林曉珊，汪錦飄，陳永康

(中山大學(xué)孫逸仙紀念醫(yī)院，廣東 廣州 510120)

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知母等幾種中藥炮制品或提取物的抑菌活性對照分析

林曉珊，汪錦飄，陳永康

(中山大學(xué)孫逸仙紀念醫(yī)院，廣東 廣州 510120)

目的：了解知母、連翹等幾種中藥炮制品或提取物的抑菌活性，明確抑菌有效部位，對比分析知母炮制前后抑菌活性變化，探討其炮制原理。方法：應(yīng)用紙片法，對比觀察知母炮制品與連翹等中藥提取物的抑菌作用。結(jié)果：連翹籽揮發(fā)油作用于金黃色葡萄球菌與大腸桿菌，其抑制效果顯著，且抑制作用隨著濃度的升高而呈增長趨勢；而錦燈籠宿萼醇提物作用于大腸桿菌抑制效果不明顯，抑制金黃色葡萄球菌作用顯著，當(dāng)醇提取物濃度為90%時，作用最好；知母炮制前后抑菌環(huán)不明顯。結(jié)論：錦燈籠宿萼醇提物與連翹籽揮發(fā)油抑制金黃色葡萄球菌、大腸桿菌作用顯著。

知母；錦燈籠宿萼；連翹籽；金黃色葡萄球菌；大腸桿菌；炮制；抑菌

連翹作為木犀科連翹屬植物連翹的一種干燥果實，其葉與花藥用歷史悠久，相關(guān)抑菌作用研究較多；知母屬于百合科知母屬植物知母根狀莖，據(jù)相關(guān)報道顯示[1]，知母煎劑作用于葡萄球菌與傷寒桿菌，抑菌作用較強，知母乙醇浸膏處理后培養(yǎng)的H37RV人型結(jié)核桿菌亞種抑菌效果頗佳，但對金黃色葡萄球菌與大腸桿菌的抑制作用不顯著。本文主要對知母炮制品與連翹等中藥提取物抑菌作用進行研究，對比其抑菌活性，進一步分析其藥理作用，探討其炮制原理。

1 資料與方法

1.1 一般資料

連翹籽揮發(fā)油、錦燈籠宿萼醇提物( 由江西吉安市國光香料廠提供)；知母選自江西本草天工科技有限責(zé)任公司,《中國藥典》顯示，為百合科植物干燥根,能夠自行進行炮制。試驗儀器選擇超凈工作臺、手提式不銹鋼蒸汽消毒器以及電熱恒溫培養(yǎng)箱。

1.2 方法

1.2.1 試劑與藥品 蛋白胨(三門峽百特生物制品有限公司,批號：20110815)；牛肉膏(長葛沃凱德食品配料有限公司生產(chǎn), 批號：20110423)；氯化鈉(華北地區(qū)特種化學(xué)試劑開發(fā)中心,批號:20120402)；瓊脂條(福建省明瓊脂有限公司,批號：2012002)；二甲基亞砜(濟南大合偉化工有限公司,批號:20120123)。金黃色葡萄球菌(ATCC25923)、大腸桿菌(ATCC25922)均選自江西省疾病控制中心，

1.2.2 培養(yǎng)基制備 取15g氯化鈉、3g牛肉膏、18g瓊脂、10g蛋白胨、1 000mL水,將pH值控制在7.0～7.2，調(diào)整溫度為121.3℃，滅菌持續(xù)時間為20min。

1.2.3 藥液制備 就連翹籽揮發(fā)油而言，其原油要應(yīng)用吐溫80進行乳化處理,借助無菌水，將連翹籽揮發(fā)油稀釋成乳液。按照濃度的不同，將錦燈籠宿萼分為四個乙醇提取物，即30%乙醇提取物、50%乙醇提取物、70%乙醇提取物以及90%乙醇提取物,提取物溶解物選用二甲基亞砜,制備供試液1g，為實驗備用。取生知母，制成水煎液,其濃度為1g/mL；選擇生知母, 置入鍋內(nèi)，調(diào)整火候，采用文火將其翻炒，直至顏色微變,加入適當(dāng)鹽水,繼續(xù)文火翻炒，炒干后將其取出,置涼，制成鹽知母水煎液, 濃度為1g/mL。

1.2.4 研究方法 基于無菌基礎(chǔ)上，取稀釋后的菌液( 首先將菌液稀釋成50倍的菌液,不可見抑菌環(huán)后稀釋至100倍或200倍)一滴,以瓊脂平板培養(yǎng)基為媒介，將其置入中央, 采用涂布器涂布予以均勻處理, 借助無菌鑷子，將藥液浸潤紙片置入瓊脂培養(yǎng)基表面, 保持均勻，且具有一定間隔，每皿貼預(yù)留2個濾紙片,施加壓力于紙片上, 促使紙片與培養(yǎng)基的接觸部位處于良好狀態(tài)。隨之，將培養(yǎng)基放入培養(yǎng)箱中,保持恒溫(37℃)，培養(yǎng)時間在18～24h,完成后取出, 測量抑菌圈大小變化狀況,并及時進行記錄。觀察藥物紙片的四周是否存在抑菌圈，當(dāng)存在時，要測量其直徑大小,進而分析藥物有無抑菌活性以及強弱變化狀況。

2 結(jié)果

當(dāng)金黃色葡萄球菌與大腸桿菌稀釋200倍后，鹽知母與生知母對其抑菌作用不顯著；連翹籽揮發(fā)油作用于金黃色葡萄球菌與大腸桿菌，抑制效果明顯，其抑制作用隨濃度的升高而不斷增大；錦燈籠宿萼醇提物對大腸桿菌的抑制效果不明顯，但抑制金黃色葡萄球菌作用相對較為顯著，當(dāng)乙醇提取物濃度達到90%時，抑制作用處于最高水平。詳見表1、表2。

3 結(jié)論

本文研究結(jié)果顯示，連翹籽揮發(fā)油對金黃色葡萄球菌與大腸桿菌具有顯著的抑菌作用, 其稀釋濃度越大,抑菌效果也越佳。由此可知，可以對連翹籽揮發(fā)油展開深入研究與探討,予以充分開發(fā)，制成抑菌新藥[2]。相關(guān)研究報道顯示，連翹濃縮煎劑體外抑菌效果明顯，對鏈球菌、傷寒桿菌、大腸桿菌、白喉桿菌、痢疾桿菌以及葡萄球菌等具有一定的抑制作用。體外抑菌效果近似于金銀花，而金銀花抑制門氏菌屬效果優(yōu)于連翹，但金黃色葡萄球菌與痢疾桿菌抑制作用低于連翹[3]。當(dāng)金銀花與連翹聯(lián)合使用時，無協(xié)同作用[4]。有學(xué)者表示，連翹對金黃色葡萄球菌而言，其抑菌濃度達到了1∶5 120，體外醇提取物抗真菌作用顯著[5]。此外，本文研究顯示，鹽炙品與知母生品抑制大腸桿菌、金黃色葡萄球菌作用不明顯[6]。而對于錦燈籠宿萼醇提取物來講，其金黃色葡萄球菌抑制作用強烈,當(dāng)濃度達到90%時，提取物的抑菌作用最高,而對大腸桿菌抑制作用不明顯。由此可得，在連翹、錦燈籠等中藥提取物抑菌作用研究中,可以綜合分析其與革蘭氏陽性菌間的關(guān)系，考慮其抑菌作用，分離探究抑菌成分,進而發(fā)明抑菌新藥。

表1 連翹籽揮發(fā)油抑菌作用測定結(jié)果

表2 錦燈籠宿萼提取物抑菌作用測定結(jié)果

綜上所述，在今后知母等幾種中藥炮制品或提取物的抑菌活性研究過程中，要增大菌種選擇, 深入探究知母、鹽炙品抑菌成分與范圍, 完善炮制工藝。

[1] 高慧,周瑩,洪宇.知母等幾種中藥炮制品或提取物的抑菌活性比較研究[J]. 中外醫(yī)療,2009(9):77-77.

[2] 張應(yīng)烙,尹彩萍.18種中藥提取物對植物病原菌的抑制作用[J].江西植保,2010(2):75-78.

[3] 宋麗琴.大黃不同炮制品的體外抑菌作用[J].海峽藥學(xué),2011(5):55-56.

[4] 李昌勤,趙琳,康文藝.補骨脂生品及炮制品體外抑菌活性研究[J].中成藥,2012(1):109-112.

[5] 陳佳佳,劉凡,廖森泰，等.桑葉提取物抑菌活性及抑菌穩(wěn)定性研究[J].食品工業(yè)科技,2012(9):88-91.

[6] 肖碧瓊.大黃不同炮制品提取物的體外抑菌作用分析[J].現(xiàn)代診斷與治療,2013(7):1555-1556.

(責(zé)任編輯：宋勇剛)

2014-02-08

林曉珊，女，中山大學(xué)孫逸仙紀念醫(yī)院藥師，研究方向為醫(yī)院藥學(xué)。

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1673-2197(2014)09-0025-02