郭會(huì)玲,易 忠,魏玉榮，馬文戈，埃尼瓦爾·太外庫(kù)力，斯馬依·伊斯拉木，

達(dá)力夏·孜乃提5，包拉提6，魏 婕2，王 延2，薛 英2，黃 炯2*，姚 剛1

（1.新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)學(xué)院，新疆 烏魯木齊 830052；2.新疆畜牧科學(xué)院獸醫(yī)研究所，新疆 烏魯木齊 830000；3.新疆喀什地區(qū)動(dòng)物疾病控制與診斷中心，新疆 喀什 844000；4.新疆塔什庫(kù)爾干縣畜牧獸醫(yī)站，新疆 塔什庫(kù)爾干 845250；5.新疆塔什庫(kù)爾干縣達(dá)布達(dá)爾鄉(xiāng)畜牧獸醫(yī)站，新疆 塔什庫(kù)爾干 845250；6.新疆昭蘇縣畜牧獸醫(yī)站，新疆 昭蘇 835600）

哨兵動(dòng)物口蹄疫抗體及病原學(xué)檢測(cè)報(bào)告

郭會(huì)玲1、2,易 忠2,魏玉榮2，馬文戈2，埃尼瓦爾·太外庫(kù)力3，斯馬依·伊斯拉木4，

達(dá)力夏·孜乃提5，包拉提6，魏 婕2，王 延2，薛 英2，黃 炯2*，姚 剛1

（1.新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)學(xué)院，新疆 烏魯木齊 830052；2.新疆畜牧科學(xué)院獸醫(yī)研究所，新疆 烏魯木齊 830000；3.新疆喀什地區(qū)動(dòng)物疾病控制與診斷中心，新疆 喀什 844000；4.新疆塔什庫(kù)爾干縣畜牧獸醫(yī)站，新疆 塔什庫(kù)爾干 845250；5.新疆塔什庫(kù)爾干縣達(dá)布達(dá)爾鄉(xiāng)畜牧獸醫(yī)站，新疆 塔什庫(kù)爾干 845250；6.新疆昭蘇縣畜牧獸醫(yī)站，新疆 昭蘇 835600）

2013年哨兵動(dòng)物口蹄疫抗體及病原學(xué)檢測(cè)結(jié)果表明，哨兵動(dòng)物群體中不存在口蹄疫病畜或健康帶毒畜，但是群體口蹄疫免疫抗體水平不高，需要強(qiáng)化免疫。

哨兵動(dòng)物；口蹄疫；免疫抗體；病原學(xué)

口蹄疫（Foot-and-mouth disease，F(xiàn)MD）是有口蹄疫病毒（Foot-and-mouth disease virus，F(xiàn)MDV）引起的世界性重大動(dòng)物疫病，嚴(yán)重制約著全球畜牧業(yè)的發(fā)展，世界各國(guó)深受其害[1]。為了了解新疆邊境地區(qū)野生偶蹄動(dòng)物中口蹄疫潛伏和感染狀況，評(píng)價(jià)和監(jiān)測(cè)口蹄疫隨野生動(dòng)物跨境傳播的流行因素，本研究團(tuán)隊(duì)在邊境地區(qū)設(shè)置哨兵動(dòng)物監(jiān)測(cè)站，并對(duì)哨兵動(dòng)物進(jìn)行口蹄疫抗體水平及病原學(xué)檢測(cè)?，F(xiàn)將檢測(cè)結(jié)果報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 樣品采集情況動(dòng)物種類：羊、牛、牦牛及駱駝。樣品種類：血清、O-P液。

采集地點(diǎn)：阿爾泰山山區(qū)哨兵動(dòng)物監(jiān)測(cè)站、天山山區(qū)哨兵動(dòng)物監(jiān)測(cè)站及昆侖山山區(qū)哨兵動(dòng)物監(jiān)測(cè)站。

1.2 檢測(cè)方法及試劑盒

口蹄疫免疫抗體檢測(cè)使用液相阻斷ELISA（Liquid-phase blocking ELISA）方法，試劑盒購(gòu)自中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所，批號(hào)20130927。

口蹄疫感染抗體檢測(cè)使用非結(jié)構(gòu)蛋白3ABC ELISA（FMD 3ABC-I-ELISA）方法，試劑盒購(gòu)自中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所，批號(hào)20130710。

口蹄疫病原學(xué)檢測(cè)采用多重RT-PCR（Multi-RT-PCR）方法，試劑盒購(gòu)自中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所，批號(hào)20130827。

1.3 操作步驟與判定標(biāo)準(zhǔn)

1.3.1 口蹄疫免疫抗體檢測(cè)

按照口蹄疫免疫抗體檢測(cè)使用液相阻斷ELISA（Liquid-phase blocking ELISA）說明書的要求進(jìn)行。結(jié)果判定：

1.3.1.1 試驗(yàn)成立的標(biāo)準(zhǔn) 每次試驗(yàn)，每塊板必須設(shè)立病毒抗原對(duì)照和陰陽性血清對(duì)照。病毒抗原對(duì)照至少兩個(gè)孔的OD值在1.0以上，最好在1.0～1.6之間；陽性對(duì)照抗體滴度應(yīng)在1∶10241滴度；陰性對(duì)照抗體滴度應(yīng)小于1∶4。

1.3.1.2 病毒抗原對(duì)照平均OD值50%計(jì)算（臨界值） 抗原對(duì)照孔是4孔，分別棄去最高和最低OD值，計(jì)算剩余2孔的平均OD值，再除以2，即為50%對(duì)照值。該值即為臨界值。

1.3.1.3 判定標(biāo)準(zhǔn) 以病毒抗原對(duì)照平均OD值的50%為臨界值。被檢血清OD值大于臨界值的孔為陰性，小于或等于的孔為陽性，陽性孔的OD值等于臨界值時(shí)所對(duì)應(yīng)的稀釋度為該份血清的抗體滴度。如病毒抗原對(duì)照平均OD值為1.2，則其50%為0.6。如待檢血清在1∶128時(shí)的OD值為0.6，則該份待檢血清的抗體滴度為1∶128。若臨界值處于兩個(gè)之間，則抗體滴度取中間值。

1.3.1.4 ELISA抗體滴度與免疫動(dòng)物攻毒保護(hù)的關(guān)系 牛、羊：ELISA抗體效價(jià)≥1∶128時(shí)，屬于99%以上保護(hù)范圍；ELISA抗體效價(jià)≤1∶16時(shí)，屬于不保護(hù)范圍，需要進(jìn)行基礎(chǔ)免疫；抗體效價(jià)在1∶22～1∶90時(shí)，屬于50%保護(hù)效價(jià)范圍，需要進(jìn)行加強(qiáng)免疫。

1.3.2 口蹄疫感染抗體檢測(cè)

按照口蹄疫病毒非結(jié)構(gòu)蛋白抗體檢測(cè)試劑盒（FMD 3ABC-I-ELISA）說明書的要求進(jìn)行。

結(jié)果判定：按檢測(cè)試劑盒判定標(biāo)準(zhǔn)，即效價(jià)＜0.2，為陰性；效價(jià)在0.2～0.3之間為可疑；效價(jià)＞0.3為陽性。陽性樣品應(yīng)進(jìn)行復(fù)檢。

1.3.3 口蹄疫病原學(xué)檢測(cè)

按照口蹄疫病原學(xué)檢測(cè)采用多重RT-PCR（Multi-RT-PCR）說明書的要求進(jìn)行。

結(jié)果判定紫外燈下，強(qiáng)陽性樣品電泳結(jié)果應(yīng)為3條大小不一的條帶，分別為634bp、483bp和278bp。某一待檢樣品擴(kuò)增產(chǎn)物DNA帶至少有一條與上述條帶大小相符，同時(shí)空白對(duì)照無擴(kuò)增條帶，則該樣品判定為陽性，否則為陰性。

2 結(jié)果與分析

2.1 哨兵動(dòng)物監(jiān)測(cè)站樣品采集情況

本研究邊境地區(qū)哨兵動(dòng)物監(jiān)測(cè)站動(dòng)物進(jìn)行定期采樣，采樣涉及3個(gè)地區(qū)4種動(dòng)物2種類型的樣品，共計(jì)566份樣品，具體樣品采集情況見表1。

表1 動(dòng)物樣品采集情況

2.2 哨兵動(dòng)物監(jiān)測(cè)站動(dòng)物樣品口蹄疫檢測(cè)情況

為了清楚的了解哨兵動(dòng)物口蹄疫免疫情況及攜帶或感染口蹄疫情況，分別對(duì)采集的動(dòng)物樣品進(jìn)行了口蹄疫3種檢測(cè)項(xiàng)目，具體見表2。

表2 監(jiān)測(cè)站動(dòng)物樣品口蹄疫檢測(cè)情況

2.3 口蹄疫免疫抗體檢測(cè)結(jié)果

采集哨兵動(dòng)物樣品的口蹄疫3種血清型免疫抗體檢測(cè)結(jié)果見表3。

表3 哨兵動(dòng)物口蹄疫免疫抗體檢測(cè)結(jié)果

從表3中可見，阿爾泰山的駱駝口蹄疫免疫抗體最低，3種血清型抗體均≤1:16；阿爾泰山的牛及天山的?？谔阋呙庖呖贵w水平比較整齊，3種血清型抗體幾乎均在22～90或≥1:128；3個(gè)地區(qū)的羊及昆侖山的牦牛口蹄疫免疫水平均不高，有待于免疫加強(qiáng)。

2.4 口蹄疫感染抗體檢測(cè)結(jié)果

采集哨兵動(dòng)物樣品的口蹄疫感染抗體檢測(cè)結(jié)果如表4。

表4 哨兵動(dòng)物樣品口蹄疫感染抗體監(jiān)測(cè)結(jié)果

從表4中可見牦牛未檢測(cè)到感染抗體；阿爾泰山的牛、羊中也未檢測(cè)到口蹄疫感染抗體；昆侖山的牛、羊口蹄疫感染陽性率分別是6.35%和7.98%；天山的牛、羊感染抗體陽性率更高，分別是89.47%和16.13%?？谔阋吒腥究贵w水平高，可能來自兩個(gè)方面：曾經(jīng)感染過口蹄疫；反復(fù)注射疫苗后引起的非結(jié)構(gòu)蛋白抗體致使檢測(cè)結(jié)果呈現(xiàn)假陽性。為了更清楚獲知感染抗體陽性動(dòng)物是真正被口蹄疫感染還是注射疫苗造成，可通過病原學(xué)檢測(cè)佐證。

2.5 口蹄疫病原學(xué)樣品監(jiān)測(cè)結(jié)果

采集哨兵動(dòng)物樣品的口蹄疫病原學(xué)檢測(cè)結(jié)果如表5，部分樣品的RT-PCR結(jié)果見圖1。

表5 哨兵動(dòng)物樣品口蹄疫病原學(xué)檢測(cè)結(jié)果

圖1 部分哨兵動(dòng)物樣品口蹄疫病原學(xué)檢測(cè)RT-PCR結(jié)果

從表5和圖1（部分樣品RT-PCR電泳結(jié)果）可見，3個(gè)地區(qū)186份樣品的病原學(xué)檢測(cè)均為陰性，可見上述哨兵動(dòng)物均不存在口蹄疫感染情況，檢測(cè)到的高感染抗體水平均有反復(fù)注射疫苗引起，也間接反應(yīng)3ABC-I-ELISA試劑盒在檢測(cè)反復(fù)疫苗動(dòng)物感染抗體水平時(shí)存在不足，如果要確實(shí)掌握動(dòng)物群體口蹄疫感染情況，必須將免疫抗體檢測(cè)與病原學(xué)檢測(cè)相結(jié)合。

3 討 論

哨兵動(dòng)物(sentinel animals)通常為有意識(shí)地暴露在某一特定環(huán)境中用來查明某傳染因子存在狀況的易感動(dòng)物。由于哨兵動(dòng)物在動(dòng)物疫病監(jiān)測(cè)中具有成本低、使用方便及可操作性強(qiáng)等特點(diǎn)，OIE和發(fā)達(dá)國(guó)家所普遍采用哨兵動(dòng)物進(jìn)行動(dòng)物疫病監(jiān)測(cè)[2]。

本研究中通過對(duì)阿爾泰山、天山及昆侖山邊境地區(qū)哨兵動(dòng)物監(jiān)測(cè)站動(dòng)物進(jìn)行樣品采集、樣品口蹄疫抗體及病原學(xué)檢測(cè)，結(jié)果顯示目前哨兵動(dòng)物群體中不存在口蹄疫病畜或健康帶毒畜。

3個(gè)地區(qū)的哨兵動(dòng)物群體口蹄疫免疫抗體較低，且免疫抗體參差不齊，尤其是阿爾泰山山區(qū)的駱駝幾乎檢測(cè)不到免疫抗體水平（3種血清型抗體均≤1:16），因此3個(gè)地區(qū)的哨兵動(dòng)物群體均需要加強(qiáng)口蹄疫免疫。

雖然哨兵動(dòng)物樣品感染抗體檢測(cè)中出現(xiàn)極高的感染抗體水平即天山山區(qū)的牛、羊感染抗體陽性率分別是89.47%和16.13%，但是通過病原學(xué)復(fù)核檢測(cè)后發(fā)現(xiàn)病原學(xué)樣品監(jiān)測(cè)結(jié)果均為陰性。這些與本研究團(tuán)隊(duì)曾經(jīng)的檢測(cè)結(jié)果一致：感染抗體水平高與動(dòng)物免疫次數(shù)有一定關(guān)系，免疫的次數(shù)越多，其檢出率越高[3]。

[1]王永錄，張永光，方玉珍，等.我國(guó)不同時(shí)期A型口蹄疫流行概況及疫苗毒株與流行毒株抗原關(guān)系[J].中國(guó)獸醫(yī)科學(xué)，2013,43（S1）:7-10.

[2]藺長(zhǎng)明.巴西應(yīng)用哨兵動(dòng)物監(jiān)測(cè)口蹄疫[J].畜牧與獸醫(yī),2003,35(2):27.

[3]易忠，郭會(huì)玲，康強(qiáng)，等.口蹄疫病毒非結(jié)構(gòu)蛋白3ABC抗體檢測(cè)和多重RT-PCR試劑盒的檢測(cè)結(jié)果對(duì)比[J].中國(guó)獸醫(yī)科學(xué)，2013,43（S1）:297-299.

Survey Report on the Antibody and the Etiology of Foot-and-M outh Disease of Sentinel Animal

GUO Hui-ling1、2,YIZhong2,WEIYu-rong2,MAWen-ge2,AINIWAER·Taiwaikuli3, SIMAYI·Yisilamu4,DALIXIA·Zimaiti5,BAO La-ti6,WEIJie2,WANG Yan2, XUE Yin2,HUANG Jiong2*,YAO Gang1
1.Veterinary Department，Xinjiang Agricultural University,Urumqi830052,China; 2.Institute of Veterinary Science,Animal Sciences Academy of Xinjiang,Urumqi830000,China; 3.Control and Diagnosis Center of the Animal Disease from Kashgar Region,Kashgar 844000,China;
4.Stock Farm Veterinary Station of Tashkurgan County，Tashkurgan Xinjiang 845250，China; 5.Dabudar Country Stock Farm Veterinary Station of Tashkurgan County, Tashkurgan Xinjiang 845250，China; 6.Stock Farm Veterinary Station of Zhaosu County,Zhaosu Xinjiang 835600,China.

The present Survey was done on the antibody and the etiology of foot-and-mouth disease of sentinel animal in 2013.The results showed that there were not exist foot-and-mouth disease in the sentinel animals.Nevertheless immune antibodies of foot-and-mouth disease were lower level in the sentinel animals, need to strengthen the immune.

sentinel animals；foot-and-mouth disease；immune antibodies；etiology

S855.5

A

1003－6377（2014）01－0064-05

2013-12-22

“十二五”國(guó)家科技支撐計(jì)劃（2013BAD2B04），公益性行業(yè)（農(nóng)業(yè)）科研專項(xiàng)（201103008）

郭會(huì)玲（1973-），女，甘肅人，獸醫(yī)師，研究生，主要從事動(dòng)物傳染病研究。

黃炯（1963-），男，新疆人，研究員，博士生導(dǎo)師，主要從事動(dòng)物傳染病與生物制品研發(fā)。