北京市醫(yī)療器械檢驗所（0）李正

北京市藥品監(jiān)督管理局醫(yī)療器械技術(shù)審評中心（100061）趙陽2 孫嶸3

高密度脂蛋白膽固醇測定試劑（盒）產(chǎn)品技術(shù)審評規(guī)范是北京市藥品監(jiān)督管理局醫(yī)療器械技術(shù)審評中心2013年制定的一項技術(shù)審評規(guī)范，其作用在于指導(dǎo)北京地區(qū)體外診斷試劑注冊申報人的申報工作，同時規(guī)范技術(shù)審評工作。目前，該規(guī)范已在北京市食品藥品監(jiān)督管理局網(wǎng)站上公開征求意見，并將于年內(nèi)正式發(fā)布。

高密度脂蛋白膽固醇測定試劑（盒）產(chǎn)品技術(shù)審評規(guī)范是心腦血管相關(guān)生物指標(biāo)系列技術(shù)審評規(guī)范制定工作的組成之一，該系列技術(shù)審評規(guī)范是我中心參與的國家863課題項目——心腦血管慢性損傷及急救指標(biāo)等體外診斷試劑研制課題的子課題，主要目的是建立心腦血管損傷相關(guān)診斷試劑的質(zhì)量評價標(biāo)準(zhǔn)，用以指導(dǎo)該類試劑的研制和評價工作。

心腦血管疾病是全球性的重大公共衛(wèi)生問題，每年約有1700萬人死于心腦血管疾病。在我國，隨著人民生活水平的逐年提高，心腦血管疾病的發(fā)病率也明顯升高，嚴(yán)重威脅人們的生命健康。高密度脂蛋白膽固醇（HDL）由載脂蛋白、磷脂、膽固醇和少量脂肪酸組成，亦稱為a1脂蛋白。它是冠心病的保護(hù)因子，俗稱“血管清道夫”，有抵御斑塊形成的作用，是一種抗動脈粥樣硬化的血漿脂蛋白，其含量與動脈管腔狹窄程度呈負(fù)相關(guān)。對高密度脂蛋白膽固醇的檢測，有助于判別高脂蛋白血癥，異常增高可見于原發(fā)性高HDL血癥，降低多見于心、腦血管病，肝炎，肝硬化等[1]。截止2013年11月，全國共有有效注冊證約170個（含國產(chǎn)、進(jìn)口）。根據(jù)前期調(diào)研發(fā)現(xiàn)，該產(chǎn)品名稱多樣、性能及技術(shù)指標(biāo)不統(tǒng)一，缺乏統(tǒng)一的評價標(biāo)準(zhǔn)，為了規(guī)范該產(chǎn)品的注冊申報及技術(shù)審評工作，特制定本規(guī)范。下面就規(guī)范中的重點問題進(jìn)行簡要概述。

1 適用范圍

該規(guī)范適用于采用分光光度法原理，利用全自動、半自動儀器或分光光度計，在醫(yī)學(xué)實驗室進(jìn)行高密度脂蛋白膽固醇定量檢驗所使用的臨床化學(xué)體外診斷試劑（盒）。干式高密度脂蛋白膽固醇測定試劑（盒）產(chǎn)品不在本文討論范圍之內(nèi)。

2 試劑盒命名、組成及用途

2.1 試劑盒命名 試劑（盒）名稱由三部分組成：第一部分 被測物名稱：高密度脂蛋白膽固醇；第二部分 用途：測定試劑（盒）；第三部分 方法或原理：如直接法-選擇抑制法。

規(guī)范制定之前產(chǎn)品申報名稱方法學(xué)不統(tǒng)一，如有高密度脂蛋白膽固醇試劑盒（一步法）、高密度脂蛋白膽固醇試劑盒（兩步法），現(xiàn)根據(jù)《臨床化學(xué)體外診斷試劑（盒）命名》行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)報批稿對產(chǎn)品名稱進(jìn)行了統(tǒng)一規(guī)范。

2.2 反應(yīng)原理 使用直接法對人血清或血漿中的高密度脂蛋白膽固醇進(jìn)行定量檢測的試劑（盒）。如直接法-選擇抑制法：血清中乳糜微粒（CM）、低密度脂蛋白（LDL）及極低密度脂蛋白（VLDL）在多聚陰離子及反應(yīng)抑制劑作用下表面被遮蔽。HDL-C與表面活性劑、反應(yīng)促進(jìn)劑在膽固醇酶試劑的作用下參與Trinder反應(yīng)而顯色，吸光度與標(biāo)本中HDL-C濃度成正比。

2.3 產(chǎn)品的預(yù)期用途 本試劑（盒）用于體外定量測定人血清或血漿中的高密度脂蛋白膽固醇的含量。

3 產(chǎn)品的主要技術(shù)指標(biāo)

本產(chǎn)品的性能指標(biāo)主要參照GB/T26124-2011《臨床化學(xué)體外診斷試劑（盒）》、北京市食品藥品監(jiān)督管理局技術(shù)審評規(guī)范《臨床化學(xué)體外診斷試劑（盒）產(chǎn)品技術(shù)審評規(guī)范》及《高密度脂蛋白膽固醇測定試劑（盒）》行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)報批稿。

3.1 外觀 目測檢查，符合生產(chǎn)企業(yè)規(guī)定的正常外觀要求。

3.2 凈含量 用通用量具測量，液體試劑的凈含量應(yīng)不少于標(biāo)示值。

3.3 試劑空白吸光度 用試劑（盒）測試空白樣本，記錄試劑（盒）參數(shù)規(guī)定讀數(shù)點主波長下的吸光度值，試劑空白吸光度應(yīng)＜0.05。（注：空白樣本可以是純水樣本、生理鹽水、零校準(zhǔn)液等。）

3.4 分析靈敏度 用試劑（盒）測試已知濃度在（1.00～2.00）mmol/L的樣本，記錄在試劑（盒）規(guī)定參數(shù)下的吸光度差值。換算為1.00mmol/L的吸光度差值，測定1.00mmol/L樣本時，兩點終點法吸光度差值（ΔA）應(yīng)＞0.04；兩點速率法吸光度差值（ΔA/min）應(yīng)＞0.01。

3.5 線性范圍 用超出線性范圍上限的樣品和超出或等于線性范圍下限的樣品，混合成至少5個稀釋濃度（xi）。分別測試試劑盒，每個稀釋濃度測試3次，分別求出測定結(jié)果的均值（yi）。以稀釋濃度（xi）為自變量，以測定結(jié)果均值（yi）為因變量求出線性回歸方程。按公式計算線性回歸的相關(guān)系數(shù)（r）：

稀釋濃度（xi）代入求出線性回歸方程，計算yi的估計值及yi與估計值的相對偏差或絕對偏差。試劑盒至少在[0.20，2.50] mmol/L的線性范圍內(nèi)分析性能應(yīng)符合如下要求。

3.5.1 線性相關(guān)系數(shù)（r）應(yīng)不小于0.995。

3.5.2 [0.20，2.50]mmol/L區(qū)間內(nèi)，線性偏差應(yīng)不超過±0.10mmol/L或不超過±10%。

3.6 精密度

3.6.1 重復(fù)性 根據(jù)文獻(xiàn)[2]參考值范圍，對該產(chǎn)品檢測時用兩個水平的血清樣品或質(zhì)控樣品，濃度分別為（0.80±0.20）mmol/L和（1.50±0.50）mmol/L[3]，重復(fù)測試10次，分別計算測量值的平均值（）和標(biāo)準(zhǔn)差（s）。所得結(jié)果的變異系數(shù)（CV）應(yīng)不大于4%。

3.6.2 批間差 用（1.50±0.50）mmol/L的血清樣品或質(zhì)控樣品分別測試3個不同批號的試劑（盒），每個批號測試3次，分別計算每批3次測定的均值（i=1，2，3），按以下公式計算相對極差（R）：

3.7 準(zhǔn)確度 試劑（盒）測試可用于評價常規(guī)方法的有證參考物質(zhì)（CRM）或其他公認(rèn)的參考物質(zhì)進(jìn)行3次平行測定，計算測定結(jié)果的均值，以相對偏差來表示測定結(jié)果的不準(zhǔn)確度，按以下公式分別計算相對偏差B，如果3次結(jié)果的相對偏差應(yīng)不超過±10%，即判為合格。如果大于等于2次的結(jié)果不符合，即判為不合格。如果有1次結(jié)果不符合要求，則應(yīng)重新連續(xù)測試20次，并分別按照公式計算相對偏差，如果大于等于19次測試結(jié)果的相對偏差應(yīng)不超過±10%，即判為合格[4]。B%＝（M－T）/T×100%，式中：M為測試結(jié)果均值；T為標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)標(biāo)示值。［注：型式試驗時，可采用上述方法測試試劑（盒）的準(zhǔn)確度。出廠檢驗時，根據(jù)企業(yè)實際質(zhì)量控制情況，生產(chǎn)企業(yè)可以選擇以上檢驗方式，也可以使用具有溯源性的企業(yè)（工作）校準(zhǔn)品或正確度質(zhì)控物質(zhì)進(jìn)行準(zhǔn)確度實驗，但企業(yè)每年應(yīng)以型式檢驗的方式對產(chǎn)品的準(zhǔn)確度進(jìn)行驗證。］

3.8 穩(wěn)定性 效期穩(wěn)定性：試劑（盒）在規(guī)定的貯存條件下保存至有效期末，產(chǎn)品的性能應(yīng)至少符合試劑空白吸光度、分析靈敏度、線性、準(zhǔn)確度和重復(fù)性的要求。

3.9 校準(zhǔn)品和質(zhì)控品（如適用） 若試劑盒配套校準(zhǔn)品和質(zhì)控品，應(yīng)提供校準(zhǔn)品溯源性說明及質(zhì)控品定值說明。（注：校準(zhǔn)品溯源應(yīng)列出溯源圖，并描述不確定度的計算方法和限制范圍。質(zhì)控品定值應(yīng)采用不同實驗室賦值的方式。）

4 產(chǎn)品的臨床要求

試劑（盒）按照《體外診斷試劑注冊管理辦法》（試行）、《體外診斷試劑臨床研究技術(shù)指導(dǎo)原則》及《北京市第二類體外診斷試劑臨床試驗指導(dǎo)原則》進(jìn)行臨床試驗。執(zhí)行的基本原則至少包括以下幾個方面。

4.1 在兩家省級醫(yī)療衛(wèi)生單位完成臨床研究。

4.2 “已有同種批準(zhǔn)上市”的試劑（盒）應(yīng)與已批準(zhǔn)上市產(chǎn)品針對臨床樣本進(jìn)行比對試驗。

4.3 臨床樣本的要求：綜合不同地區(qū)人種、流行病學(xué)背景、病原微生物的特性等因素選擇研究單位，癥狀典型和非典型的，一般臨床研究的總樣本數(shù)至少為200例。

4.4 如果申報的試劑產(chǎn)品同時適用于血清、血漿樣本。血清（或血漿）的試驗例數(shù)按照《體外診斷試劑臨床研究技術(shù)指導(dǎo)原則》要求的例數(shù)進(jìn)行；同時，還要進(jìn)行血清、血漿檢驗結(jié)果一致性的比對。

4.5 異常樣本、正常樣本應(yīng)均勻分布，異常樣本量應(yīng)不少于80例。

5 試劑（盒）說明書、標(biāo)簽、包裝標(biāo)識

5.1 試劑（盒）說明書 試劑（盒）說明書應(yīng)當(dāng)符合《體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則》的要求，需要注意以下內(nèi)容。

5.1.1 產(chǎn)品名稱 通用名稱：如高密度脂蛋白膽固醇測定試劑盒（直接法－選擇抑制法）；商品名稱：與企業(yè)聲稱一致。英文名稱：high density lipoprotein cholesterol Assay Kit。

5.1.2 應(yīng)說明試劑（盒）的包裝規(guī)格 不得多于企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)中所列的包裝規(guī)格。

5.1.3 預(yù)期用途 本試劑（盒）用于體外定量測定人血清或血漿中的高密度脂蛋白膽固醇的含量。

5.1.4 臨床意義 高密度脂蛋白（HDL）具有抵御斑塊形成的作用，是一種抗動脈粥樣硬化的脂蛋白，它的含量與動脈管腔狹窄程度呈負(fù)相關(guān)[1]。（注：生產(chǎn)企業(yè)可根據(jù)自身產(chǎn)品情況編寫，如有新的臨床意義，應(yīng)提供相應(yīng)依據(jù)。）

5.1.5 檢驗原理 企業(yè)應(yīng)根據(jù)自身產(chǎn)品的方法學(xué)，簡要說明反應(yīng)原理或以化學(xué)方程式表達(dá)，內(nèi)容至少包括主要反應(yīng)物、主波長數(shù)以及酶促反應(yīng)等相關(guān)信息。

5.1.6 主要組成成分 對于產(chǎn)品中包含的試劑組分應(yīng)有名稱、數(shù)量、每一組分中的主要成分在反應(yīng)體系中的比例或濃度，如果對于正確的操作很重要，應(yīng)提供其生物學(xué)來源、活性及其他特性；對于試劑盒中含有校準(zhǔn)品、質(zhì)控品，說明主要組成成分及其生物學(xué)來源，注明校準(zhǔn)品的定值及其溯源性，注明質(zhì)控品的允許范圍。

5.1.7 應(yīng)說明貯存條件及有效期。

5.1.8 應(yīng)說明可適用儀器的名稱及型號。

5.1.9 應(yīng)說明對樣本的要求，包括樣本采集過程中的注意事項，為保證樣本各組分穩(wěn)定所必需的抗凝劑或保護(hù)劑，已知的干擾物、能夠保證樣本穩(wěn)定的貯存、處理和運(yùn)輸?shù)姆椒ā?/p>

5.1.10 說明 應(yīng)說明檢驗方法，至少包括試劑配制、試驗條件、校準(zhǔn)程序、校準(zhǔn)間隔、質(zhì)量控制程序、試驗結(jié)果的計算。

5.1.11 應(yīng)有參考值范圍，并簡要說明確定的依據(jù)，如健康成年男性：1.16～1.42mmol/L；健康成年女性：1.29～1.55mmol/L。參考值范圍參考《全國臨床檢驗操作規(guī)程》（第3版），并經(jīng)過對120例臨床樣本驗證獲得，并注明各臨床實驗室應(yīng)建立自己的參考范圍區(qū)間。

5.1.12 應(yīng)有檢驗結(jié)果的解釋，說明可能對試驗結(jié)果產(chǎn)生影響的因素。

5.1.13 應(yīng)說明檢驗方法的局限性。說明該檢驗方法由于哪些原因會使測量結(jié)果產(chǎn)生偏離，并給出含有各干擾物質(zhì)的最大量。如血紅蛋白、膽紅素、甘油三酯會干擾檢測結(jié)果。若超出線性范圍可稀釋后測定，應(yīng)明確最大稀釋比例。

5.1.14 應(yīng)說明產(chǎn)品性能指標(biāo)，并符合注冊產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)的要求。

5.1.15 應(yīng)說明必要的注意事項，如本品僅用于體外診斷；應(yīng)該嚴(yán)格按照樣本要求進(jìn)行操作，若該產(chǎn)品含有人源或動物源的物質(zhì)時，應(yīng)給出具有潛在感染性的警告說明等[2]。

5.1.16 注明引用的參考文獻(xiàn)。

5.1.17 注明生產(chǎn)企業(yè)，包括企業(yè)名稱、生產(chǎn)/注冊地址、聯(lián)系方式。

5.1.18 注明醫(yī)療器械生產(chǎn)企業(yè)許可證編號。

5.1.19 注明醫(yī)療器械注冊證書編號。

5.1.20 注明產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)編號。

5.1.21 注明說明書批準(zhǔn)日期及修訂日期。

5.2 外包裝標(biāo)簽

5.2.1 生產(chǎn)企業(yè)名稱和地址。

5.2.2 試劑（盒）名稱。

5.2.3 批號：如試劑（盒）包含不同批號的組件時，外包裝的批號應(yīng)該能夠保證每個組件的批號可從生產(chǎn)企業(yè)的生產(chǎn)記錄中溯源。

5.2.4 規(guī)格：應(yīng)包含體積或復(fù)溶后的體積。

5.2.5 預(yù)期用途：如試劑（盒）名稱不能反映試劑（盒）的預(yù)期用途，應(yīng)提供簡要的預(yù)期用途說明。

5.2.6 體外診斷用途。

5.2.7 儲存和處置條件。應(yīng)提供在未開封狀態(tài)下可保證試劑、校準(zhǔn)品和質(zhì)控物質(zhì)的穩(wěn)定狀態(tài)的必要儲存條件；應(yīng)規(guī)定影響穩(wěn)定性的其他條件（如適用）；應(yīng)規(guī)定產(chǎn)品處置時所采取的所有其他特殊措施（如適用）。

5.2.8 失效期。應(yīng)明示在規(guī)定儲存條件下的失效期；失效期應(yīng)以年、月，適當(dāng)時以日表示；如僅給出年月，失效期應(yīng)為指定月的最后一天；外包裝標(biāo)簽上明示的失效期應(yīng)為最早到期組件的失效期。

5.2.9 警告和預(yù)防措施。如體外診斷試劑（盒）被認(rèn)為有危險性（如化學(xué)，放射性或生物危害性），外包裝應(yīng)標(biāo)示有適當(dāng)?shù)木疚ｋU的文字或符號說明，YY/T 0316的要求適用；對于化學(xué)危害，如試劑（盒）沒有隨帶含有適當(dāng)?shù)奈ｋU和安全性說明的使用說明，則應(yīng)在外包裝的標(biāo)簽上進(jìn)行說明[2]。

5.3 初始包裝標(biāo)簽 如初始包裝同時也是外包裝，規(guī)定對外包裝標(biāo)簽的要求也適用。初始包裝標(biāo)簽上應(yīng)提供如下信息：小標(biāo)簽規(guī)定。如瓶標(biāo)簽上可利用的空間太小以致于不能包括下述所需全部信息，則5.2.5、5.2.6和5.2.7項的信息可省略或刪除。①生產(chǎn)企業(yè)名稱或等同的商標(biāo)或標(biāo)志。②產(chǎn)品名稱。③批號。④規(guī)格。如質(zhì)量，體積，復(fù)溶后的體積。⑤體外診斷用途。⑥儲存和處置條件。⑦失效期。⑧警告和預(yù)防措施。

6 其他相關(guān)要求

6.1 注冊單元劃分的原則 試劑（盒）的注冊單元應(yīng)為單一試劑（盒），一個注冊單元可以包括不同的包裝規(guī)格。

6.2 出廠檢驗原則 每批試劑（盒）出廠檢驗至少進(jìn)行以下幾項內(nèi)容：外觀、裝量、試劑空白吸光度、準(zhǔn)確度、批內(nèi)重復(fù)性。

7 結(jié)語

本規(guī)范主要依據(jù)《醫(yī)療器械監(jiān)督管理條例》、《體外診斷試劑注冊管理辦法》（試行）、《體外診斷試劑臨床研究技術(shù)指導(dǎo)原則》、《體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則》進(jìn)行編寫。產(chǎn)品的主要技術(shù)指標(biāo)參考了GB/T 26124-2011《臨床化學(xué)體外診斷試劑（盒）》及《高密度脂蛋白膽固醇》行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)報批稿，在規(guī)范的制定過程中征求了如北京醫(yī)院、安貞醫(yī)院、煤炭總醫(yī)院等眾多臨床檢驗領(lǐng)域的專家意見，還征求了包括北京九強(qiáng)、利德曼、中生北控等生產(chǎn)企業(yè)的意見。

本文所介紹的規(guī)范已經(jīng)用于指導(dǎo)和規(guī)范北京市高密度脂蛋白膽固醇產(chǎn)品的技術(shù)審評工作，幫助審評人員更深入地理解和掌握該類產(chǎn)品的反應(yīng)原理、性能指標(biāo)、包裝標(biāo)識等內(nèi)容，把握技術(shù)審評工作的基本要求和尺度，對產(chǎn)品安全性、有效性做出更全面的系統(tǒng)評價。同時，規(guī)范的實施也更有利于指導(dǎo)生產(chǎn)企業(yè)的注冊申報工作，促進(jìn)產(chǎn)品安全有效上市。