聶翠鳳 劉建功 呂春/內(nèi)蒙古巴彥淖爾市杭錦后旗畜牧局

O-P液的采取及人員防護措施

聶翠鳳 劉建功 呂春/內(nèi)蒙古巴彥淖爾市杭錦后旗畜牧局

牛羊O-P液的采集是開展動物口蹄疫病原學監(jiān)測的一項重要技術內(nèi)容，O-P液采集主要適用于牛、羊、豬體型大的偶蹄類動物。動物采集食道－咽部分泌物（O－P液），可以評估家畜免疫抗體水平，掌握群體免疫狀況；了解口蹄疫病原的分布狀況及高風險區(qū)域的發(fā)病情況，追蹤口蹄疫病毒變異趨勢。

采集技術需要在充分理解的基礎上進行操作，通過實際操作發(fā)現(xiàn)問題，及時解決問題。切實掌握O-P液采集技術，為以后順利完成重大動物疫病防控過程中的樣品采集工作打下基礎。O-P液采集前需要掌握的知識有保存液的配制，采樣工具準備、采集方法、采集時注意事項及采集后樣品的保存。

（一）O-P液的采取

1. 配置試劑。

（1）所需試劑的配制10.1 mol/L PBS液：氯化鈉80 g，氯化鉀2.0 g，磷酸氫二鈉30.0 g，磷酸二氫鉀2.0 g，蒸餾水1000.0 ml；0.04 mol/L、pH7.4磷酸鹽緩沖液: 0.1 mol/L PBS液400ml， 蒸餾水600 ml。（2）所需試劑的配制0.5%水解乳蛋白/Earle’液:氯化鈉6.8 g，氯化鉀0.4 g，氯化鈣0.2 g，硫酸鎂0.2 g，磷酸二氫鈉0.14 g，葡萄糖1.0 g，10%酚紅2.0 g，水解乳蛋白5.0 g，加雙蒸餾水1 000.0ml。按配方稱取各成分并逐個溶解，最后加雙蒸餾水1 000 ml，過濾除菌，或69 kpa高壓蒸汽滅菌15 min，室溫或4℃保存。

2. 采樣所需器材。金屬探杯、滅菌廣口瓶（或20 ml大離心管）、采樣箱、記號筆、標簽、封口膜、一次性手套、口罩。

3. 采樣所需試劑。生理鹽水、0.2%檸檬酸或2%氫氧化鈉、細胞培養(yǎng)液（0.5%水解乳蛋白-Earle液）或磷酸鹽緩沖液（0.04 mol/l 、pH7.4）。

4. 樣品采集方法。采樣時動物呈站立保定，將探杯隨吞咽動作送入食道上部10～15 cm處，輕輕來回拉動2～3次，然后將探杯拉出。如采集的O-P液被反芻胃內(nèi)容物嚴重污染，要用生理鹽水或自來水沖洗口腔后重新采樣。

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5．樣品保存。將探杯采集到的4～6 ml O-P液倒入20 ml以上的滅菌玻璃容器或離心管中， 容器中應事先加有4～6 ml細胞培養(yǎng)液（0.5%水解乳蛋白-Earle液）或磷酸鹽緩沖液（0.04 mol/L、pH7.4），加蓋密封后充分搖勻，貼上防水標簽，并寫明樣品編號、采集地點、動物種類、時間等，盡快放入裝有冰塊的冷藏箱內(nèi)，然后轉往-20℃冰箱凍存。通過病原檢測，做出追溯性診斷。

6．樣品采集時注意事項。

（1）動物站立保定，充分保定后方可采樣品，防止刮傷動物食道。

（2）被檢動物在采樣前禁食（可飲少量水）12 h，以免胃內(nèi)容物反流污染O-P液。

（3）采樣探杯在使用前需要在0.2%檸檬酸或1%～2%氫氧化鈉溶液的塑料桶中浸泡5 min，再用與動物體溫一致的清水沖洗探杯后使用。

（4）每采完一頭動物，探杯要重新進行消毒并充分沖洗。防止相互產(chǎn)生感染。

（二）采樣人員的防護注意事項

1．要使用合格的防護用品（合格的醫(yī)用防護用品）。

2．要反復不斷的對工作人員進行安全防護技術培訓，提高安全防護意識，養(yǎng)成良好的防護習慣。

3．要定期對工作人員進行健康體檢，早發(fā)現(xiàn)，早治療，做到防患于未然，減少感染幾率。

4．從工作人員進入現(xiàn)場抓牛、采樣、登記、運送樣品等一系列操作及監(jiān)測陽性畜的隔離、集中，陽性畜的運送，等過程要無害化處理。

5．穿戴防護用品。穿戴個人防護用品要按實驗室的要求、順序進行。穿戴順序首先戴口罩、防護眼鏡、戴防護帽、第一層手套，然后穿防護服或工作服，最后穿鞋套或膠鞋，戴第二層手套并將手套套在防護服袖口外面。卸載順序，摘下外層手套、摘下防護眼鏡、脫掉防護服、摘掉防護帽、脫掉鞋套或膠鞋、摘下口罩、摘下內(nèi)層手套。防護服、口罩、防護眼罩、防護帽、腳套、手套（兩層）等一次性防護用品使用后要集中銷毀，可以重復使用的要經(jīng)過滅菌后再使用。

6．避免手套的觸摸“污染”，工作中戴手套的手避免觸摸鼻子、面部，揉眼睛。

7．嚴禁在工作場地吃東西，抽煙，喝水，化妝，打手機等，與工作無關的操作。

8．接觸所有可能污染的東西時，一定要戴手套。