雷曉雪，陳文芝，張高平，王麗楠

(揚(yáng)子江藥業(yè)集團(tuán)南京海陵藥業(yè)有限公司，江蘇 南京 210049)

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紫外分光光度法測(cè)定甲鈷胺注射液含量

雷曉雪，陳文芝，張高平，王麗楠*

(揚(yáng)子江藥業(yè)集團(tuán)南京海陵藥業(yè)有限公司，江蘇 南京 210049)

目的：建立紫外分光光度法(UV)快速測(cè)定甲鈷胺注射液含量。方法：首次以水為溶劑，在266 nm處測(cè)定吸光度并計(jì)算注射液中甲鈷胺含量。結(jié)果：甲鈷胺在3～60 μg/mL濃度范圍內(nèi)與吸光度呈良好的線性關(guān)系，回歸方程為：Y=0.013 66X+0.001 68，r=0.999 97，平均回收率為100.3%(n=9, RSD=0.3%)。結(jié)論：該方法簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確、專屬性強(qiáng)、重現(xiàn)性好，可用于甲鈷胺注射液的質(zhì)量控制。

紫外分光光度法(UV)；甲鈷胺注射液；含量測(cè)定

甲鈷胺注射液(Mecobalamin Injection)是一種內(nèi)源性輔酶B12，參與一碳單位循環(huán)，在由同型半胱氨酸合成蛋氨酸的轉(zhuǎn)甲基反應(yīng)過(guò)程中起重要作用,是一種新型的有效治療末梢性神經(jīng)障礙的藥物[1]。體外研究表明，甲鈷胺可促進(jìn)大鼠組織中卵磷脂的合成和神經(jīng)元髓鞘形成，適用于周圍神經(jīng)病變。該注射液主要成分為甲鈷胺，化學(xué)名稱為Coα-[α-(5,6)-二甲基苯并咪唑基]-Coβ-甲鈷酰胺。甲鈷胺在紫外光區(qū)有很強(qiáng)的吸收，已有報(bào)道HPLC法測(cè)定甲鈷胺片的含量及有關(guān)物質(zhì)[2,3]，以及以鹽酸溶液為溶劑，采用紫外法測(cè)定甲鈷胺的含量[4]。本研究首次以水為溶劑，采用紫外法測(cè)定其含量，該法操作簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確、環(huán)保，且大大降低了成本。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

UV-2550型紫外分光光度計(jì)(日本島津)；AG285型電子天平(瑞士梅特勒托利多公司)；KQ-250DE型數(shù)控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；甲鈷胺對(duì)照品(上海市藥品檢驗(yàn)所，批號(hào)080802，含量99.1%)；甲鈷胺注射液(揚(yáng)子江藥業(yè)集團(tuán)南京海陵藥業(yè)有限公司，規(guī)格為1mL:0.5mg，批號(hào)：12041711、12041811、12041911、13031311)。

2 方法與結(jié)果

2.1 對(duì)照品儲(chǔ)備液配制

精密稱取甲鈷胺對(duì)照品適量，加水制成每1mL含甲鈷胺0.15mg的溶液，作為對(duì)照品儲(chǔ)備液。

2.2 供試品溶液配制

精密量取甲鈷胺注射液適量(約相當(dāng)于甲鈷胺1.5mg)，置于50mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。

2.3 測(cè)定波長(zhǎng)選擇

精密量取甲鈷胺對(duì)照品儲(chǔ)備液10mL置于50mL量瓶中，用水稀釋至刻度，作為對(duì)照品溶液。以水為空白，在200～400nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)進(jìn)行掃描，結(jié)果甲鈷胺對(duì)照品在266nm處有最大吸收，故選擇266nm作為測(cè)定波長(zhǎng)。

2.4 專屬性試驗(yàn)

取按處方制法制得不含甲鈷胺的陰性模擬制劑適量，按供試品制備法同法制得陰性對(duì)照液，取陰性對(duì)照液在266nm波長(zhǎng)處進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果見(jiàn)圖1，紫外掃描圖顯示甲鈷胺在266nm處有最大吸收，而陰性對(duì)照液在此處無(wú)明顯吸收，因此輔料不干擾主成分的測(cè)定。

圖1 紫外掃描光譜

2.5 耐用性實(shí)驗(yàn)

取同一份供試品溶液，按“2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，在(266±1)nm波長(zhǎng)處測(cè)定，以其含量計(jì)算RSD值。結(jié)果見(jiàn)表1，該方法耐用性良好，RSD=0.3 %。

表1 耐用性實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.6 線性關(guān)系考察

分別精密量取對(duì)照品儲(chǔ)備液1.0，5.0，10.0，15.0，20.0mL置于50mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，以水為空白，在266nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，以吸光度為縱坐標(biāo)，以濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到回歸方程為Y=0.013 66X+0.001 68，r=0.999 97。結(jié)果表明甲鈷胺在3～60μg/mL濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.7 回收率實(shí)驗(yàn)

稱取相當(dāng)于80%、100%、120%標(biāo)示量的主藥加入相應(yīng)輔料各3份，進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算回收率，結(jié)果見(jiàn)表2。甲鈷胺平均回收率為100.3%，RSD=0.3%(n=9)。

表2 回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果 (n=9)

2.8 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)

取批號(hào)為13031311甲鈷胺注射液，按“2.2”項(xiàng)下方法，分別配制6份供試品溶液，以其含量計(jì)算RSD值，結(jié)果測(cè)得甲鈷胺注射液含量平均含量為101.2%，RSD=0.1%(n=6)。

2.9 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

取同一份供試品溶液，分別于0h，0.5h，1h，1.5h，2h，2.5h，3h時(shí)內(nèi)，在266nm處測(cè)定其吸光度，結(jié)果RSD為0.4%，表明供試品溶液在3h內(nèi)穩(wěn)定。

2.10 樣品測(cè)定

精密量取甲鈷胺注射液適量(批號(hào)：12041711、12041811、12041911)，約相當(dāng)于甲鈷胺1.5mg，置于50mL容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。另取對(duì)照品儲(chǔ)備液10mL置于50mL容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液。在266nm處分別測(cè)定吸光度，計(jì)算各批次含量。采用本公司經(jīng)過(guò)驗(yàn)證的高效液相色譜法測(cè)定此3批甲鈷胺注射液含量，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇-乙腈-磷酸緩沖液(25∶85∶400)為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為267nm，流速為0.8mL/min，進(jìn)樣量為20μL。結(jié)果見(jiàn)表3。

經(jīng)對(duì)比兩種方法的測(cè)定結(jié)果，本文采用的紫外分光光度法適用于甲鈷胺注射液含量的測(cè)定。

表3 兩種含量測(cè)定結(jié)果比較 (%)

3 討論

從專屬性實(shí)驗(yàn)中可以看出，甲鈷胺最大吸收波長(zhǎng)為266nm，而陰性對(duì)照在此波長(zhǎng)處吸收非常弱，對(duì)含量測(cè)定的準(zhǔn)確度無(wú)影響，方法的專屬性良好。

本研究首次以水為溶劑測(cè)定甲鈷胺注射液的含量，成本低、無(wú)毒性，操作過(guò)程簡(jiǎn)便、快速，且準(zhǔn)確度、精密度、線性、回收率、穩(wěn)定性等結(jié)果均符合要求，適合在大生產(chǎn)過(guò)程中快速檢測(cè)中間產(chǎn)品的含量。

[1] 吳學(xué)軍,鄒定,劉志鶴，等.紫外分光光度法測(cè)定制劑中甲鈷胺的含量[J].藥物分析雜志,1998(S1):206-207.

[2] 陳琪.高效液相色譜法測(cè)定甲鈷胺片的含量[J].中國(guó)生化藥物雜志，2003,24(5):251-252.

[3] 吳瓊珠,戴永健,劉衛(wèi)衛(wèi),等.HPLC測(cè)定甲鈷胺的有關(guān)物質(zhì)[J].南京軍醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2003,25(4):221-222.

[4] 陳詠昕,羅卓雅.UV法測(cè)定甲鈷胺片劑及注射液的含量[J].廣東藥學(xué)院學(xué)報(bào),1998,14(3):199-200.

(責(zé)任編輯：宋勇剛)

Determination of Mecobalamin injection by Ultraviolet Spectraphotometr

Lei Xiaoxue, Chen Wenzhi, Zhang Gaoping, Wang Linan*

(Yangtze River Pharmaceutical Group Nanjing Hailing Pharmaceutical Co., LTD,Nanjing 210049,China)

Objective:To establish a method for the determination of ropivacaine mesylate injection by ultraviolet spectrophotometry.Methods:H2O was taken as solvent and detected at 266nm, The content of ropivacaine mesylate was measured and calculated.Results:The linear equation wasY=0.013 66X+0.001 68，r=0.999 97，and the calibration curve was linear in the range of 3～60μg/mL. The average recovery was 100.3% and RSD was 0.3% (n=9).Conclusion:The UV method was simple, accurate, specific, reproducible, and it can be used for determination of mecobalamin injection.

Ultraviolet Spectraphotometr；Mecobalamin Injection；Assay

2014-01-07

雷曉雪(1985-)，女，碩士，揚(yáng)子江藥業(yè)集團(tuán)南京海陵藥業(yè)有限公司工程師，研究方向?yàn)樗幬镔|(zhì)量控制及生物藥物分析。

R927.2

A

1673-2197(2014)09-0018-02