邱萬(wàn)敏 陳建明 嚴(yán)萍 呂冰 何鑫 趙秀娣 夏麗萍 周金華 丁夏峰丁海燕 卜勁松 龔月江

血清胱抑素C與頸動(dòng)脈內(nèi)膜中層厚度的相關(guān)性研究

邱萬(wàn)敏 陳建明 嚴(yán)萍 呂冰 何鑫 趙秀娣 夏麗萍 周金華 丁夏峰丁海燕 卜勁松 龔月江

有研究表明，炎癥參與了動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生和發(fā)展，其發(fā)病機(jī)制主要涉及細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）降解和血管壁重構(gòu)，炎癥介質(zhì)可刺激血管平滑肌細(xì)胞促使其分泌組織蛋白酶S、K和半胱氨酸蛋白酶等。半胱氨酸蛋白酶具有促?gòu)椥越M織離解特性，它可在血管動(dòng)脈彈力蛋白損傷處過(guò)度表達(dá)。血清胱抑素C（Cys C）在體內(nèi)能較強(qiáng)抑制半胱氨酸蛋白酶，是目前發(fā)現(xiàn)的對(duì)組織蛋白酶B抑制作用最強(qiáng)的抑制物。當(dāng)血清Cys C濃度降低時(shí)，組織蛋白酶活性增強(qiáng)，可造成血管組織的病理?yè)p害。本研究旨在通過(guò)檢測(cè)血清Cys C在不同頸動(dòng)脈內(nèi)膜中層厚度（IMT）患者中的表達(dá)水平，進(jìn)一步了解其相關(guān)性。

1 資料和方法

1.1 一般資料 選取2009-05—2011-05在我院住院的頸動(dòng)脈IMT增厚患者195例，其中男96例，女99例，年齡49～76（68.15±10.27）歲。根據(jù)患者頸動(dòng)脈IMT分為兩組：增厚組106例（0.9mm＜頸動(dòng)脈IMT＜1.3mm），其中男52例，女54例，年齡49～74（67.01±11.48）歲；斑塊組89例（頸動(dòng)脈IMT≥1.3mm），其中男44例，女45例，年齡52～76（69.51±8.98）歲。另選擇IMT正常者（頸動(dòng)脈IMT≤0.9mm）120例作為對(duì)照組，其中男62例，女58例，年齡50～74（67.98±9.37）歲。3組性別、年齡比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05）。所有研究對(duì)象均行頸動(dòng)脈超聲檢查。排除腎功能不全患者（肌酐及肌酐清除率大于正常）、明確的細(xì)菌感染患者[血常規(guī)中白細(xì)胞大于正常值和（或）hs-CRP大于正常值]。

1.2 方法 所有患者均于清晨采集空腹肘前靜脈血標(biāo)本，采集靜脈血5ml，2h內(nèi)分離血清用于Cys C、血肌酐指標(biāo)檢測(cè)，同時(shí)采集EDTAK2抗凝血2ml，用于血常規(guī)、hs-CRP檢測(cè)。Cys C檢測(cè)采用乳膠增強(qiáng)免疫比濁法，試劑購(gòu)于北京利德曼生化股份有限公司；hs-CRP采用免疫熒光干式定量法，試劑購(gòu)于韓國(guó)Boditech。頸動(dòng)脈超聲檢測(cè)采用Vivid 7 dimension高分辨率超聲儀測(cè)定雙側(cè)頸動(dòng)脈IMT，頸動(dòng)脈內(nèi)膜測(cè)定方法按操作規(guī)范進(jìn)行。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)量資料以表示。多組均數(shù)間比較采用方差齊性檢驗(yàn)和單因素方差分析，組間兩兩比較采用SNK-q檢驗(yàn)，兩變量相關(guān)性分析采用Pearson相關(guān)分析。

2 結(jié)果

2.1 3組患者的血肌酐、肌酐清除率及頸動(dòng)脈IMT、hs-CRP、Cys C水平的比較 見(jiàn)表1。

表1 3組患者的血肌酐、肌酐清除率及頸動(dòng)脈IMT、hs-CRP、Cys C水平的比較

由表1可見(jiàn)，3組肌酐值和肌酐清除率比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05），斑塊組hs-CRP水平高于增厚組及對(duì)照組，增厚組高于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.01）；而斑塊組Cys C水平低于增厚組及對(duì)照組，增厚組低于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.01）。

2.2 hs-CRP、血清Cys C與頸動(dòng)脈IMT的相關(guān)性分析 hs-CRP與頸動(dòng)脈IMT呈正相關(guān)（r=0.491，P＜0.01）；血清Cys C與頸動(dòng)脈IMT呈負(fù)相關(guān)（r=-0.682，P＜0.01）。

3 討論

Cys C是一種小分子堿性分泌性非糖化蛋白質(zhì)。1981年首次測(cè)出人類Cys C的單鏈氨基酸序列，這是胱氨酸蛋白酶抑制蛋白質(zhì)超家族中測(cè)定出的第1個(gè)蛋白質(zhì)序列，其順序與任何其他蛋白質(zhì)無(wú)顯著的同源性。它是半胱氨酸蛋白酶抑制劑超家族2中的成員之一[1]，表達(dá)于所有的有核細(xì)胞，參與細(xì)胞內(nèi)外蛋白水解的調(diào)控，保護(hù)細(xì)胞免受不適當(dāng)?shù)膬?nèi)源性或外源性蛋白酶水解。有研究使用印跡法研究人體組織和細(xì)胞系發(fā)現(xiàn)，在所研究的細(xì)胞中均存在Cys C或其mRNA。Cys C作為小分子蛋白能自由通過(guò)腎小球?yàn)V過(guò)膜，長(zhǎng)期以來(lái)一直作為腎小球?yàn)V過(guò)率的標(biāo)示物，已明確是評(píng)價(jià)腎功能損傷的一項(xiàng)敏感指標(biāo)，有研究發(fā)現(xiàn)檢測(cè)Cys C有助于早期糖尿病腎病的診斷[2]。

Cys C是半胱氨酸蛋白酶的抑制劑，在體內(nèi)能較強(qiáng)抑制半胱氨酸蛋白酶和組織蛋白酶。炎癥參與了動(dòng)脈粥樣硬化與動(dòng)脈瘤的發(fā)生和發(fā)展，炎癥介質(zhì)可刺激血管平滑肌細(xì)胞促使其分泌組織蛋白酶S、K和半胱氨酸蛋白酶等，而具有促?gòu)椥越M織離解特性的半胱氨酸蛋白酶可在血管動(dòng)脈彈力蛋白損傷處過(guò)度表達(dá)。Cys C在體內(nèi)能較強(qiáng)抑制半胱氨酸蛋白酶和組織蛋白酶。當(dāng)Cys C濃度降低時(shí)組織蛋白酶活性增強(qiáng)，可造成血管組織的病理?yè)p害[3]。動(dòng)脈粥樣硬化小鼠動(dòng)物模型證實(shí)發(fā)現(xiàn)Cys C低水平表達(dá)的小鼠大動(dòng)脈壁中層彈力纖維的破壞膠原及平滑肌細(xì)胞的堆積均較后者明顯，雖然動(dòng)脈內(nèi)膜損害大小、內(nèi)層巨噬細(xì)胞聚集、脂質(zhì)核心的大小兩組之間無(wú)明顯差異，但前者胸主動(dòng)脈瘤和腹主動(dòng)脈瘤的發(fā)生均多于后者。該研究直接證實(shí)了Cys C在實(shí)驗(yàn)性動(dòng)脈粥樣硬化形成期間可以減少血管壁ECM降解進(jìn)而導(dǎo)致血管壁重構(gòu)。Watanabe等[4]研究60例原發(fā)性高血壓患者（伴腎功能不者全除外）血清Cys C水平與腎臟、心臟及血管終末損害之間的關(guān)系，表明Cys C與頸總動(dòng)脈IMT存在相關(guān)性。另有學(xué)者對(duì)腹主動(dòng)脈瘤患者進(jìn)行了3年的臨床觀察，發(fā)現(xiàn)血清Cys C濃度與腹主動(dòng)脈瘤大小、年膨脹率呈明顯負(fù)相關(guān)，說(shuō)明Cys C缺乏與主動(dòng)脈瘤進(jìn)展密切相關(guān)，推測(cè)其與缺乏Cys C不能有效抑制半胱氨酸蛋白酶的活性有關(guān)[4]。也有學(xué)者從基因方面驗(yàn)證Cys C基因與人群和冠心病患者的關(guān)系。測(cè)定發(fā)現(xiàn)基因突變單倍體（-82G/Cand-78T/G）攜帶者與Cys C血清濃度顯著降低相關(guān)，而且心肌梗死后的突變單倍體者冠狀動(dòng)脈狹窄的每段平均值高于非心肌梗死者的平均值，Cys C與冠狀動(dòng)脈硬化密切相關(guān)[6]。

近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)Cys C與動(dòng)脈粥樣硬化密切相關(guān)。Shi等[7]應(yīng)用免疫染色法和免疫雜交法發(fā)現(xiàn)動(dòng)脈粥樣斑塊和腹主動(dòng)脈瘤組織中Cys C含量較正常血管減少，而組織蛋白酶S、K卻過(guò)度表達(dá)。他們還發(fā)現(xiàn)動(dòng)脈粥樣斑塊中的Cys C水平與疾病進(jìn)程呈負(fù)相關(guān)。

本研究通過(guò)比較斑塊組、增厚組、對(duì)照組的hs-CRP和Cys C水平，hs-CRP在斑塊組明顯高于增厚組和對(duì)照組，且增厚組明顯高于對(duì)照組，hs-CRP與頸動(dòng)脈IMT呈正相關(guān)，說(shuō)明炎癥反應(yīng)參與了動(dòng)脈粥樣斑塊的形成，其發(fā)病機(jī)制可能涉及ECM降解與血管壁重構(gòu)。本研究同時(shí)發(fā)現(xiàn)斑塊組血清Cys C水平明顯低于增厚組、對(duì)照組，且增厚組低于對(duì)照組，Cys C與頸動(dòng)脈IMT呈負(fù)相關(guān)，說(shuō)明Cys C與動(dòng)脈粥樣斑塊的形成密切相關(guān)。目前Cys-C致動(dòng)脈粥樣硬化的機(jī)制尚未完全闡明，但有研究結(jié)果提示由于CysC含量減少，它未能有效抑制組織蛋白酶的活性，組織蛋白酶在血管壁彈力蛋白處過(guò)度表達(dá)，促使彈性組織的離解。組織蛋白酶還可激活基質(zhì)金屬蛋白酶，后者的激活可致血管壁ECM降解，引起血管壁病理性重構(gòu)[8-9]。Cys C與動(dòng)脈粥樣斑塊的形成密切相關(guān)其機(jī)制可能為：（1）Cys C表達(dá)于所有的有核細(xì)胞，調(diào)節(jié)半胱氨酸蛋白酶活性，參與ECM的產(chǎn)生和降解的動(dòng)態(tài)平衡。（2）Cys C及其片段還可能影響了粒細(xì)胞的吞噬與趨化功能，參與炎癥過(guò)程。（3）Cys C在體內(nèi)可以強(qiáng)烈地抑制某些半胱氨酸蛋白酶，尤其是抑制組織蛋白酶。當(dāng)Cys C含量減少時(shí)組織蛋白酶活性相對(duì)增強(qiáng)，可造成病理?yè)p害，最終導(dǎo)致動(dòng)脈粥樣硬化。

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2013-09-18）

（本文編輯：馬雯娜）

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