游國(guó)葉，李光霞，黃傳輝

(信陽(yáng)職業(yè)技術(shù)學(xué)院 藥學(xué)院，河南 信陽(yáng) 464000)

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HPLC法測(cè)定乳脂體中白藜蘆醇的含量

游國(guó)葉，李光霞，黃傳輝

(信陽(yáng)職業(yè)技術(shù)學(xué)院 藥學(xué)院，河南 信陽(yáng) 464000)

目的：建立HPLC法測(cè)定自制白藜蘆醇乳脂體中白藜蘆醇的含量。方法：采用Luna C18(5μm,250mm×4.6mm)柱，以甲醇∶水(75∶25)為流動(dòng)相，流速1.0mL/min， 305nm波長(zhǎng)處檢測(cè)。結(jié)果：白藜蘆醇在0.1～50μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，線性回歸方程為：A=125 485.4C+8 407，R=0.999 9；平均回收率為99.1%，RSD為0.63%。結(jié)論：本法快速、準(zhǔn)確，結(jié)果可靠，重現(xiàn)性好，適用于白藜蘆醇制劑的質(zhì)量控制。

白黎蘆醇；HPLC；含量測(cè)定；乳脂體

白藜蘆醇(本文下稱RES)又名芪三酚，是含芪類結(jié)構(gòu)的二苯乙烯芪類、非黃酮類多酚物質(zhì)，文獻(xiàn)報(bào)道其對(duì)光敏感，在多種植物如虎杖、決明、葡萄中均有RES存在。多篇文獻(xiàn)報(bào)道[1]RES藥理作用較多，對(duì)心腦血管疾病有明顯的療效，還具有較強(qiáng)的抗突變、抗炎、抗氧化等生物活性，部分研究顯示它能夠抑制腫瘤生長(zhǎng)，具有較強(qiáng)的抗腫瘤活性，有望成為新一代植物類抗腫瘤新藥物。 由于RES難溶于水，半衰期短，生物利用度低，本研究欲將其制備新劑型乳脂體，該劑型可將脂溶性藥物包裹其中，改善其在體內(nèi)存留時(shí)間短的缺陷。制備過程中使用一些具有特殊功能的輔料，提高體內(nèi)吸收程度，改善疾病治療效果。本實(shí)驗(yàn)僅對(duì)含量測(cè)定進(jìn)行研究。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

BP211D型半微量電子天平、Waters2695高效液相色譜儀，Waters2996紫外檢測(cè)器 (美國(guó)Waters公司)；100μL進(jìn)樣針(江蘇漢邦科技有限公司)。

1.2 試藥

白藜蘆醇(湖北銀河化工廠，含量99.9%)、分析級(jí)甲醇及氯仿。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

2.1.1 波長(zhǎng)選擇 取處方量RES標(biāo)準(zhǔn)品和不含藥的空白輔料混合物，分別置于25mL容量瓶中，甲醇溶解定容，備用。以甲醇為空白，分別取上兩溶液進(jìn)行紫外掃描，由試驗(yàn)可知在305nm處標(biāo)準(zhǔn)品有最大吸收峰，不含藥的空白輔料混合液無(wú)吸收，故選擇305nm為最佳波長(zhǎng),掃描圖譜見圖1。

2.1.2 色譜條件 色譜柱：Luna C18(250mm×4.6mm ,5μm)；流動(dòng)相：甲醇-水(75∶25)；流速：1.0mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：305nm；柱溫：室溫；進(jìn)樣量：20μL。

圖1 波長(zhǎng)掃描

2.1.3 儲(chǔ)備液制備 精密稱取白藜蘆醇對(duì)照品適量，用甲醇配制成200μg/mL的RES對(duì)照品儲(chǔ)備液。

2.1.4 干擾試驗(yàn) 精密量取上儲(chǔ)備液7.5mL于100mL容量瓶，甲醇定容，得15μg/mL的RES對(duì)照品溶液；同上操作制備相當(dāng)于含15μg/mL RES的空白乳脂體和含藥RES乳脂體。取上述三種溶液分別按照“2.1.2”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，由試驗(yàn)結(jié)果可見，在選定的色譜條件下，藥峰與雜質(zhì)峰、溶劑峰均能有效分離且峰形穩(wěn)定，保留時(shí)間約為6.3min，其它輔料均不影響RES測(cè)定。色譜見圖2。

圖2 白藜蘆醇色譜

2.2 線性關(guān)系考察

精密量取“2.1.3”儲(chǔ)備液5mL于100mL容量瓶中，流動(dòng)相定容，搖勻，得濃度為10μg/mL的RES對(duì)照品溶液。分別精密吸取RES標(biāo)準(zhǔn)溶液適量于10mL容量瓶中，流動(dòng)相定容，搖勻，得濃度分別為0.1、1.0、5.0、10.0、15.0、20.0、50.0μg/mL的系列溶液，進(jìn)樣，以“2.1.2”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定峰面積，以峰面積A對(duì)濃度C作線性回歸，得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為A=125 485.4C+8 407 ，R=0.999 9，表明RES在0.1～50μg/mL濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.3 精密度試驗(yàn)

精密量取RES對(duì)照品儲(chǔ)備液適量配制濃度分別為5、15、50μg/mL的RES溶液3份，按“2.1.2”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，每份樣品每隔4h測(cè)定1次，共測(cè)5次；每份樣品每天測(cè)1次，連續(xù)測(cè)定5天。分別計(jì)算RES的日內(nèi)及日間精密度?？傻萌諆?nèi)精密度和日間精密度三濃度RSD分別為1.31%、0.91%、1.01%和1.40%、0.95%、1.25%，由此可知，精密度良好。

2.4 加樣回收率試驗(yàn)

取已知含量的RES(99.9%)9份, 每份約0.1g，精密稱定，分別置于已標(biāo)號(hào)的1～9號(hào)燒杯中,其中1、2、3號(hào)中加入RES對(duì)照品溶液50μg·mL-1,4、5、6號(hào)中加入RES對(duì)照品溶液100μg·mL-1,7、8、9號(hào)加入RES對(duì)照品溶液150μg·mL-1各10mL，得到9份加樣回收供試液。按“2.1.2”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定,結(jié)果見表1。由表1可知：平均回收率為98．71%，表明用HPLC測(cè)定RES的含量準(zhǔn)確度良好。

表1 回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一供試品溶液,在放置時(shí)間為0、2、5、8、12h時(shí)進(jìn)樣，測(cè)定峰面積，穩(wěn)定性試驗(yàn)RSD為1.46%，小于2%藥典標(biāo)準(zhǔn)，說明穩(wěn)定性在此條件下良好。

2.6 樣品含量測(cè)定

按成熟的制備工藝和處方量制備三批含藥乳脂體(編號(hào)1、2、3)，精密吸取該制劑5mL置100mL容量瓶中，流動(dòng)相定容，搖勻后過濾，取續(xù)濾液得約相當(dāng)于；另精密量取濃度約為20μg/mL的RES對(duì)照品溶液，分別取供試液和對(duì)照品液進(jìn)樣，用峰面積外標(biāo)法計(jì)算含量，結(jié)果見表2。

表2 樣品含量測(cè)定結(jié)果 (n=3)

3 討論

通過文獻(xiàn)查閱和反復(fù)預(yù)實(shí)驗(yàn)，在紫外掃描的基礎(chǔ)上確定了主藥的測(cè)定波長(zhǎng)，最終選擇了甲醇∶水(75∶25)為流動(dòng)相，室溫條件下測(cè)定白藜蘆醇乳脂體的體外含量分析方法，以HPLC測(cè)定白藜蘆醇的含量，試驗(yàn)條件下線性關(guān)系良好，精密度、回收率均符合藥典規(guī)定，重現(xiàn)性好，方法學(xué)考查表明此法可用來(lái)進(jìn)行含RES的乳脂體制劑的含量測(cè)定。由試驗(yàn)可知，由于RES對(duì)光敏感，自然光照下室溫放置16h，含量下降20%，棕色瓶室溫條件下放置72h后含量降低5%，所以在實(shí)驗(yàn)過程中應(yīng)避光操作。

白藜蘆醇屬于強(qiáng)脂溶性藥物，體內(nèi)藥代不佳，消除半衰期短，難以達(dá)到有效治療的血藥濃度，不利于疾病的治療，而新劑型乳脂體類似于脂質(zhì)體，可包封脂溶性藥物，使被包封的藥物性質(zhì)不發(fā)生改變，毒性降低，提高利用度。

[1] 張文眾．白黎蘆醇雌激素作用研究[J].中國(guó)食品衛(wèi)生雜志，2008，20(3)：214-216.

(責(zé)任編輯：宋勇剛)

2014-01-06

游國(guó)葉(1984- )，女，河南省信陽(yáng)職業(yè)技術(shù)學(xué)院助教，研究方向?yàn)樗幬镄聞┬团c新技術(shù)。

R284.2

A

1673-2197(2014)09-0031-02