汪 巍， 陳映輝， 王麗娜， 許 枬， 賈天柱

（遼寧中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院， 遼寧 大連 116600）

柴胡與醋柴胡疏肝解郁作用比較研究

汪 巍， 陳映輝， 王麗娜， 許 枬， 賈天柱*

（遼寧中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院， 遼寧 大連 116600）

目的 比較柴胡與醋柴胡疏肝解郁作用的差異。方法 選擇小鼠懸尾應(yīng)激、小鼠強(qiáng)迫游泳、利血平所致眼瞼下垂小鼠抑郁模型，比較柴胡醋制前后疏肝解郁作用差異，并通過(guò)測(cè)定小鼠全血膽堿酯酶活力對(duì)其疏肝解郁作用機(jī)制進(jìn)行探究。結(jié)果 各給藥組均可以對(duì)抗小鼠因強(qiáng)迫懸尾及強(qiáng)迫游泳造成的抑郁癥狀，使其失望不動(dòng)時(shí)間縮短，可對(duì)抗因利血平所致小鼠眼瞼下垂和體溫下降， 并能降低小鼠全血膽堿酯酶活力。 其中醋柴胡和陽(yáng)性組作用顯著， P＜0.01。結(jié)論 醋柴胡的疏肝解郁作用優(yōu)于生柴胡。

柴胡；醋柴胡；疏肝解郁；乙酰膽堿酯酶

柴胡為 傘形科 植物柴胡 Bupleurum chinense DC或狹葉柴胡 Bupleurum scorzoneri folium W illd 的 干 燥 根， 按 性 狀 不同， 分別習(xí)稱(chēng) “北柴胡” 及 “南柴胡”。 性味辛、 苦， 微寒，歸肝、膽、肺經(jīng)。疏散退熱，疏肝解郁，升舉陽(yáng)氣。用于感冒發(fā)熱，寒熱往來(lái)，胸脅脹痛，月經(jīng)不調(diào)，子宮脫垂， 脫肛［1］。 柴胡傳統(tǒng)炮制方法有： 醋柴胡、 鱉血柴胡、酒柴胡、蜜炙柴胡，中國(guó)藥典目前只收載醋柴胡。自古便有柴胡 “入解表藥生用， 清肝炒熟用” 的說(shuō)法， 在傳統(tǒng)理論中，生柴胡的升散作用較強(qiáng)，多用于解表退熱；醋柴胡可以緩和升散之性，降低解表退熱作用，并可增強(qiáng)疏肝止痛作用，多用于肝郁氣滯的脅痛、腹痛及月經(jīng)不調(diào)等癥。兩者的疏肝解郁作用到底如何呢？故考察醋制前后柴胡疏肝解郁作用差異及其解郁作用機(jī)制，選用小鼠懸尾應(yīng)激、小鼠強(qiáng)迫游泳、 利血平所致眼瞼下垂小鼠抑郁模型［2-6］， 比較柴胡醋制前后疏肝解郁作用的差異。并通過(guò)測(cè)定小鼠全血膽堿酯酶活力對(duì)其疏肝解郁作用機(jī)制進(jìn)行探究。

1 材料

1.1 藥材來(lái)源 柴胡飲片購(gòu)于遼寧正大祥和藥業(yè)集團(tuán)有限公司， 批號(hào) 201105245， 產(chǎn)地遼寧。

1.2 試劑 利血平注射液， 天津金耀氨基酸有限公司公司， 批號(hào) 1203241； 鹽酸氯米帕明， 江蘇恩華藥業(yè)， 批號(hào)H32022974； 甲硫酸新斯的明注射液， 批號(hào) H110202； 乙酰膽堿酯酶 （TChE） 測(cè)定試劑盒， 購(gòu)于南京建成生物工程研究所。

1.3 儀器 日立 U-3010 型分光光度計(jì)， 日立公司。

1.4 動(dòng)物 昆明種小鼠， 雌雄兼用， 體質(zhì)量 （18 ～22） g，由大連醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供， 清潔級(jí) （CL）。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 生、 醋柴胡疏肝解郁作用差異比較

2.1.1 醋柴胡水煎液的制備 分別將生柴胡及 3 種醋柴胡用水煎煮制成1 ∶2 濃度水煎劑 （相當(dāng)于生藥）， 備用。

2.1.2 小鼠懸尾試驗(yàn) 按文獻(xiàn)［7］方法進(jìn)行試驗(yàn)， 取小鼠60 只。 隨機(jī)分成 6 組， 每組 10 只， 分別為生柴胡組、 醋柴胡 1 組 （每 100 kg柴胡用米醋 20 kg）、 醋柴胡 2 組 （每100 kg柴胡用米醋 40 kg）、 醋柴胡 3 組 （每 100 kg柴胡用米醋 60 kg）、 生理鹽水陰性對(duì)照組、 氯米帕明陽(yáng)性對(duì)照組。給藥組分別給生柴胡及3 種醋柴胡水煎劑， 參照文獻(xiàn) ［8］中給藥方法及劑量， 按 30 mL/kg灌胃給藥， 陰性對(duì)照組灌服等容量生理鹽水， 陽(yáng)性對(duì)照組灌服氯米帕明 20 mg/kg。連續(xù)灌胃7 d， 于末次灌胃給藥后1 h 后將小鼠尾端2 cm處固定于水平面上， 使其呈倒掛狀態(tài)， 頭部離臺(tái)面約 30 cm，四周以板隔離動(dòng)物視線， 記錄小鼠在 6 min 內(nèi)的不動(dòng)時(shí)間為失望時(shí)間。

2.1.3 小鼠強(qiáng)迫游泳試驗(yàn) 按文獻(xiàn)［7］中方法， 先做預(yù)試驗(yàn)， 將小鼠放入水槽 （2 000 mL燒杯， 高 20 cm， 直徑 14 cm， 水深 10 cm， 置于水浴鍋內(nèi)） 中， 調(diào)節(jié)水溫保持 25 ℃左右， 持續(xù)觀察 6 min， 累 計(jì) 6 min 內(nèi)小 鼠 在 水中 停 止 掙扎、呈漂浮狀態(tài)、僅有細(xì)小的肢體運(yùn)動(dòng)以保持頭部浮在水面的持續(xù)時(shí)間 （不動(dòng)時(shí)間）， 將不動(dòng)時(shí)間超過(guò) 150 s或低于60 s者小鼠剔除。 將合格老鼠隨機(jī)分組 （分組及處理同懸尾實(shí)驗(yàn)）， 連續(xù)灌胃 7 d， 于末次灌胃 1 h 后按預(yù)試驗(yàn)方法進(jìn)行強(qiáng)迫游泳試驗(yàn)， 記錄小鼠 6 min 內(nèi)累計(jì)不動(dòng)時(shí)間。

2.1.4 利血平拮抗試驗(yàn) 按文獻(xiàn)［9］中方法， 取實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分組 （分組及處理較懸尾試驗(yàn)增加利血平模型組） 連續(xù)灌胃給藥 7 d， 末次給藥 30 min 后每只小鼠按 2.5 mg/kg腹腔注射利血平 （0.1 mL/log） 觀察小鼠眼瞼下垂情況，準(zhǔn)確記錄1 h時(shí)的眼瞼下垂度和體溫，觀察自發(fā)活動(dòng)、耳尾顏色及腹瀉等情況。 按 Rubin 分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)判斷下垂度。 0 度為正常開(kāi)目； 1 度為眼瞼下垂 1/4； 2 度為眼瞼下垂 1/2； 3度為眼瞼下垂 3/4； 4 度為眼瞼完全閉合。

2.2 醋柴胡疏肝解郁作用機(jī)制探究 小鼠全血膽堿酯酶活力測(cè)定 取小鼠 50 只。 隨機(jī)分為 5 組， 每組 10 只， 分別為醋柴胡 1 組 （每 100 kg柴胡用米醋 20 kg）、 醋柴胡 2 組（每 100 kg柴胡用米醋 40 kg）、 醋柴胡 3 組 （每 100 kg柴胡用米醋 60 kg）、 生理鹽水陰性對(duì)照組、 甲硫酸新斯的明陽(yáng)性對(duì)照組。 給藥組分別給 3 種醋柴胡水煎劑， 按 30 mL/kg灌胃給藥， 陰性對(duì)照組灌服等容量生理鹽水， 陽(yáng)性對(duì)照組灌服甲基硫酸新斯的明 0.2 mg/kg， 給藥后 1 h 摘眼球取血，按照試劑盒說(shuō)明書(shū)中步驟用化學(xué)比色法測(cè)定小鼠全血膽堿酯酶活力。

2.3 統(tǒng)計(jì)處理 應(yīng)用 SPSS 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。 各給藥組均與對(duì)照組進(jìn)行比較，采用單因素方差分析比較。P＜0.05 時(shí)， 兩組間差異有顯著性。

3 結(jié)果

3.1 生、 醋柴胡對(duì)小鼠強(qiáng)迫懸尾、 游泳不動(dòng)時(shí)間、 利血平引起小鼠體溫下降、眼瞼下垂的影響 從實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出，生、醋柴胡和氯米帕明均可縮短小鼠尾懸掛的失望時(shí)間和大鼠強(qiáng)迫游泳不動(dòng)時(shí)間，并且可以對(duì)抗因利血平所致小鼠眼瞼下垂和體溫下降，且醋柴胡和氯米帕明的作用優(yōu)于生柴胡。 結(jié)果見(jiàn)表1 ～3。

表1 生、 醋柴胡對(duì)小鼠強(qiáng)迫懸尾不動(dòng)時(shí)間的影響 （）

表1 生、 醋柴胡對(duì)小鼠強(qiáng)迫懸尾不動(dòng)時(shí)間的影響 （）

注： 與生理鹽水組相比較，*P＜0.05，**P＜0.01

/s生理鹽水組組 別 動(dòng)物 數(shù) 劑 量 6 min 不動(dòng) 時(shí)間10 30 m L/kg 167.07 ±24.59生 柴胡組 10 30 m L/kg 134.79 ±23.32*醋 柴胡 1 組 10 30 m L/kg 122.53 ±34.00**醋柴胡 2 組 10 30mL/kg 112.28 ±22.23**醋柴胡 3 組 10 30mL/kg 117.23 ±26.30**氯米帕明組 10 20 mg/kg 96.49 ±13.18**

表2 生、 醋柴胡對(duì)小鼠強(qiáng)迫游泳不動(dòng)時(shí)間的影響 （）

表2 生、 醋柴胡對(duì)小鼠強(qiáng)迫游泳不動(dòng)時(shí)間的影響 （）

注： 與生理鹽水組相比較，*P＜0.05，**P＜0.01

/s生理鹽水組組 別 動(dòng)物 數(shù) 劑 量 6 min 不動(dòng) 時(shí)間10 30 m L/kg 101.55 ±11.39生 柴胡組 10 30 m L/kg 86.69 ±14.64*醋柴胡 1 組 10 30mL/kg 83.13 ±12.75**醋 柴胡 2 組 10 30 m L/kg 80.98 ±13.02**醋 柴胡 3 組 10 30 m L/kg 82.23 ±12.79**氯米帕明組 10 20 mg/kg 79.99 ±10.78**

表3 生、 醋柴胡對(duì)利血平引起小鼠抑郁模型的影響 （）

表3 生、 醋柴胡對(duì)利血平引起小鼠抑郁模型的影響 （）

注： 與生理鹽水組比較，△P＜0.05； 與利血平模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01

/℃生理鹽水組組 別 動(dòng)物數(shù) 劑量 眼瞼下垂度/度 體溫10 30 m L/kg 0 36.94 ±0.19利血平模型組 10 2.5 mg/kg 3.50 ±0.71△ 36.15 ±0.23△生柴 胡組 10 30 m L/kg+利血 平 2.50 ±0.85* 36.48 ±0.21*醋柴 胡 1 組 10 30 m L/kg+利血 平 2.30 ±0.95** 36.55 ±0.17**醋柴 胡 2 組 10 30 m L/kg+利血 平 1.70 ±1.06** 36.65 ±0.40**醋柴胡 3 組 10 30mL/kg+利血平 2.20 ±0.63** 36.73 ±0.31**氯米帕明組 10 20 mg/kg+利血平 1.00 ±1.05 36.58 ±0.33**

3.2 醋柴胡中加醋量不同對(duì)于小鼠膽堿酯酶活力的影響從實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出，醋柴胡能夠抑制膽堿酯酶的活性，從而減少乙酰膽堿的水解，進(jìn)而達(dá)到解郁的作用。而且與對(duì)照組比較，三組醋柴胡均能減低小鼠全血膽堿酯酶活力，其中醋柴胡2組能顯著降低小鼠全血膽堿酯酶活力 （P＜0.01）。 結(jié)果見(jiàn)表 4。

4 討論

抑郁癥在中醫(yī)理論中辯證為郁癥，多由于肝郁氣滯所致，而肝郁，多由情志抑郁，氣機(jī)阻滯所致。是 “肝氣郁”， “肝氣郁結(jié)” 的簡(jiǎn)稱(chēng)。 肝有疏泄的功能， 可條暢氣機(jī)，喜升發(fā)舒暢，疏泄有度，則氣機(jī)暢達(dá)，氣血調(diào)和，疏泄不足，則氣機(jī)郁滯。如因情志不舒，惱怒傷肝，或因其他原因影響氣機(jī)升發(fā)和疏泄，氣郁日久，日久化火，就會(huì)引起肝郁的病癥。治療肝郁癥可通過(guò)疏肝理氣，即疏肝解郁［10-11］。 柴胡為中醫(yī)臨床對(duì) 抑郁癥治療 應(yīng)用廣 泛且療效較好的藥物之一。 又 《素問(wèn)·宣明五氣篇》中說(shuō)： “酸入肝”，又酸味具有收斂，固澀的作用。所以醋柴胡相較之于生柴胡，可以緩和生品的升散之性，降低解表退熱作用，卻可增強(qiáng)其疏肝止痛作用［12］。

表4 醋柴胡中加醋量不同對(duì)于小鼠膽堿酯酶活力影響（）

表4 醋柴胡中加醋量不同對(duì)于小鼠膽堿酯酶活力影響（）

注： 與生理鹽水組相比較，*P＜0.05，**P＜0.01

動(dòng)物數(shù) 劑量 膽堿酯酶活力生理鹽水組組別10 30 mL/kg 38.90 ±3.010醋柴 胡 1 組 10 30 mL/kg 33.79 ±3.346*醋柴 胡 2 組 10 30 mL/kg 25.04 ±4.520**醋柴 胡 3 組 10 30 mL/kg 33.65 ±3.362*甲硫酸新斯的明組 10 0.2mg/kg 21.98 ±5.177**

文中選取小鼠懸尾、強(qiáng)迫游泳、利血平所致眼瞼下垂體溫下降等模型均為經(jīng)典的情志和藥物所致的抑郁模型，可用來(lái)篩選和觀察抗抑郁藥物。動(dòng)物在一個(gè)局限環(huán)境中拼命掙扎試圖逃跑而又無(wú)法逃脫后出現(xiàn)不動(dòng)狀態(tài)，此狀態(tài)反映了絕望行為［13-15］。 本 實(shí)驗(yàn)選 用氯米帕明 為陽(yáng)性對(duì)照， 其為臨床常用三環(huán)類(lèi)抗抑郁藥，用于治療各種抑郁狀態(tài)。主要通過(guò)抑制神經(jīng)元對(duì)釋放于突觸間隙的 NA和 5-HT的再攝取、 又以抑制 5-HT的重?cái)z取為主， 有效治療抑郁癥［16］。但由于其相應(yīng)的阻斷了膽堿能受體，臨床會(huì)常常表現(xiàn)出口干、便秘、排尿困難、視物模糊、頭暈、嗜睡、體位性低血壓、 記憶影響和心動(dòng)過(guò)速等多種不良反應(yīng)［17］， 副作用明顯。所以應(yīng)找出新型藥效良好但副作用小的新型抗抑郁藥。

從實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出生、醋柴胡和氯米帕明均可縮短小鼠尾懸掛的失望時(shí)間和大鼠強(qiáng)迫游泳不動(dòng)時(shí)間，并可對(duì)抗因利血平所致小鼠眼瞼下垂和體溫下降，且醋柴胡和氯米帕明的作用優(yōu)于生柴胡。結(jié)果顯示柴胡具有疏肝解郁的作用，且醋柴胡的疏肝解郁作用明顯優(yōu)于生柴胡。這一結(jié)果驗(yàn)證了傳統(tǒng)理論的科學(xué)性，也證明了中藥炮制的重要性，為臨床準(zhǔn)確用藥提供了依據(jù)。

臨床上，肝郁患者常表現(xiàn)為兩脅苦滿、腹脹、納減及神志上的異常等，這除了由于個(gè)別臟器的病理性病變外，還與植物神經(jīng)、中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能失調(diào)有很大關(guān)系。由于植物神經(jīng)功能紊亂，可影響到人的情緒上的異常改變，亦可影響到消化系統(tǒng)。乙酰膽堿是中樞內(nèi)廣泛存在的一種神經(jīng)介質(zhì)，作為植物神經(jīng)節(jié)前纖維和副交感神經(jīng)節(jié)后纖維神經(jīng)遞質(zhì)，可以興奮膽堿能神經(jīng)，起到調(diào)節(jié)神經(jīng)、消化系統(tǒng)的功能，其可被乙酰膽堿酯酶所水解，膽堿酯酶的活力間接影響著中樞神經(jīng)系統(tǒng)的功能［8］。

從實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出，醋柴胡能夠抑制膽堿酯酶的活性，從而減少乙酰膽堿的水解，進(jìn)而達(dá)到解郁的作用。而且與對(duì)照組比較，3組醋柴胡均能減低小鼠全血膽堿酯酶活力，其中醋柴胡2組能顯著降低小鼠全血膽堿酯酶活力（P＜0.01）。 說(shuō)明在炮制的過(guò)程中加醋量的不同， 炮制品的藥理藥效作用也會(huì)產(chǎn)生差異。提示我們應(yīng)該進(jìn)一步優(yōu)化炮制工藝，使得柴胡等中藥飲片發(fā)揮其最大藥效。

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R285.5

： B

： 1001-1528（2014）03-0617-03

10.3969/j.issn.1001-1528.2014.03.039

2013-03-18

國(guó)家中醫(yī)藥管理局中醫(yī)藥行業(yè)專(zhuān)項(xiàng)項(xiàng)目 （201107007）

汪 巍 （1988—） ， 女， 碩士生， 研究方向： 中藥炮制。 Tel： 15004149605， E-mail： 95772134@qq.com

*通信作者： 賈天柱 （1951—）， 男， 教授， 研究方向： 中藥炮制工藝與原理解析。 Tel： （0411） 87586329