杜學(xué)芳,王青,許琳,馬曉瑩

(青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬青島市市立醫(yī)院消化內(nèi)科,山東青島 266011)

門靜脈高壓病人胃黏膜內(nèi)生長激素釋放肽的表達(dá)

杜學(xué)芳,王青,許琳,馬曉瑩

(青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬青島市市立醫(yī)院消化內(nèi)科,山東青島 266011)

目的探討門靜脈高壓(PHT)病人胃黏膜中生長激素釋放肽(Ghrelin)的表達(dá)。方法采用免疫組化方法,檢測39例乙型肝炎后肝硬化伴PHT病人(PHT組)及19例健康志愿者(對照組)胃黏膜Ghrelin的表達(dá)。結(jié)果PHT組病人胃黏膜內(nèi)Ghrelin的陽性表達(dá)率較對照組明顯降低(χ2＝3.928,P＜0.05)。門靜脈高壓性胃病(PHG)組病人胃黏膜內(nèi)Ghrelin的陽性表達(dá)率與無PHG組比較差異無顯著性(P＞0.05)。PHG重型組病人胃黏膜中Ghrelin的陽性表達(dá)率與PHG輕型組比較差異無顯著性(P＞0.05)。結(jié)論P(yáng)HT病人胃黏膜中Ghrelin的分泌減少,推測Ghrelin有保護(hù)胃黏膜的作用。

肝硬化;高血壓,門靜脈;促生長素釋放激素

生長激素釋放肽(Ghrelin)是由28個氨基酸組成的腦腸肽,主要由胃組織分泌入血,與攝食調(diào)節(jié)、肥胖、糖尿病、代謝綜合征、心血管疾病、消化系統(tǒng)疾病等密切相關(guān)[1]。門靜脈高壓(PHT)并發(fā)消化道大出血是肝硬化病人常見死因,目前已引起廣泛關(guān)注。最近有研究顯示,Ghrelin在PHT病人及其并發(fā)癥的發(fā)生、發(fā)展中扮演著重要角色。本文采用免疫組化方法檢測Ghrelin在PHT病人胃黏膜組織表達(dá),探討Ghrelin與PHT的相關(guān)性,旨在為PHT的預(yù)防、診斷和治療提供幫助[2-3]。

1 材料與方法

1.1 材料來源

隨機(jī)選取我院2009年5月—2012年4月收治乙型肝炎(乙肝)后肝硬化伴PHT病人39例,男21例,女18例;年齡30～63歲,平均(45.79±15.73)歲。乙肝后肝硬化診斷符合由中華醫(yī)學(xué)會肝病學(xué)分會、中華醫(yī)學(xué)會感染病分會、中國肝炎防治基金會聯(lián)合頒布的《2010年慢性乙型肝炎防治指南》中的標(biāo)準(zhǔn)。根據(jù)內(nèi)鏡下有無門靜脈高壓性胃病(PHG)分為PHG組18例和無PHG組21例,參照McCormack的分類方法將PHG病人分為PHG輕型組8例和PHG重型組10例。同時(shí),選取本院同期胃鏡檢查大致正常的健康志愿者19例作為對照組,男11例,女8例,年齡25～68歲,平均(51.09± 19.58)歲。本研究由醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn),受試者均已簽署知情同意書。各組間性別、年齡均具有可比性。

1.2 Ghrelin免疫組化染色

常規(guī)胃鏡準(zhǔn)備,所有受試者均在晨起空腹清醒的情況下由經(jīng)驗(yàn)豐富的醫(yī)師行胃鏡檢查,并于胃竇處取大小約0.5 cm×0.3 cm組織1塊,置于40 g/L多聚甲醛中固定2～3 d,常規(guī)脫水透明,石蠟包埋, 3μm厚連續(xù)切片。組織切片烤片2 h后,脫蠟、水化,沸水浴法抗原修復(fù),雙氧水封閉20 min,37℃下血清封閉20 min,滴加一抗(濃度為5μg/L),4℃過夜,二抗孵育20 min,DAB顯色,蘇木精復(fù)染,常規(guī)脫水、透明、封片、鏡檢。以PBS代替一抗作為空白對照。

1.3 免疫組織化學(xué)結(jié)果定量判斷標(biāo)準(zhǔn)

Ghrelin陽性表達(dá)的細(xì)胞散在于黏膜固有層的腺體,棕褐色為陽性。染色后先在光學(xué)顯微鏡下定性觀察,隨機(jī)選取互不重疊的5個視野,然后于高倍鏡(400倍)下觀察判定Ghrelin的陽性表達(dá)情況,并取其平均值做為最后的結(jié)果。評分標(biāo)準(zhǔn):①按顯色深淺評分:不顯色為0分,淺黃色顯色為1分,棕黃色顯色為2分,棕褐色顯色為3分。②按顯色比例評分:顯色細(xì)胞占細(xì)胞總數(shù)＜25%為1分,25%～50%為2分,51%～75%為3分,＞75%為4分。最后以兩者乘積得分作為判定標(biāo)準(zhǔn)。0分為陰性,1～4分為弱陽性,5～9分為陽性,＞9分為強(qiáng)陽性。統(tǒng)計(jì)分析時(shí),將弱陽性與陰性歸為陰性表達(dá),強(qiáng)陽性與陽性歸為陽性表達(dá),計(jì)算陽性表達(dá)率[4]。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

應(yīng)用SPSS 17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)數(shù)資料數(shù)據(jù)間比較采用卡方檢驗(yàn),以P＜0.05為差異有顯著意義。

2 結(jié) 果

PHT組病人Ghrelin陽性表達(dá)12例,陽性表達(dá)率為30.8%;正常對照組Ghrelin陽性表達(dá)11例,陽性表達(dá)率為57.9%,兩組比較差異有顯著意義(χ2＝3.928,P＜0.05)。無PHG組病人Ghrelin陽性表達(dá)6例,陽性表達(dá)率為28.6%;PHG組病人Ghrelin陽性表達(dá)18例,陽性表達(dá)率為33.3%,兩組比較差異無顯著性(P＞0.05)。PHG重型組病人Ghrelin陽性表達(dá)4例,陽性表達(dá)率為40.0%;PHG輕型組病人Ghrelin陽性表達(dá)2例,陽性表達(dá)率為25.0%,兩組比較差異無顯著性(P＞0.05)。

3 討 論

Ghrelin是在1999年由日本國立循環(huán)疾病中心KOJIMA等首先在小鼠胃內(nèi)分泌細(xì)胞及下丘腦弓狀核中發(fā)現(xiàn),它是由28個氨基酸構(gòu)成的多肽,主要由胃組織的X/A樣內(nèi)分泌細(xì)胞產(chǎn)生,同時(shí)存在于下丘腦、弓狀核、腸道、垂體、腎臟、胎盤、胰腺、睪丸等組織中[5-6]。研究證實(shí),Ghrelin具有刺激GH分泌、增強(qiáng)食欲、促進(jìn)胃酸分泌、增進(jìn)胃腸動力及保護(hù)胃黏膜等生物學(xué)功能[7]。越來越多的研究表明,Ghrelin受到多種不同生理病理狀態(tài)的調(diào)節(jié)和影響,并對多種疾病的發(fā)生產(chǎn)生影響。本研究結(jié)果顯示,PHT病人胃黏膜內(nèi)Ghrelin的表達(dá)顯著下降。PHT病人食管胃底靜脈曲張[8],胃黏膜充血水腫,細(xì)胞功能受損,導(dǎo)致胃黏膜分泌Ghrelin減少。據(jù)有關(guān)研究報(bào)道,Ghrelin及其受體均在血管表達(dá),Ghrelin對血管的作用限于有血管的區(qū)域,Ghrelin可直接舒張血管并逆轉(zhuǎn)血管內(nèi)皮素所致的血管收縮作用[9]。因此,推測Ghrelin具有保護(hù)胃黏膜的作用。PHG組病人胃黏膜內(nèi)Ghrelin的陽性表達(dá)率與無PHG組比較、PHG重型組病人胃黏膜中Ghrelin的陽性表達(dá)率與PHG輕型組比較,差異均無顯著意義。說明Ghrelin的表達(dá)與病人有無PHG及其程度無關(guān)。

綜上所述,PHT病人胃黏膜充血水腫,胃黏膜內(nèi)Ghrelin的表達(dá)下降,提示Ghrelin具有保護(hù)胃黏膜的作用。推測通過檢測胃黏膜內(nèi)Ghrelin的表達(dá)水平,可預(yù)測胃黏膜的預(yù)后。

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(本文編輯 厲建強(qiáng))

EXPRESSION OF GHRELIN IN GASTRIC MUCOSA OF PATIENTS WITH PORTAL HYPERTENSION

DU Xuefang,WANG Qing,XU Lin,MA Xiaoying (The Affiliated Municipal Hospital of Qingdao University Medical College,Qingdao 266011, China)

ObjectiveTo investigate the expression of Ghrelin in gastric mucosa of patients with portal hypertension (PHT).MethodsGhrelin in gastric mucosa in 39 patients with PHT due to hepatitis B-related liver cirrhosis and 19 health volunteers(normal controls)was detected by using immunohistochemical method.ResultsThe expression of Ghrelin in gastric mucosa of the patients was lower than that of the normal controls(χ2＝3.928,P＜0.05).The difference of expression of Ghrelin between patients with portal hypertensive gastropathy(PHG)and those without was not significant(P＞0.05),the same was noted in PHG patients between severe and mild type group(P＞0.05).ConclusionThe expression of Ghrelin in gastric mucosa of patients with PHG decreases,it is presumed that Ghrelin plays a protection of gastric mucosa.

liver cirrhosis;hypertension,portal;somatotropin-releasing hormone

R575

A

1008-0341(2014)01-0052-02

10.13362/j.qlyx201401019

2013-02-25;

2013-04-19

杜學(xué)芳(1985-),女,碩士研究生。

王青(1961-),男,主任醫(yī)師,碩士生導(dǎo)師。E-mail: qingwangqingdao＠yahoo.com.cn。