預(yù)防用病毒性關(guān)節(jié)炎活疫苗的效力可行性。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)經(jīng)典的臨床攻毒保護(hù)實(shí)驗(yàn)，證實(shí)了新毒株ZJS制備的活疫苗在安全性和保護(hù)力上均優(yōu)于傳統(tǒng)的S1133疫苗毒株。ZJS疫苗具有更好地保護(hù)效果，在規(guī)?；u場(chǎng)防控病毒性關(guān)節(jié)炎的程序中將發(fā)揮極大地作用，具有廣闊的市場(chǎng)前景。

（編輯：何芳）