衛(wèi) 強(qiáng)，張國(guó)升，劉金旗，戴 一，尹 偉

（安徽新華學(xué)院 藥學(xué)院，安徽 合肥 230088）

紅豆杉中10-去乙?；涂ㄍあ蟪煞值难芯窟M(jìn)展

衛(wèi) 強(qiáng)，張國(guó)升，劉金旗，戴 一，尹 偉

（安徽新華學(xué)院 藥學(xué)院，安徽 合肥 230088）

作為抗腫瘤藥紫杉醇和多西紫杉醇主要的合成原料，10-去乙?；涂ㄍあ缶哂惺种匾乃幱脙r(jià)值.本文就紅豆杉中10-去乙?；婉R亭Ⅲ成分中涉及的細(xì)胞培養(yǎng)、提取分離、廢料轉(zhuǎn)化、中藥復(fù)方影響、含量測(cè)定等內(nèi)容進(jìn)行概括和總結(jié)，以期為進(jìn)一步開展研究提供新的思路.

紅豆杉；10-去乙?；涂ㄍあ螅谎芯窟M(jìn)展

10-去乙?；涂ㄍあ螅?0-deacetylbaccatinⅢ，簡(jiǎn)稱10-DABⅢ），又稱10-去乙?；鶟{果赤霉素Ⅲ[1]或10-脫乙酰漿果杉亭Ⅲ[2]，可用于紫杉醇和多西紫杉醇的合成[3]，其結(jié)構(gòu)見圖1.由于10-去乙?；涂ㄍあ笤诩t豆杉屬植物中的含量要比紫杉醇豐富的多，分離提取的收率也比紫杉醇的高，樹葉又是可再生資源，這使其研究愈加得到關(guān)注.10-去乙?；涂ㄍあ髲V泛存在于紅豆杉屬植物的樹皮、枝葉、根、種子和心材等.有報(bào)道在松科植物馬尾松(Pinus massoniana Lamb)和三尖杉科中國(guó)粗榧[Cephalotaxus sinensis(Rehd et Wils)Li]中也發(fā)現(xiàn)存在10-去乙?；涂ㄍあ骩1]376.

圖1 10-去乙?；涂ㄍあ?/p>

本文對(duì)紅豆杉中化學(xué)成分類型及含量狀況進(jìn)行概括總結(jié)，以期為進(jìn)一步開發(fā)應(yīng)用其豐富的資源奠定基礎(chǔ).

1 細(xì)胞培養(yǎng)[4]

郭玉婷等用經(jīng)多次繼代培養(yǎng)的云南紅豆杉細(xì)胞株，以改良Murashige and Skoog（MS）固體培養(yǎng)基[含2,4-二氯苯氧乙酸0.08mg·L-1、6-芐基嘌呤0.5mg·L-1、蔗糖20g·L-1、萘乙酸0.5mg·L-1]上繼代培養(yǎng),隔25天接種一次.將生長(zhǎng)良好的細(xì)胞3g轉(zhuǎn)入含30mL MS培養(yǎng)液,25℃、110r/min振蕩培養(yǎng).將粗寡聚半乳糖醛酸(oligogalacturonic acid,OGA)粉末配成1g·L-1溶液,經(jīng)Sephdex G-10柱處理濾除Mw<700的寡聚物,以0.45μm微孔濾膜濾過(guò)除菌,作為OGA誘導(dǎo)子備用.細(xì)胞培養(yǎng)至第17天加入OGA,結(jié)果以40μg·mL-1OGA時(shí)細(xì)胞培養(yǎng)較好.

陳永勤[5]發(fā)現(xiàn)在培養(yǎng)基中添加1.0mmol·L-1或2.0mmol·L-1苯丙氨酸和在培養(yǎng)28d時(shí)同時(shí)補(bǔ)加73.0mmol·L-1蔗糖和137.3mmol·L-1甘露醇可明顯促進(jìn)紅豆杉懸浮細(xì)胞生長(zhǎng)和10-去乙?；涂ㄍあ笮纬?與陰性對(duì)照相比,添加苯丙氨酸、蔗糖、甘露醇的細(xì)胞生物量提高0.6-0.8倍,并使10-去乙酰基巴卡亭Ⅲ產(chǎn)量提升7倍.

趙志蓮等[6-7]研究培養(yǎng)基種類、溫度、光照對(duì)云南紅豆杉10-去乙酰巴卡亭Ⅲ含量的影響.結(jié)果，BTM培養(yǎng)基中10-去乙酰巴卡亭Ⅲ含量是B5培養(yǎng)基的2.6倍；20℃培養(yǎng)時(shí)10-去乙酰巴卡亭Ⅲ的含量是30℃時(shí)的5.7倍.暗細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)10-去乙酰巴卡亭Ⅲ含量是強(qiáng)光照(3000lx)培養(yǎng)時(shí)的4.4倍.同時(shí)，研究硝酸鈰、硝酸鈰銨和硝酸鑭為稀土誘導(dǎo)子對(duì)云南紅豆杉10-去乙酰巴卡亭Ⅲ含量的影響.在培養(yǎng)12d后，加入誘導(dǎo)子和培養(yǎng)基.結(jié)果表明，添加0.1mmol·L-1硝酸鈰、0.01mmol·L-1硝酸鈰銨和0.01mmol·L-1硝酸鑭時(shí)10-去乙酰巴卡亭Ⅲ的含量分別是不添加時(shí)的2.3倍、4.1倍和2.6倍.

2 提取分離

2.1 超臨界提取

馬淑楨等[8]以石油醚預(yù)處理，甲醇冷浸，輔以攪拌和超聲.先以正己烷萃取除雜，再以氯仿與水混合液(1:l)反復(fù)提取.氯仿層減壓濃縮，以硅膠色譜柱分離.得到10-去乙?；涂ㄍあ缶w，純度可達(dá)91%，整個(gè)工藝收率達(dá)7.9%.張明等[9]以南方紅豆杉的枝葉為原料，研究超臨界CO2萃取中溫度、壓力、時(shí)間、夾帶劑用量對(duì)10-去乙酰基巴卡亭Ⅲ的影響.結(jié)果以?shī)A帶劑用量15m l，萃取溫度50℃，壓力25MPa，萃取時(shí)間180min，10-去乙?；涂ㄍあ笃骄繛?.600g·kg-1.

唐倩[10]以10-去乙?；涂ㄍあ笫章蕿橹笜?biāo),建立超臨界流體萃取技術(shù)對(duì)紅豆杉有效成分的萃取方法.結(jié)果以85%乙醇為夾帶劑、萃取溫度44℃、萃取壓力為27Mpa、動(dòng)態(tài)萃取時(shí)間為2h時(shí),10-去乙?；涂ㄍあ笫章适莻鹘y(tǒng)方法的2.18倍.

2.2 常規(guī)提取

李雙明[11]以超聲提取考察東北紅豆杉枝葉中10-去乙?；涂ㄍあ蟮墓に?，結(jié)果較好的參數(shù)是：以80%乙醇為溶劑；固液比1:15;提取30min;提取次數(shù)為3次，10-去乙酰基巴卡亭Ⅲ提取率為0.052%.同時(shí)，得出10-去乙酰基巴卡亭Ⅲ最佳的純化工藝：先醇提水沉(比例為1:3)，除去紫杉醇和三尖杉寧堿等弱極性物質(zhì)，則10-去乙?；涂ㄍあ笕苡谒?，再以氯仿萃取水相，最后進(jìn)行硅膠柱層析，乙酸乙酯:石油醚（3:2，V/V)洗脫，得到10-去乙?；涂ㄍあ蟠制?，含量為63%，收率為86.74%.以乙睛、乙酸乙酷/石油醚重結(jié)晶，得10-DABⅢ白色粉末，純度為90%.總純化工藝下，10-去乙?；涂ㄍあ笫章蕿?9%.

3 廢料轉(zhuǎn)化[12]

以紫杉醇提取過(guò)程中的廢料作為原料,首次將含7-木糖基-10-去乙?；仙即?、7-木糖基-10-去乙?；馍紝帀A和7-木糖基-10-去乙酰基紫杉醇C三種化合物的混合物通過(guò)氧化、水解反應(yīng)脫去紫杉烷類化合物C-7位上的木糖基,然后進(jìn)行肼解反應(yīng)脫去C-13位上的側(cè)鏈,最后利用重結(jié)晶純化,得到10-去乙酰基巴卡亭Ⅲ.通過(guò)一定的技術(shù)處理，可利用紫杉醇廢料轉(zhuǎn)化10-去乙?；涂ㄍあ螅@有利于實(shí)現(xiàn)節(jié)能增效，保護(hù)生態(tài)環(huán)境.

4 中藥復(fù)方影響[13]

選擇以紅豆杉臨床常用劑量與3個(gè)扶正方（養(yǎng)陰方由沙參、麥冬和五味子三味藥組成,益氣方由黃芪、黨參、白術(shù)、茯苓、炙甘草五味藥組成,溫陽(yáng)方由附子、干姜、甘草三味藥組成）.紅豆杉藥材配伍養(yǎng)陰方，紅豆杉配伍益氣方可使10-脫乙酰巴卡亭Ⅲ含量分別提高14.07%和4.59%,而紅豆杉配伍溫陽(yáng)代表方組可使10-脫乙酰巴卡亭Ⅲ含量降低18.17%，反映復(fù)方配伍對(duì)紅豆杉中10-DABⅢ含量溶出有顯著的影響.

5 含量測(cè)定

安春志[14]利用高相液相色譜法測(cè)定不同來(lái)源的紅豆杉中10-去乙酰巴馬亭Ⅲ的平均含量為0.0114%.利用C18色譜柱(250mm×46mm，5μm)，甲醇乙睛水(22:38:40)和甲醇乙睛水(5:35:60)分別作為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為227nm，柱溫30℃，流速1.0mL·min-1.

杜智敏等[15]測(cè)定東北紅豆杉枝葉中10-脫乙酰巴卡亭Ⅲ的含量為0.456%.采用RP-HPLC法. C18色譜柱(250mm×4.6mm,5μm),甲醇-乙腈-水(20∶30∶50)作為流動(dòng)相,檢測(cè)波長(zhǎng)為233.9nm.

甄鏵[16-17]建立以反相高效液相色譜法測(cè)定歐洲紅豆杉中10-脫乙酰巴卡亭Ⅲ含量的方法，10-脫乙酰巴卡亭Ⅲ平均含量為0.175%.測(cè)試條件:以色譜柱為Shim-Pack VP-ODS(250mm×4.6mm, 5μm),流動(dòng)相乙腈-水(梯度洗脫),流速1.0mL· min-1,柱溫40℃,檢測(cè)波長(zhǎng)232nm.同時(shí)，采用硅膠層析柱，以甲醇-水(1:l)洗脫,對(duì)曼地亞紅豆杉中10-脫乙酰巴卡亭Ⅲ也進(jìn)行了初步分離和含量測(cè)定，結(jié)果其含量為51.3μg·g-1.HPLC檢測(cè)條件:SHIMPACK VP-ODS色譜柱(150mm×4.6mm，5μm），甲醇-水(45:55)為流動(dòng)相，流速為1.0mL·min-1，柱溫為40℃，檢測(cè)波長(zhǎng)為232nm.

張美珍等[18]測(cè)定南方紅豆杉枝葉中10-脫乙酰巴卡亭Ⅲ的平均含量為0.0570%.測(cè)試方法:采用RP-HPLC法.C18色譜柱(250mm×4.6mm,5μm)，乙腈-水(30∶70)為流動(dòng)相,檢測(cè)波長(zhǎng)232nm,流速1.0mL·min-1.

李海峰[19]采用色譜柱AgilentC18色譜柱(250mm×4.6mm,5μm),流動(dòng)相為甲醇-乙腈-水(42∶13∶45),流速1.0mL·min-1,柱溫32℃,檢測(cè)波長(zhǎng)234nm,測(cè)定云南紅豆杉生長(zhǎng)過(guò)程中不同部位10-去乙酰巴卡亭Ⅲ的含量.發(fā)現(xiàn)在云南紅豆杉生長(zhǎng)期樹皮中10-去乙酰巴卡亭Ⅲ含量高于枝葉,是枝葉中最高含量的1.498倍；休眠芽分化期和休眠期是10-去乙酰巴卡亭Ⅲ積累的關(guān)鍵時(shí)期，在枝葉中的含量顯著高于樹皮,最高含量達(dá)0.115%，是樹皮中最高含量的1.769倍,兩年生枝葉中含量略高于一年生枝葉.

6 總結(jié)

6.1 從目前研究來(lái)看，10-去乙?；涂ㄍあ笞罡吆繛?.175%，最低為0.00513%,不同種植物的含量差異較大，總體含量偏低.

6.2 從提高10-去乙?；涂ㄍあ蠛康慕嵌葋?lái)看，傳統(tǒng)提取方法的改進(jìn)，純化、分離技術(shù)的應(yīng)用可以達(dá)到目的.而細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)、廢料轉(zhuǎn)化、復(fù)方配伍等新的研究也彰顯新的研究方向，為進(jìn)一步提高含量提供新的思路，有可能成為未來(lái)研究的熱點(diǎn)和重要方向.

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Q946

A

1673-260X（2014）02-0025-03

安徽省高等學(xué)校省級(jí)自然科學(xué)研究項(xiàng)目（KJ2013B103）,安徽新華學(xué)院質(zhì)量工程項(xiàng)目（2011sysxx02）