王麗娜，汪 巍，賈天柱,2

(1.遼寧中醫(yī)藥大學(xué) 藥學(xué)院，遼寧 大連 116600；2.遼寧省炮制工程中心， 遼寧 大連 116600)

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北柴胡醋制前后對(duì)抑郁癥小鼠腦內(nèi)DA和NE含量的影響

王麗娜1，汪 巍1，賈天柱1,2

(1.遼寧中醫(yī)藥大學(xué) 藥學(xué)院，遼寧 大連 116600；2.遼寧省炮制工程中心， 遼寧 大連 116600)

目的：通過(guò)比較柴胡醋制前后對(duì)抑郁癥小鼠腦內(nèi)DA、NE的影響，探討柴胡疏肝解郁作用機(jī)制。方法：ELISA法測(cè)定抑郁癥模型小鼠腦內(nèi)DA和NE的含量。結(jié)果：柴胡可使抑郁癥小鼠腦內(nèi)NE、DA含量明顯增加，且醋柴胡作用強(qiáng)于生柴胡，納入復(fù)方逍遙散后，可增強(qiáng)此作用。結(jié)論：柴胡與醋柴胡均具有抗抑郁作用，作用機(jī)理可能與其增加腦內(nèi)單胺類遞質(zhì)NE、DA含量有關(guān)。

北柴胡；抗抑郁；多巴胺；去甲腎上腺素

柴胡具有疏散退熱、疏肝解郁、升舉陽(yáng)氣之功效，尤長(zhǎng)于情志不舒、郁怒憂思等肝氣郁結(jié)證，臨床用于治療精神分裂癥及抑郁癥等神志性疾病[1-3]。傳統(tǒng)認(rèn)為醋制可增強(qiáng)柴胡疏肝解郁作用，如柴胡疏肝散(《景岳全書(shū)》)、逍遙散(《處方集》)等方均用醋柴胡。

抑郁癥與腦內(nèi)兒茶酚胺類物質(zhì)失調(diào)有關(guān)，包括5-羥色胺、5-羥吲哚、去甲腎上腺素和多巴胺等，是一類調(diào)節(jié)機(jī)體生理活動(dòng)的重要物質(zhì)，這些物質(zhì)在腦內(nèi)的含量可反映神經(jīng)系統(tǒng)功能變化。本實(shí)驗(yàn)以小鼠腦內(nèi)DA、NE為指標(biāo)，探討柴胡治療抑郁癥的作用機(jī)制，同時(shí)將柴胡與醋柴胡納入復(fù)方比較醋制前后作用的差異。

1 材料

1.1 藥品

柴胡：購(gòu)于遼寧正大祥和藥業(yè)集團(tuán)有限公司，批號(hào)：201105245，產(chǎn)地遼寧，經(jīng)遼寧中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院鑒定教研室翟延君教授鑒定為柴胡(BupleurumChinense DC.)；醋柴胡為生柴胡加入定量米醋(每 100 kg用米醋20 kg)拌勻，稍燜潤(rùn)，待醋被吸盡后，置炒制容器內(nèi)，用文火加熱，炒干，取出晾冷[4]。樣品：分別將生柴胡、醋柴胡水煎煮后濃縮至每mL折合生藥1g，備用。

自制逍遙散：柴胡(生或醋制)15g，當(dāng)歸15g，白芍15g，白術(shù)15g，茯苓15g，生姜15g，薄荷6g，甘草6g，上述八味藥混合粉碎，備用。臨用前配置成每毫升折合生藥1.5g的混懸液。

小鼠多巴胺(DA)、去甲腎上腺素(NE)、ELISA試劑盒購(gòu)于上海研域商貿(mào)有限公司。

1.2 儀器

FSH-2電動(dòng)勻漿器(江蘇佳美)， Multiskan Mk3酶標(biāo)儀 (Thermo，國(guó)產(chǎn))。

1.3 動(dòng)物

BACL小鼠40只，體重(18±2)g，購(gòu)于大連醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，清潔級(jí)(CL)。

2 方法與結(jié)果

2.1 動(dòng)物造模方法

小鼠隨機(jī)分為正常組、模型組、柴胡組、醋柴胡組、生柴胡逍遙散組和醋柴胡逍遙散組，每組6～7只。采用慢性溫和不可預(yù)知應(yīng)激(chronicunpredictable mild stress，CUMS)結(jié)合利血平給藥造模。CUMS抑郁模型組按照文獻(xiàn)[5-6]略加改進(jìn)，將30min行為限制、4℃冰水游泳5min、停水24h、停食24h、夾尾1min、明暗顛倒24h、搖晃5min(160 Hz)、40℃環(huán)境5min、噪音5min等9種刺激隨機(jī)安排到3周內(nèi)，每天1種，使動(dòng)物不能預(yù)料刺激的發(fā)生。正常對(duì)照組不予干預(yù)。造模 1周后灌胃給藥，劑量為1mL/20g體重，空白組給予等劑量生理鹽水。造模2周后，除正常組外各組動(dòng)物腹腔注射利血平0.25mg/kg，每日1次，連續(xù)1周。造模 3周。

2.2 小鼠懸尾實(shí)驗(yàn) (tail suspension test)

末次給藥后，參照文獻(xiàn)[7]將小鼠尾部固定頭向下懸掛，測(cè)定6min內(nèi)小鼠不動(dòng)的時(shí)間，比較各組差異。結(jié)果見(jiàn)表1。

2.3 ELISA法測(cè)定小鼠腦內(nèi)DA和NE

表1 對(duì)抑郁癥小鼠不動(dòng)時(shí)間、腦內(nèi)DA和NE含量的影響 ±s)

注：與正常組比較，1)P<0.05；與模型組比較，2)P<0.05。

柴胡和醋柴胡均可縮短小鼠不動(dòng)時(shí)間，說(shuō)明柴胡與醋柴胡均具有抗抑郁作用。柴胡可使小鼠腦內(nèi)NE、DA含量明顯增加，且醋柴胡作用強(qiáng)于生柴胡，納入復(fù)方逍遙散后，可增強(qiáng)此作用，推測(cè)柴胡治療抑郁癥的作用機(jī)理可能與其增加腦內(nèi)單胺類遞質(zhì)NE、DA含量有關(guān)。

3 討論

抑郁癥屬中醫(yī)“郁證”范疇。中醫(yī)認(rèn)為，郁證是由于情志不舒、氣機(jī)郁滯所引起的一類病癥，表現(xiàn)為心情抑郁、情緒不寧、脅肋脹痛或易怒善哭，以及咽中如有異物、失眠等癥狀。抑郁癥的病機(jī)是情志所傷、肝氣郁結(jié)逐漸引起五臟氣機(jī)不和所致，特別是肝、脾、心三臟受累以及氣血失調(diào)而成。郁證的治療原則為理氣開(kāi)郁、調(diào)暢氣機(jī)、怡情易性，以達(dá)到解郁安神，調(diào)理體內(nèi)陰陽(yáng)平衡，最終改變患者心境。

懸尾實(shí)驗(yàn)作為行為絕望模型具有簡(jiǎn)單、快速、敏感等特點(diǎn)，常用于抗抑郁藥物的快速篩選[9]。懸尾小鼠為克服不正常體位而掙扎活動(dòng)，但活動(dòng)一定時(shí)間后，出現(xiàn)間斷性不動(dòng)，顯示“絕望”狀態(tài)，多數(shù)抗抑郁藥可有效縮短小鼠的不動(dòng)時(shí)間[8]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示：模型組小鼠的不動(dòng)時(shí)間明顯長(zhǎng)于正常組，說(shuō)明造模成功，通過(guò)給藥可縮短小鼠的不動(dòng)時(shí)間，說(shuō)明柴胡與醋柴胡均有一定抗抑郁作用。

抑郁癥與腦內(nèi)兒茶酚胺類物質(zhì)失調(diào)有關(guān)。多巴胺(dopamine,DA)控制著認(rèn)知、情感、攝食和內(nèi)分泌調(diào)節(jié)等許多功能。NE合成減少可引發(fā)抑郁癥及其相關(guān)癥狀，后者包括嗜睡、精神運(yùn)動(dòng)性阻滯、認(rèn)知障礙和快感缺失等。目前研究認(rèn)為[10-13]，腦內(nèi)去甲腎上腺素(NE)和DA之間的平衡失調(diào)，即DA和(或)NE一種或數(shù)種神經(jīng)遞質(zhì)(生物胺)出現(xiàn)了神經(jīng)生化上的失衡或功能缺陷，導(dǎo)致傳遞功能受損，從而引起抑郁。利血平可耗竭或使去甲腎上腺素失活而產(chǎn)生抑郁作用，因此造模時(shí)采用應(yīng)激刺激加利血平結(jié)合法。

本試驗(yàn)研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，模型組小鼠腦內(nèi)DA/NE均明顯下降，說(shuō)明抑郁癥模型可使小鼠神經(jīng)遞質(zhì)間的平衡失調(diào)。各藥物均可以升高抑郁癥小鼠腦內(nèi)DA/NE含量，對(duì)抑郁狀態(tài)亦有一定的改善作用，且作用強(qiáng)度逍遙散>醋柴胡>柴胡，提示醋制可增強(qiáng)柴胡抗抑郁作用，與傳統(tǒng)認(rèn)為柴胡醋制后疏肝解郁作用增強(qiáng)一致。

柴胡為疏肝解郁常用藥。許多學(xué)者對(duì)肝郁證實(shí)質(zhì)進(jìn)行的研究發(fā)現(xiàn)，肝郁患者抑郁時(shí)腦內(nèi)NE含量顯著降低[14]，且DA含量也較正常偏低。有實(shí)驗(yàn)表明肝郁證模型小鼠腦內(nèi)NE和DA與對(duì)照組比較下降明顯[15]，說(shuō)明柴胡的疏肝解郁作用機(jī)制可能是與增加腦內(nèi)受體部位的DA/NE含量有關(guān)。盡管柴胡與醋柴胡對(duì)DA/NE含量也有調(diào)節(jié)作用，但效果不如逍遙散，可能在復(fù)方中各味藥通過(guò)配伍增強(qiáng)了此作用。

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(責(zé)任編輯：宋勇剛)

Before and after Bupleurum Processed With Vinegar Influence on the Content of DA and NE in the Mouse Brain Suffering from Depression

Wang Lina1,Wang Wei1, Jia Tianzhu1,2

(1.Liaoning Journal of Traditional Chinese Medicine University, DaLian 116600,China;2.Chinese Material Medica Processing Engineering Center of Liaoning province, DaLian 116600,China)

Objective:By comparing the Bupleurum and vinegarish Bupleurum influence on the content of DA and NE in the mouse brain suffering from depression, investigate the mechanism on soothing liver-qi stagnation. Methods:Determine the content of DA and NE in the mouse brain suffering from depression by ELISA.Results:Bupleurum abled to significantly increased the content of DA and NE in the mouse brain suffering from depression, the effect of vinegarish Bupleurum is better than Bupleurum, after inclusion compound XiaoTaoSan, this effect will be enhanced.Conclusion:Both of the Bupleurum and vinegarish Bupleurum have antidepressant effects, and the mechanism of action may be related to an increase of the content of monoamine neurotransmitters NE,DA.

BupleurumChinense DC.;Antidepressant; DA;NE

2014-01-10

國(guó)家中醫(yī)藥管理局中醫(yī)藥行業(yè)科研專項(xiàng)項(xiàng)目(201107007)

王麗娜(1979-)，女，遼寧中醫(yī)藥大學(xué)講師，研究方向?yàn)橹兴幓瘜W(xué)。

R285

A

1673-2197(2014)09-0004-02