鄢 娜，馮澤國(guó)，岳劍虹，趙艷軍，顏光濤

解放軍總醫(yī)院，北京 100853 1麻醉手術(shù)中心；2基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所

右美托咪啶預(yù)處理對(duì)大鼠腎缺血再灌注后肝腎抗氧化能力的影響

鄢 娜1，馮澤國(guó)1，岳劍虹1，趙艷軍1，顏光濤2

解放軍總醫(yī)院，北京 1008531麻醉手術(shù)中心；2基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所

目的 探究右美托咪啶(dexmedetomidine，DEX)預(yù)處理對(duì)大鼠腎缺血再灌注損傷后腎及肝抗氧化能力的影響。方法90只雄性SD大鼠隨機(jī)分為3組(n=30)，右美托咪啶預(yù)處理組(DEX組)，缺血再灌注組(IRI組)，假手術(shù)組(Sham組)。DEX組于建模前30 min腹腔注射DEX (100 μg/kg)，其余兩組腹腔注射等量0.9%氯化鈉注射液，建立腎缺血再灌注模型，再灌注后2 h、8 h、24 h肝腎組織勻漿檢測(cè)超氧化物歧化酶(serum levels of superoxide dismutase，SOD)、一氧化氮(nitric oxide，NO)、乳酸(lactate dehydrogenases，LD)、還原型谷胱甘肽(reduced glutathione，GSH)及總抗氧化能力(total antioxidant capacity，T-AOC)。結(jié)果與IRI組相比，DEX組腎勻漿SOD升高，總NO降低，T-AOC升高(P＜0.05)，LD再灌注8 h后降低明顯(P＜0.05)；肝SOD升高，總NO升高，T-AOC升高(P＜0.05)，LD再灌注8 h、24 h降低顯著(P＜0.05)。結(jié)論右美托咪啶預(yù)處理可提高大鼠腎缺血再灌注后腎及肝的抗氧化能力，減少乳酸堆積。

右美托咪啶；缺血再灌注損傷；腎；肝；抗氧化；大鼠

急性腎損傷(acute kidney injury，AKI)是大型心血管手術(shù)、器官移植手術(shù)等圍術(shù)期內(nèi)的常見(jiàn)嚴(yán)重并發(fā)癥，表現(xiàn)為急進(jìn)性腎功能惡化，腎缺血再灌注損傷是最重要的原因[1-3]。本實(shí)驗(yàn)旨在討論右美托咪啶預(yù)處理對(duì)大鼠腎缺血再灌注損傷后腎及肝的抗氧化能力的影響。

材料和方法

1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及材料 選擇健康清潔型成年雄性SD大鼠90只(解放軍總醫(yī)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，許可證號(hào)為SCXK(京)2012-0001)，體質(zhì)量220 ～ 240 g。適應(yīng)環(huán)境1周，分籠飼養(yǎng)，室溫20 ～ 25℃，濕度60% ～ 70%，自由攝食、飲水。注射用鹽酸右美托咪啶200 μg/支(批號(hào)：13080834，13082832，江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司)。超氧化物歧化酶(serum levels of superoxide dismutase， SOD)、一氧化氮(nitric oxide，NO)、總抗氧化能力(total antioxidant capacity，T-AOC)C、乳酸(lactate dehydrogenases，LD)試劑盒均購(gòu)自南京建成生物工程研究所。

2 分組 90只SD雄性大鼠隨機(jī)分為3組(n=30)，右美托咪啶預(yù)處理組(DEX組)，缺血再灌注組(IRI組)，假手術(shù)組(Sham組)，每組按再灌注后時(shí)間點(diǎn)不同各自分為3個(gè)亞組。DEX組統(tǒng)一于建模前30 min腹腔注射DEX 100μg/kg，其余兩組則注射等量的0.9%氯化鈉注射液。

3 腎缺血再灌注損傷大鼠模型制備 參考Sugita等[4]介紹的方法建立腎缺血再灌注損傷模型。術(shù)前禁食12 h，自由飲水，大鼠稱(chēng)重后，3%硫噴妥鈉50 mg/kg腹腔注射麻醉，待翻正反射消失后，俯臥位于溫度恒定于38℃的體溫毯上，背側(cè)入路，于肋弓下緣0.5 cm、脊柱旁開(kāi)1 cm處做兩側(cè)縱形切口，分離腎蒂，游離輸尿管，切除右側(cè)腎，左側(cè)腎蒂使用無(wú)損傷血管夾夾閉45 min。根據(jù)左腎顏色來(lái)判斷缺血情況，確認(rèn)其由鮮紅轉(zhuǎn)為整體腎暗紅色時(shí)即可。45 min后松開(kāi)血管夾進(jìn)行再灌注，待腎由暗紅色轉(zhuǎn)為鮮紅色，恢復(fù)血液供應(yīng)后再將其還納入腹腔并縫合傷口。Sham組僅切除右腎并分離左側(cè)腎蒂，不進(jìn)行鉗夾處理。

4 標(biāo)本收集及檢測(cè) 每組各隨機(jī)選取10只大鼠，于再灌注后2 h、8 h及24 h 3個(gè)時(shí)間點(diǎn)，麻醉后統(tǒng)一獲取左腎及肝左上葉，置于0.9%氯化鈉注射液中，去除表面殘血后液氮快速凍存。根據(jù)檢測(cè)指標(biāo)試劑盒要求制備肝及腎組織勻漿，測(cè)定肝及腎SOD、NO、LD及T-AOC含量。

5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析，計(jì)量資料以表示，每組不同時(shí)間點(diǎn)指標(biāo)比較采用雙因素方差分析，組間比較采用單因素方差分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

1 腎抗氧化能力 與IRI組相比，再灌注后2 h、8 h、24 h，DEX組腎組織勻漿SOD、T-AOC含量均升高(P＜0.05)，總NO含量下降(P＜0.05)，LD含量于再灌注后8 h下降，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；與Sham組相比，再灌注后2 h、8 h、24 h，DEX組T-AOC含量均升高，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。見(jiàn)圖1。

2 肝抗氧化能力 與IRI組相比，再灌注后2 h、8 h、24 h，DEX組肝組織勻SOD、總NO、T-AOC含量升高(P＜0.05)，LD含量降低(P＜0.05)；與Sham組相比，再灌注后2 h、8 h、24 h，DEX組肝勻漿總NO含量升高(P＜0.05)，T-AOC含量升高(P＜0.05)， LD于再灌注后8 h升高明顯(P＜0.05)。見(jiàn)圖2。

討 論

腎缺血再灌注損傷是臨床大型心血管、移植手術(shù)中常見(jiàn)的臨床問(wèn)題，嚴(yán)重時(shí)可導(dǎo)致急性腎損傷，降低了遠(yuǎn)期生存率[2-3,5-6]。腎缺血再灌注損傷引起體內(nèi)炎癥反應(yīng)的發(fā)生，加之再灌注期間體內(nèi)產(chǎn)生高濃度的活性氧簇(reactive oxygen species，ROS)，從而導(dǎo)致遠(yuǎn)隔臟器，如肝的功能障礙，嚴(yán)重時(shí)可導(dǎo)致肝衰竭，增大術(shù)后并發(fā)癥處理難度[7]。有研究表明右美托咪啶對(duì)腎缺血再灌注損傷具有保護(hù)作用。其抗缺血再灌注損傷作用機(jī)制可能與其能減弱交感神經(jīng)興奮性、抑制腎素釋放、在再灌注期間阻止腎血管痙攣而起到增加腎臟血流、提高腎小球率過(guò)濾、增加鈉水排泄相關(guān)，也與其通過(guò)激活相關(guān)促存活通路如PI3K/Akt、ERK1/2及HMGB-1/TLR-4信號(hào)通路，起到抗缺血再灌注損傷作用相關(guān)[8-15]。同時(shí)其本身具有鎮(zhèn)痛作用減少了非甾體類(lèi)抗炎藥及嗎啡的使用，降低了由于非甾體類(lèi)抗炎藥導(dǎo)致的急性腎損傷的風(fēng)險(xiǎn)及嗎啡在急性腎損傷患者體內(nèi)堆積所產(chǎn)生的危害[15]。然而關(guān)于DEX是否可以減輕腎缺血再灌注損傷后所致的肝損傷的研究甚少。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，與IRI組相比，DEX組腎的SOD、T-AOC值于再灌注后2 h、8 h及24 h升高，表明DEX預(yù)處理后，大鼠腎的抗氧化能力有所提高；LD含量，IRI組于再灌注后8 h升高(P＜0.05)，推測(cè)DEX預(yù)處理可能通過(guò)減輕腎缺氧引起的糖酵解增加，或加強(qiáng)腎排泄消除堆積LD的能力來(lái)起到保護(hù)作用，致使乳酸在再灌注過(guò)程中維持相對(duì)平穩(wěn)的水平；腎總NO結(jié)果顯示，DEX預(yù)處理后腎臟總NO含量較IRI組降低，該結(jié)果與圖2中肝總NO含量結(jié)果恰恰相反。肝總NO結(jié)果顯示，DEX預(yù)處理后肝總NO含量較IRI組升高。機(jī)體的NO是由L-精氨酸與氧分子在不同一氧化氮合酶(NOS)的催化下生成的，目前研究發(fā)現(xiàn)的NOS有3種，內(nèi)皮型NOS(eNOS)、神經(jīng)型NOS(nNOS)及誘生型NOS(iNOS)。本實(shí)驗(yàn)僅針對(duì)肝、腎總NO含量進(jìn)行測(cè)定，而未進(jìn)行分型測(cè)定，故大鼠肝、腎中NO主要來(lái)源未知，有待進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)研究探索。圖2結(jié)果表明，與IRI組相比，DEX組肝SOD、T-AOC含量升高(P＜0.05)，清除氧自由基能力增強(qiáng)；LD結(jié)果表明，大鼠腎缺血再灌注后，肝乳酸增多，DEX可以減輕肝乳酸堆積情況，進(jìn)而產(chǎn)生肝的保護(hù)作用。

圖 1 大鼠腎組織勻漿SOD、 NO、 LA、 T-AOC檢測(cè)結(jié)果Fig. 1 Serum SOD, NO, LA levels and T-AOC in renal tissue of ratsP＜0.05, vs I/R injury group at different time points; P＜0.05, vs RHP at different time points

圖 2 大鼠肝組織勻漿SOD、 NO、 LA、 T-AOC檢測(cè)結(jié)果Fig. 2 Serum SOD, NO, LA levels and T-AOC in renal tissue of rats

綜上所述，右美托咪啶預(yù)處理可以提高大鼠腎缺血再灌注后的腎及肝對(duì)氧自由基的清除能力，提高總抗氧化能力，減少乳酸堆積情況，進(jìn)而起到對(duì)腎及肝的保護(hù)作用。

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Effect of dexmedetomidine pretreatment on antioxidant ability of kidney and liver in rats following renal ischemia/reperfusion injury

YAN Na1, FENG Ze-guo1, YUE Jian-hong1, ZHAO Yan-jun1, YAN Guang-tao2
1Anesthesia and Operation Center;2Institute of Basic Medical Sciences Chinese PLA General Hospital, Beijing 100853, China

FENG Ze-guo. Email：beijing_301@sina.com

ObjectiveTo study the effect of dexmedetomidine (DEX) pretreatment on antioxidant ability of kidney and liver in rats following renal ischemia/reperfusion (I/R) injury.MethodsNinety male SD rats were randomly divided into DEX pretreatment group, I/R injury group, and sham operation group (30 in each group). DEX (100 μg/kg) was injected into the abdominal cavity of rats in DEX pretreatment group 30 min before the model was established. A renal I/R injury model was established for I/R injury group and sham operation group, respectively, by injecting 0.9% sodium chloride (100 μg/kg). Serum levels of superoxide dismutase (SOD), nitric oxide (NO) and lactate dehydrogenases (LD), reduced glutathione (GSH) and total antioxidant capacity (T- AOC) in liver and renal tissues were measured 2, 8 and 24 h, respectively, after reperfusion.ResultsThe serum SOD level and T-AOC were higher and the serum NO level was lower in DEX pretreatment group than in I/R injury group (P＜0.05). The serum LA level was signifcantly lower while the serum SOD and NO level and T-AOC were signifcantly higher in DEX pretreatment group than in I/ R injury group 8 h after reperfusion (P＜0.05) and the serum LA level was signifcantly lower in DEX pretreatment group than in I/ R injury group 8 and 24 h after reperfusion (P＜0.05).ConclusionDEX pretreatment can increase the antioxidant ability of kidney and liver in rats following renal I/R injury, thus reducing LA accumulation.

dexmedetomidine; reperfusion injure; kidney; liver; antioxidation; rats

R 361

A

2095-5227(2014)07-0755-04

10.3969/j.issn.2095-5227.2014.07.030

時(shí)間：2014-03-10 17:28

http://www.cnki.net/kcms/detail/11.3275.R.20140310.1728.005.html

2013-12-20

鄢娜，女，碩士。專(zhuān)業(yè)方向：麻醉學(xué)。Email：yanna871106@163.com

馮澤國(guó)，男，碩士生導(dǎo)師，主任醫(yī)師。Email：beijing_301@sina.com