吳 曉 劉寶君 吳金峰 厲 蓓 弓唯一 徐海林 段曉虹 董競(jìng)成

(復(fù)旦大學(xué)附屬華山醫(yī)院中西醫(yī)結(jié)合科 上海 200032)

不同時(shí)段社交應(yīng)激對(duì)小鼠肺癌生長(zhǎng)的影響

吳 曉 劉寶君 吳金峰 厲 蓓 弓唯一 徐海林 段曉虹 董競(jìng)成△

(復(fù)旦大學(xué)附屬華山醫(yī)院中西醫(yī)結(jié)合科 上海 200032)

目的觀察不同時(shí)段社交應(yīng)激對(duì)小鼠肺癌生長(zhǎng)的影響。方法將36只C57BL/6J小鼠隨機(jī)分為A組(正常對(duì)照組)、B組(單純抑郁組)、C組(瘤前應(yīng)激組)、D組(單純腫瘤組)、E組(瘤后應(yīng)激組)、F組(5天應(yīng)激組),每組6只。在10天社交應(yīng)激模型的基礎(chǔ)上,C、D、E組分別在應(yīng)激前、應(yīng)激5天和10天后給予皮下種瘤。ELISA方法檢測(cè)各組小鼠血清中血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)蛋白的表達(dá), Western blot方法檢測(cè)肺組織中磷酸化細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶(phosphorylated extracellular regulated protein kinases,p ERK)、基質(zhì)金屬蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)、基質(zhì)金屬蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)蛋白的表達(dá),real-time PCR方法檢測(cè)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體2(VEGFR2) m RNA%和L1細(xì)胞黏附分子(L1 cell adhesion molecule,L1CAM)等參數(shù)。結(jié)果C組和F組與其他各組比較,皮下腫瘤結(jié)節(jié)的重量、體積及與腫瘤生長(zhǎng)有關(guān)的上述細(xì)胞因子的表達(dá)均明顯升高(P＜0.05)。E組與D組比較,兩者在腫瘤結(jié)節(jié)的重量、體積及相關(guān)細(xì)胞因子的表達(dá)上差異不大(P＞0.05)。結(jié)論發(fā)生在腫瘤發(fā)生之前及發(fā)生過程中的社交應(yīng)激對(duì)小鼠肺癌有顯著的促生長(zhǎng)作用,其內(nèi)在機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

社交應(yīng)激； 腫瘤生長(zhǎng)； 社會(huì)心理因素； 細(xì)胞因子

在所有腫瘤疾病中,肺癌發(fā)病率居首位［1］,屬于全球范圍內(nèi)的高發(fā)性疾病。抑郁、焦慮等社會(huì)心理因素被認(rèn)為會(huì)影響疾病的發(fā)生和發(fā)展［2］。多項(xiàng)研究證實(shí),社會(huì)心理因素不僅與腫瘤疾病的發(fā)生有關(guān),而且還參與到腫瘤發(fā)展的各個(gè)階段［3］。同時(shí),在腫瘤患者中也存在較高的抑郁癥發(fā)病率,其癥狀的發(fā)展被證明與腫瘤患者的預(yù)后息息相關(guān)［4］。腫瘤患者在經(jīng)受腫瘤帶來的痛苦的同時(shí),往往還要承受隨之發(fā)生的心理變化和影響,尤其是一些負(fù)面的社會(huì)心理因素,對(duì)疾病發(fā)展和轉(zhuǎn)歸都有不利影響［5］,甚至有患者在疾病康復(fù)后仍然受到社會(huì)心理因素的負(fù)面影響［6］。雖然社會(huì)心理因素對(duì)腫瘤生長(zhǎng)的影響早已為科研及醫(yī)務(wù)工作者所重視和研究［7-12］,但是其在腫瘤發(fā)展不同階段的干預(yù)和影響鮮見報(bào)道。

本文通過模擬人類在社交應(yīng)激壓力作用下的心理應(yīng)激狀態(tài),多次給予實(shí)驗(yàn)小鼠社交失敗應(yīng)激刺激,通過觀察和分析與人類相似的抑郁樣癥狀,建立模擬人類抑郁狀態(tài)的社交應(yīng)激性抑郁動(dòng)物模型。通過在腫瘤發(fā)展的不同階段給予社交應(yīng)激干預(yù),將小鼠腫瘤模型與社交應(yīng)激性抑郁模型相結(jié)合,觀察與腫瘤發(fā)生和發(fā)展相關(guān)的若干指標(biāo),探討社會(huì)應(yīng)激在腫瘤發(fā)展的不同階段對(duì)腫瘤生長(zhǎng)的影響,從而為腫瘤伴發(fā)心理性疾病的治療提供一定的理論基礎(chǔ)。

材料和方法

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及設(shè)備6周齡雄性C57BL/6J小鼠(簡(jiǎn)稱“C57小鼠”,上海斯萊科公司,許可證編號(hào)：2008001622124)；Noldus動(dòng)物行為學(xué)視頻跟蹤系統(tǒng)(復(fù)旦大學(xué)上海醫(yī)學(xué)院神經(jīng)生物研究院)；透明帶孔有機(jī)玻璃隔板及鼠籠(上海移數(shù)信息科技有限公司)；CD-1退役種鼠,雄性,4～6月齡［北京維通利華公司,許可證編號(hào)：SCXK(京2011-0011)］；SYBR Green PCR試劑盒(美國(guó)MBI公司)；Trizol(美國(guó)Invitrogen公司)；real-time檢測(cè)儀(型號(hào)：ABI-7500,美國(guó)ABI公司)；生物安全柜(型號(hào)：TYPE B2,美國(guó)Sigma公司)；低溫冷凍離心機(jī)(型號(hào)：1-15K,美國(guó)Sigma公司)；手持式勻漿機(jī)(型號(hào)：F6/ 10,德國(guó)FLUKO公司)。

C57小鼠肺癌模型的建立將非小細(xì)胞肺癌系腫瘤細(xì)胞3LL培養(yǎng)于含10%胎牛血清的1640培養(yǎng)基中至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期,收集腫瘤細(xì)胞,調(diào)整細(xì)胞濃度為1×107/m L,制備單細(xì)胞懸液。用1 m L空針在C57小鼠左腋皮下接種腫瘤細(xì)胞懸液,每只2× 106/0.2 m L。

動(dòng)物分組將36只C57小鼠隨機(jī)分為A組(正常對(duì)照組)、B組(單純抑郁組)、C組(瘤前應(yīng)激組：先應(yīng)激后皮下種瘤)、D組(單純腫瘤組)、E組(瘤后應(yīng)激組：先皮下種瘤后應(yīng)激)、F組(5天應(yīng)激組：先應(yīng)激5天,種瘤后再應(yīng)激5天),同時(shí)將24只CD-1退役種鼠與B、C、E、F組對(duì)應(yīng)隨機(jī)分組。將各組小鼠飼養(yǎng)于標(biāo)準(zhǔn)SPF級(jí)環(huán)境中,使C、D、E、F組小鼠在同一天用同一批次腫瘤細(xì)胞皮下種瘤。

社交應(yīng)激模型的建立將單只CD-1小鼠放于中間有透明帶孔隔板的鼠籠一側(cè)飼養(yǎng),單籠飼養(yǎng)7天。將一只C57小鼠放入對(duì)應(yīng)組CD-1小鼠鼠籠的一側(cè),接受CD-1小鼠的刺激,5～10 min后將C57小鼠放于鼠籠中透明帶孔隔板的另一側(cè),相處過夜24 h,同一只C57小鼠連續(xù)10天接受不同CD-1小鼠的刺激。實(shí)驗(yàn)過程中,不改變CD-1小鼠所飼養(yǎng)的鼠籠,每天將C57小鼠放入不同CD-1小鼠鼠籠中接受刺激,建模流程見圖1。建模最后一天,所有C57小鼠單籠飼養(yǎng),24 h后進(jìn)行行為學(xué)檢測(cè)。

C57小鼠行為學(xué)檢測(cè)將空的透明鼠籠放于社交應(yīng)激曠場(chǎng)邊緣的中間位置,將一只待測(cè)C57小鼠放于社交應(yīng)激曠場(chǎng)的中央位置,打開Noldus動(dòng)物運(yùn)動(dòng)軌跡跟蹤系統(tǒng),記錄150 s內(nèi)C57小鼠在曠場(chǎng)內(nèi)的運(yùn)動(dòng)軌跡。取出C57小鼠,將一只未攻擊過C57小鼠的CD-1小鼠放入曠場(chǎng)邊緣的透明鼠籠內(nèi),將同一只C57小鼠再次放入曠場(chǎng)中的相同位置,再次記錄150 s內(nèi)C57小鼠在曠場(chǎng)中的運(yùn)動(dòng)軌跡。每次行為學(xué)檢測(cè)結(jié)束后,用酒精棉球清理曠場(chǎng)及鼠籠以消除上一只小鼠留下的氣味。行為學(xué)測(cè)試結(jié)束后,CD-1小鼠和C57小鼠分別單籠飼養(yǎng)。

處死取材各組C57小鼠飼養(yǎng)31天后,眼球取血,1 500 r/min離心15 min(離心半徑5 cm),取上清保存于EP管中,-80℃凍存。將各組C57小鼠的肺組織取出,放入-80℃冰箱中凍存。剝離C、D、E、F組C57小鼠的皮下腫瘤結(jié)節(jié),測(cè)量長(zhǎng)短徑并稱重,同時(shí)將腫瘤組織凍存。

ELISA檢測(cè)運(yùn)用ELISA方法檢測(cè)小鼠血清中VEGF的表達(dá)。按照妙通公司VEGF ELISA試劑盒的Protocol操作,全自動(dòng)酶標(biāo)儀在450 nm處檢測(cè)各孔的吸光度(D)值。

Westernblot檢測(cè)運(yùn)用Western blot方法檢測(cè)各組小鼠肺組織中p Erk、MMP-2及MMP-9蛋白的表達(dá)。將肺組織細(xì)胞裂解,提取組織蛋白,定量和分離,轉(zhuǎn)膜后分別與相應(yīng)蛋白抗體孵育并顯色。

real-timepCR檢測(cè)運(yùn)用real-time PCR方法檢測(cè)肺組織中VEGFR2mRNA和L1 CAM mRNA的表達(dá)。剪取米粒大小的肺組織轉(zhuǎn)移至去核酶試管中,加入預(yù)冷的Trizol,用Trizol法提取總RNA,逆轉(zhuǎn)錄合成樣本cDNA。50μL PCR反應(yīng)體系包括：realtime PCR MIX 32μL,上游、下游引物各2μL,探針1 μL,cDNA模板2μL,dd H2O 13μL。PCR反應(yīng)條件為：95℃2 min,95℃15 s,60℃20 s,循環(huán)40次。

統(tǒng)計(jì)學(xué)處理用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì),采用One-way ANOVA方法進(jìn)行檢驗(yàn),P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

實(shí)驗(yàn)流程將實(shí)驗(yàn)小鼠隨機(jī)分為6組,根據(jù)不同分組在社交應(yīng)激造模的不同階段給予小鼠皮下種瘤,31天后處死實(shí)驗(yàn)小鼠,取材并分析,實(shí)驗(yàn)流程見圖2。

各組小鼠行為學(xué)比較B、C、E、F組C57小鼠在社交區(qū)(interaction zone)和角落區(qū)(corner zone)的停留時(shí)間在應(yīng)激鼠CD-1存在和不存在的情況下明顯不同,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05,圖3)。在CD-1小鼠出現(xiàn)后,B、C組C57小鼠在社交區(qū)停留時(shí)間的變化尤為明顯(P＜0.01)；在CD-1小鼠存在和不存在的情況下,A、D組C57小鼠在社交區(qū)和角落區(qū)停留時(shí)間的變化不大,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞ 0.05)。圖3C中1、2分別是非應(yīng)激組和應(yīng)激組小鼠在CD-1小鼠不存在時(shí),在社交應(yīng)激曠場(chǎng)中的運(yùn)動(dòng)軌跡,圖中可見,兩組小鼠的運(yùn)動(dòng)軌跡在社交應(yīng)激曠場(chǎng)中均勻分布；3、4圖分別是非應(yīng)激組和應(yīng)激組小鼠在CD-1小鼠存在時(shí),在社交應(yīng)激曠場(chǎng)中的運(yùn)動(dòng)軌跡,圖中可見,非應(yīng)激組小鼠的運(yùn)動(dòng)軌跡仍均勻分布于社交應(yīng)激曠場(chǎng)中,而應(yīng)激組小鼠的運(yùn)動(dòng)軌跡主要分布于社交應(yīng)激曠場(chǎng)中的右下角。

皮下腫瘤結(jié)節(jié)重量及體積變化的比較各組C57小鼠在皮下種瘤7天后,用千分尺測(cè)量小鼠皮下腫瘤的長(zhǎng)徑(b)和短徑(a),根據(jù)公式V=b*a2/2,計(jì)算出皮下腫瘤的體積,并繪制體積變化曲線圖(圖4A)。C、F組小鼠皮下腫瘤體積的增長(zhǎng)速度明顯高于D組和E組；C組小鼠皮下腫瘤體積的增長(zhǎng)速度與F組小鼠比較,差異明顯；而D組與E組比較差異不大。運(yùn)用多次重復(fù)測(cè)量資料的方差分析方法分析數(shù)據(jù),球性檢驗(yàn)結(jié)果不滿足協(xié)方差矩陣球?qū)ΨQ的條件(P＜0.01)。通過對(duì)一元分析結(jié)果進(jìn)行校正,得出不同測(cè)量時(shí)相之間小鼠腫瘤體積存在差異(F=687.094,P＜0.01)的結(jié)論；不同測(cè)量時(shí)間和不同分組之間也存在著交互作用(F= 29.341,P＜0.01)。種瘤21天后,剖離皮下腫瘤結(jié)節(jié),用電子天平稱重,比較各種瘤組小鼠腫瘤結(jié)節(jié)的重量(圖4B)。C組腫瘤結(jié)節(jié)的重量明顯高于D、E和F組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；F組與E組和D組比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；E組與D組比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。

血清中VEGF的表達(dá)水平C、F組血清中VEGF蛋白的表達(dá)明顯高于其他各組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；D、E組血清中VEGF蛋白的表達(dá)明顯高于A、B組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；D組與E組比較,血清中VEGF蛋白的表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；C組與F組比較,血清中VEGF蛋白的表達(dá)稍高,但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05,圖5)。

VEGFR2和L1CAM的mRNA表達(dá)水平C組C57小鼠肺組織中VEGFR2和L1CAM的m RNA表達(dá)水平明顯高于其他各組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05,圖6)。F組C57小鼠肺組織中VEGFR2和L1CAM的m RNA表達(dá)水平與A、B、D、E組比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。D組小鼠肺組織中VEGFR2mRNA表達(dá)水平明顯高于E組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05),E組肺組織中VEGFR2mRNA表達(dá)水平與A、B組比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。D、E組肺組織中L1CAM mRNA表達(dá)水平明顯高于A、B組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05),而B組與A組、D組與E組比較差異,無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。

肺組織中pErk、MMp-2及MMp-9蛋白的表達(dá)水平C、F組小鼠肺組織中p Erk、MMP-2、MMP-9蛋白的表達(dá)水平均高于其他各組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(圖7,P＜0.05)。D組小鼠肺組織中pErk、MMP-2、MMP-9蛋白的表達(dá)水平高于A、B組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；而E組與D組比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。

討 論

世界衛(wèi)生組織2011年9月公布的最新數(shù)據(jù)顯示,肺癌的發(fā)病率和死亡率在全球高居榜首,肺癌已經(jīng)成為一個(gè)嚴(yán)重的公共健康問題［13］。盡管現(xiàn)代醫(yī)學(xué)在腫瘤的治療上已經(jīng)取得了很大的進(jìn)步,但是即使運(yùn)用先進(jìn)的分子靶向治療技術(shù),非小細(xì)胞肺癌患者的生存率仍然沒有得到很好的改善［14］。腫瘤疾病的一個(gè)顯著特點(diǎn)是易復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移［15］,腫瘤致死的患者中超過90%死于腫瘤的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移,而非原發(fā)性腫瘤疾病本身［16］。

抑郁癥(major depression disorder,MDD)或稱抑郁障礙,是由各種原因引起的以抑郁為主要癥狀并伴有相應(yīng)思維與行為改變的一組心境障礙［17］,它嚴(yán)重地影響了人們的工作和生活質(zhì)量,而其具體的病因及發(fā)病機(jī)制目前尚不完全清楚。國(guó)內(nèi)已有研究證明高神經(jīng)質(zhì)、內(nèi)傾、高社會(huì)依賴性、自律自責(zé)性、完美主義人格特質(zhì)及負(fù)性生活事件為MDD的高危易感因素［18］。據(jù)世界衛(wèi)生組織(WHO)預(yù)測(cè),到2020年MDD將成為僅次于缺血性心臟病的第2位致殘疾?。?9］。MDD的發(fā)病多由親人死亡、夫妻離異、天災(zāi)人禍等負(fù)性生活事件造成,臨床表現(xiàn)為情緒抑郁、多愁善感、思維遲鈍、睡眠障礙,學(xué)習(xí)工作效率低下、多疑、缺乏生活情趣,甚至有自殺傾向［20］。社交應(yīng)激性抑郁動(dòng)物模型模擬人類社交失敗時(shí)呈現(xiàn)的心理狀態(tài),多次給予實(shí)驗(yàn)動(dòng)物社交失敗應(yīng)激刺激,使實(shí)驗(yàn)動(dòng)物產(chǎn)生與人類抑郁癥狀相似的抑郁樣行為學(xué)改變,從而為研究人類MDD提供模型基礎(chǔ)。

研究證實(shí),腫瘤患者特別是進(jìn)展期或晚期腫瘤患者常伴發(fā)心理性疾病,尤其是MDD［21］。MDD不僅會(huì)降低腫瘤患者的生活質(zhì)量,造成身心痛苦,使他們渴望死亡或自殺,甚至還會(huì)引起患者家屬的心理性疾?。?2］。因此,為了提高腫瘤患者的治愈率、改善腫瘤患者的生活質(zhì)量和心理狀態(tài),有必要對(duì)腫瘤伴發(fā)抑郁的疾病狀態(tài)進(jìn)行研究,觀察社會(huì)心理因素引起的抑郁狀態(tài)對(duì)腫瘤生長(zhǎng)的影響,從而為腫瘤伴發(fā)心理性疾病的治療提供一定的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

由于腫瘤患者在腫瘤發(fā)病的任何階段都有可能伴發(fā)心理性疾病,因此本實(shí)驗(yàn)通過設(shè)置腫瘤發(fā)病前、發(fā)病中和發(fā)病后3個(gè)不同干預(yù)時(shí)段,觀察社交應(yīng)激性抑郁對(duì)小鼠腫瘤生長(zhǎng)的影響。實(shí)驗(yàn)中將小鼠的社交應(yīng)激模型與肺癌模型在不同時(shí)段相結(jié)合,分別在社交應(yīng)激模型建立的10天時(shí)間里,選取3個(gè)時(shí)間點(diǎn)給予實(shí)驗(yàn)小鼠皮下種瘤,觀察不同時(shí)段的社交應(yīng)激對(duì)小鼠肺癌進(jìn)展的影響。從實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以發(fā)現(xiàn)(如圖4),在實(shí)驗(yàn)小鼠皮下種瘤之前,先給予小鼠應(yīng)激刺激,會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)小鼠的機(jī)體即腫瘤的生長(zhǎng)環(huán)境產(chǎn)生影響,而且應(yīng)激對(duì)小鼠機(jī)體的影響有利于皮下腫瘤的生長(zhǎng)。腫瘤的生長(zhǎng)依賴于其自身血管形成和發(fā)展,VEGF是與血管生成有關(guān)的重要的特異性細(xì)胞因子［23］,VEGF通過與VEGFR結(jié)合激活細(xì)胞內(nèi)一系列蛋白,使其發(fā)生二聚化和自身磷酸化而發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng)。此外, VEGF還可誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖、出芽及微血管形成［24］。因此,我們檢測(cè)了小鼠血清中VEGF蛋白的表達(dá)水平及轉(zhuǎn)移的肺組織中VEGFR2mRNA的表達(dá)水平。通過對(duì)各組實(shí)驗(yàn)結(jié)果的比較(圖5、6),我們推測(cè)瘤前應(yīng)激組在經(jīng)過10天社交應(yīng)激之后,小鼠機(jī)體免疫力已經(jīng)有所下降,在此基礎(chǔ)上接種腫瘤細(xì)胞,機(jī)體對(duì)腫瘤細(xì)胞的免疫力不足,加上應(yīng)激可能對(duì)VEGF及VEGFR的生成有一定作用,因此該組小鼠皮下腫瘤的生長(zhǎng)速度最快。因?yàn)榧毙詰?yīng)激可以激活并增強(qiáng)機(jī)體的免疫防御能力,所以對(duì)于瘤后應(yīng)激組,在接種腫瘤的基礎(chǔ)上緊接著給予社交應(yīng)激刺激,這一刺激很可能增強(qiáng)了小鼠免疫系統(tǒng)對(duì)腫瘤細(xì)胞的免疫防御作用,相比其他各組,該組小鼠的腫瘤生長(zhǎng)相關(guān)指標(biāo)的表達(dá)水平最低。

腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移是一個(gè)長(zhǎng)期、多步驟的過程,其中最重要的一步就是對(duì)由膠原蛋白、層粘連蛋白、纖維粘連蛋白以及結(jié)締組織的蛋白聚糖等高分子化合物組成的細(xì)胞外基質(zhì)(extracellular matrix, ECM)的降解,ECM可以被多種蛋白酶所降解,其中MMPs家族中的明膠酶類MMP-2和MMP-9是參與腫瘤細(xì)胞降解ECM、發(fā)生侵襲和轉(zhuǎn)移的主要酶類［25］。既往研究發(fā)現(xiàn),腫瘤的始發(fā)和進(jìn)展往往與細(xì)胞黏附分子表達(dá)水平的變化有關(guān),這一變化可以通過增強(qiáng)細(xì)胞遷移的信號(hào)傳導(dǎo)來刺激腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移［26］。近期研究顯示,L1CAM過表達(dá)與肺癌、黑色素瘤等腫瘤的預(yù)后和轉(zhuǎn)移密切相關(guān),L1CAM還與其他類型腫瘤的淋巴結(jié)和骨髓的微小轉(zhuǎn)移有關(guān),這說明L1CAM在腫瘤的早期轉(zhuǎn)移擴(kuò)散中發(fā)揮著重要作用。本實(shí)驗(yàn)檢測(cè)了小鼠肺組織中MMP-2和MMP-9蛋白的表達(dá)水平以及L1CAM mRNA的表達(dá)水平,其結(jié)果與VEGF及VEGFR所反映的結(jié)果基本相符,瘤前應(yīng)激組血管生長(zhǎng)相關(guān)分子的表達(dá)水平均高于其他各組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。

本研究發(fā)現(xiàn)腫瘤發(fā)生前期所伴發(fā)的抑郁狀態(tài)對(duì)腫瘤生長(zhǎng)有促進(jìn)作用。這一發(fā)現(xiàn)提示臨床醫(yī)師,在腫瘤伴抑郁狀態(tài)的患者接受抗腫瘤治療的同時(shí)給予抗抑郁藥物,有利于改善患者的抑郁狀態(tài)。推測(cè)社交應(yīng)激對(duì)腫瘤生長(zhǎng)的影響不僅作用于腫瘤生長(zhǎng)相關(guān)的細(xì)胞因子的表達(dá),還會(huì)對(duì)機(jī)體的免疫系統(tǒng)產(chǎn)生影響,但是社交應(yīng)激對(duì)免疫系統(tǒng)的影響程度、作用的時(shí)間點(diǎn)及通路等問題,還有待進(jìn)一步探討和研究。

［1］ Sculier JP.Nonsmall cell lung cancer［J］.Eur Respir Rev, 2013,22(127)：33-36.

［2］ Reiche EM,Nunes SO,Morimoto HK.Stress,depression, the immune system,and cancer［J］.Lancet Oncol,2004,5 (10)：617-625.

［3］ Andersen BL,Farrar WB,Golden-Kreutz D,et al.Stress and immune responses after surgical treatment for regional breast cancer［J］.J Natl Cancer Inst,1998,90 (1)：30-36.

［4］ Brundage MD,Davies D,Mackillop WJ.Prognostic factors in non-small cell lung cancer：a decade of progress［J］. Chest,2002,122(3)：1037-1057.

［5］ 惠起源,魏曉萍,高楓.社會(huì)心理因素與癌癥［J］.現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué),2007,15(12)：1875-1876.

［6］ Hodges LJ,Humphris GM,Macfarlane G.A meta-analytic investigation of the relationship between the psychological distress of cancer patients and their carers［J］.Soc Sci Med,2005,60(1)：1-12.

［7］ Demiral AN,Sen M,Demiral Y,et al.The effect of socioeconomic factors on quality of life after treatment in patients with head and neck cancer［J］.Int J Radiat Oncol Biol Phys,2008,70(1)：23-27.

［8］ Nomura Y,Yasumoto S,Yanai F,et al.Survival and late effects on development of patients with infantile brain tumor［J］.Pediatr Int,2009,51(3)：337-341.

［9］ Seidman AD,Portenoy R,Yao TJ,et al.Quality of life in phase II trials：a study of methodology and predictive value in patients with advanced breast cancer treated with paclitaxel plus granulocyte colony-stimulating factor［J］.J Natl Cancer Inst,1995,87(17)：1316-1322.

［10］ Kunin-Batson A,Kadan-Lottick N,Zhu L,et al.Predictors of independent living status in adult survivors of childhood cancer：a report from the Childhood Cancer Survivor Study［J］.Pediatr Blood Cancer,2011,57(7)：1197-1203.

［11］ Singer S,Krauss O,Keszte J,et al.Predictors of emotional distress in patients with head and neck cancer［J］.Head Neck,2012,34(2)：180-187.

［12］ Deppermann KM.Influence of age and comorbidities on the chemotherapeutic management of lung cancer［J］. Lung Cancer,2001,33(Suppl 1)：S115-S120.

［13］ Ferlay J,Shin HR,Bray F,et al.Estimates of worldwide burden of cancer in 2008：GLOBOCAN 2008［J］.Int J Cancer,2010,127(12)：2893-2917.

［14］ Sant M,Aareleid T,Berrino F,et al.EUROCARE-3：survival of cancer patients diagnosed 1990-94-results and commentary［J］.Ann Oncol,2003,14(Suppl 5)：v61 -v118.

［15］ Hanahan D,Weinberg RA.Hallmarks of cancer：the next generation［J］.Cell,2011,144(5)：646-674.

［16］ Mehlen P,Puisieux A.Metastasis：a question of life or death［J］.Nat Rev Cancer,2006,6(6)：449-458.

［17］ 張菁,賀茂林,李舜偉.神經(jīng)系統(tǒng)疾病伴發(fā)抑郁障礙的診療特點(diǎn)［J］.中華醫(yī)學(xué)雜志,2010,90(45)：3180-3183.

［18］ 李建英,王彥芳,彭菊意,等.抑郁障礙患者抑郁癥狀與人格、生活事件、應(yīng)對(duì)方式和社會(huì)支持相關(guān)研究［J］.中華行為醫(yī)學(xué)與腦科學(xué)雜志,2011,20(1)：40-41.

［19］ Hirsh V.Skeletal disease contributes substantially to morbidity and mortality in patients with lung cancer［J］. Clin Lung Cancer,2009,10(4)：223-229.

［20］ Freixinet JL,Julia-Serda G,Rodriguez PM,et al.Hospital volume：operative morbidity,mortality and survival in thoracotomy for lung cancer.A Spanish multicenter study of 2994 cases［J］.Eur J Cardiothorac Surg,2006,29(1)：20-25.

［21］ Akechi T,Okuyama T,Sugawara Y,et al.Major depression,adjustment disorders,and post-traumatic stress disorder in terminally ill cancer patients：associated and predictive factors［J］.J Clin Oncol,2004,22(10)：1957-1965.

［22］ Bukberg J,Penman D,Holland JC.Depression in hospitalized cancer patients［J］.Psychosom Med,1984,46 (3)：199-212.

［23］ Ferrara N.VEGF and the quest for tumour angiogenesis factors［J］.Nat Rev Cancer,2002,2(10)：795-803.

［24］ Ferrara N,Gerber H P,Lecouter J.The biology of VEGF and its receptors［J］.Nat Med,2003,9(6)：669-676.

［25］ Samantaray S,Sharma R,Chattopadhyaya TK,et al. Increased expression of MMP-2 and MMP-9 in esophageal squamous cell carcinoma［J］.J Cancer Res Clin Oncol, 2004,130(1)：37-44.

［26］ Schmid RS,Maness PF.L1 and NCAM adhesion molecules as signaling coreceptors in neuronal migration and process outgrowth［J］.Curr Opin Neurobiol,2008,18 (3)：245-250.

Effect of social stress in different time periods on the growth of lung cancer in mice

WU Xiao,LIU Bao-jun,WU Jin-feng,LI Bei,GONG Wei-yi, XU Hai-lin,DUAN Xiao-hong,DONG Jing-cheng△
(Department of Integrated Traditional Chinese and Western Medicine,Huashan Hospital, Fudan University,Shanghai 200040,China)

Objective To observe the effect of social stress in different time periods on the growth of lung cancer in mice.MethodsThirty-six C57BL/6J mice were randomly and equally divided into group A(normal control),group B(depression group),group C(tumor before social stress group), group D(tumor group),group E(tumor after social stress group),and group F(5 daysˊsocial stress before tumor then another 5 daysˊsocial stress).On the basis of 10 daysˊsocial stress modeling,just before,during and after the social stress,we inoculated the lung cancer cells subcutaneously in C,D and E group.ELISA was used to measure the expression of vascular endothelial growth factor(VEGF)in the serum,while Western blot was used to measure the amount of phosphorylated extracellular regulated protein kinases(p ERK),matrix metalloproteinase-2(MMP-2)and matrix metalloproteinase-9(MMP-9).Real-time PCR was used to measure the amount of VEGF receptor 2(VEGFR2)mRNA%and L1 cell adhesion molecule(L1CAM).ResultsThe weight and volume of tumor nodules,as well as the expression of the above cytokines that related with tumor growth and metastasis in group C and F were much more higher than any other groups(P＜0.05).On the other hand,there was no significant difference on the weight or volume of tumor nodules,or the expression of the cytokines between group D and E(P＞0.05).ConclusionsSocial stress that occurred before and among the process of lung cancer in mice has significant effect on the growth of lung cancer,while the inner mechanism needs further research.

social stress； tumor growth； psychosocial factors； cytokines

R 734.2

A

10.3969/j.issn.1672-8467.2014.01.002

2013-02-16；編輯：張秀峰)

國(guó)家重點(diǎn)基礎(chǔ)研究發(fā)展計(jì)劃(973計(jì)劃,2009CB523001)；國(guó)家自然科學(xué)基金(81173390,81102562)；國(guó)家教育部博士點(diǎn)科研基金(20110071120072)

△Corresponding author E-mail：jcdong2004@126.com

*This work was supported by the National Key Basic Research program of China(973 program,2009CB523000),National Natural Science Foundation of China(81173390,81102562),Chinese Ministry of Education Fund for Doctor Discipline Scientific Research (20110071120072).