梁勇剛，石 靜，焦向英，王明亮，宋彬妤，王登妮

糖尿病是一組以高血糖為特征的代謝性疾病。高血糖則是由于胰島β細胞受損、胰島素絕對或相對不足引起［1］。糖尿病時長期存在的高血糖，導致各種組織，特別是眼、腎、心、血管、神經的慢性損害、功能障礙。因此，不斷提高對本病的早期診斷及進一步開展糖尿病基礎和臨床研究，顯得極為重要。穿心蓮為常用中藥，具有清熱解毒、涼血消腫的功效。臨床上主要用于上呼吸道感染、急性菌痢、胃腸炎、感冒發(fā)熱、抗腫瘤及抗高血壓等方面的治療［2］，但對降血糖作用報道甚少。本實驗通過建立糖尿病大鼠模型，初步評價穿心蓮內酯對糖尿病大鼠血糖、胰腺胰島素樣表皮生長因子（IGF-1）蛋白表達的影響，進而為后續(xù)研究其可能機制奠定基礎。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 清潔級健康雄性大鼠60只，體重（200±50）g，購自昆明醫(yī)科大學實驗動物中心。

1.2 藥品與主要儀器 穿心蓮內酯注射液（哈藥集團三精藥業(yè)有限公司，批號20130309）；鏈脲佐菌素（STZ）（Merck公司，批號582302）；三諾安穩(wěn)血糖儀和試紙條（長沙三諾生物傳感技術股份有限公司）；IGF-1兔抗大鼠多克隆抗體（美國Santa Cruz，批號SC689）；SV-002兩步法免疫組化檢測試劑盒、DAB顯色試劑盒（北京中杉金橋生物技術有限公司）。

1.3 方法

1.3.1 建立糖尿病大鼠模型 將60只大鼠適應性飼養(yǎng)1周后禁食24 h斷尾采血測空腹血糖，隨機選10只作為正常對照組，正常對照組注射STZ的稀釋溶劑。其余50只大鼠注射1%STZ 50 mg／kg，7 d后禁食24 h測空腹血糖，血糖＞16.7 mmol／L者視為模型成立（每組至少10只）。

1.3.2 分組與用藥 選成模大鼠36只，隨機分為糖尿病模型對照組、穿心蓮內酯低劑量組［100 mg／（kg·d）］、高劑量組［200 mg／（kg·d）］3組，每組12只。按照上述劑量分別給低、高劑量組注射穿心蓮注射液，正常對照組和糖尿病模型對照組給予等體積的生理鹽水。連續(xù)給藥2周后禁食24 h，斷尾取血測空腹血糖。

1.3.3 HE染色觀察大鼠胰腺形態(tài)變化 斷尾檢測各組大鼠空腹血糖后，常規(guī)麻醉大鼠，取出胰腺組織，用4%多聚甲醛固定24 h制成蠟塊切片，切片常規(guī)脫蠟，蘇木精染細胞核，伊紅染細胞質，梯度酒精脫水，二甲苯透明后中性樹膠封片，鏡下觀察各組大鼠胰腺形態(tài)。

1.3.4 免疫組織化學法檢測IGF-1蛋白表達 取大鼠胰腺石蠟切片脫蠟至水，抗原修復，3%H2O2去離子水封閉，PBS洗滌，抗原修復、封閉后滴加一抗、二抗、DAB顯色，自來水中止，蘇木素復染，脫水，透明，樹膠封片。

1.4 統計學處理 采用SPSS11.5統計分析軟件進行數據處理。計量資料用均數±標準差（x±s）表示，組間比較采用單因素方差分析，P＜0．05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 穿心蓮內酯對大鼠血糖的影響 模型組與正常對照組比較，大鼠空腹血糖水平明顯升高（P＜0．05）；給藥2周后高、低劑量組與模型對照組比較，血糖明顯降低（P＜0．05），且量效關系明顯。詳見表1。

表1 穿心蓮內酯注射液對糖尿病大鼠空腹血糖的影響±s）

表1 穿心蓮內酯注射液對糖尿病大鼠空腹血糖的影響±s）

組別 n 給藥前（mmol／L） 給藥后（mmol／L）正常對照組10 3.54±0.03 3.67±0.05模型對照組 12 3.68±0.06 25.67±3.551）低劑量組 12 4.06±0.05 14.56±2.341）2）高劑量組 12 3.98±0.08 8.37±1.561）2）與正常對照組比較，1）P＜0．05；與模型對照組比較，2）P＜0．05

2.2 穿心蓮內酯對糖尿病大鼠胰腺形態(tài)的影響 正常對照組大鼠胰腺由胰腺小葉組成，胰腺小葉主要由腺泡構成，腺泡內分布大量大小不等的胰島。胰島細胞呈圓形或類圓形，細胞質豐富，細胞核居中，內有大量分泌顆粒。模型對照組大鼠胰島明顯減少，胰島細胞形態(tài)不規(guī)則，細胞核體積增大，有的細胞核消失。與模型組比較，給藥后胰島明顯增多，細胞質變得豐富，形態(tài)變得規(guī)則。

2.3 穿心蓮內酯對糖尿病大鼠胰腺IGF-1蛋白表達的影響免疫組化結果顯示，IGF-1蛋白主要在正常胰島細胞胞漿表達，胞漿內出現棕黃色顆粒。正常對照組大鼠胰腺IGF-1蛋白高表達。與正常對照組相比較，模型對照組即糖尿病大鼠胰腺IGF-1蛋白表達降低。與模型對照組比較，用藥后高劑量組糖尿病大鼠胰腺IGF-1蛋白表達增加，其表達強度介于正常對照組和模型對照組之間。

3 討 論

胰島素樣生長因子又稱為類胰島素生長因子，是由70個氨基酸組成的小分子多肽，在結構上與胰島素有高度的同源性，除了介導生長激素的作用外，對代謝有著類胰島素樣作用。IGF-1由肝、腎、胰、胸腺、睪丸等多種器官合成和分泌［3］。

研究發(fā)現，IGF-1可以改變糖代謝和脂代謝。糖尿病患者普遍存在IGF-1水平的降低［4］。本研究發(fā)現，用穿心蓮內酯注射液后，糖尿病大鼠血糖明顯下降。正常對照組大鼠胰腺組織均有IGF-1蛋白表達。糖尿病模型對照組大鼠胰腺IGF-1蛋白表達降低。穿心蓮內酯注射液高劑量組大鼠胰腺IGF-1蛋白表達介于前二者之間。用藥后糖尿病大鼠血糖降低、胰腺IGF-1蛋白表達增加，表明穿心蓮內酯注射液對糖尿病有一定治療作用。大鼠胰腺HE染色結果表明與模型組比較，給藥后胰島明顯增多，細胞質變得豐富，形態(tài)變得規(guī)則。這一結果也證實了穿心蓮內酯注射液對大鼠糖尿病有一定的治療作用。這些現象可能是由于長期高血糖引起肝臟生長激素抵抗，使生長激素促進IGF-1合成的作用喪失；高血糖及胰島素缺乏本身也可直接抑制IGF-1的合成［5］造成的。

［1］ 王璐璐，逢曙光，黃仙萍，等.辛伐他汀對鏈脲佐菌素誘導2型糖尿病大鼠血糖的影響［J］.中山大學學報（醫(yī)學科學版），2013，34（4）：102-105.

［2］ 李榮，肖順漢.穿心蓮的藥理作用研究進展［J］.四川生理科學雜志，2008，3（3）：131-133.

［3］ 羅曉敏，鄒海燕.IGF-1抑制妊娠合并糖尿病誘導的鼠胚胎細胞凋亡［J］.生物化學與生物物理進展，2009，36（6）：121-126.

［4］ Han HJ，Park SH.Alteration of the gene and protein levels of insulin-like growth factors in streptozotocin-induced diabetic male rats［J］.J Vet Med Sci，2006，68（5）：413-419.

［5］ 劉波，林海，史紀文.細胞因子VEGF、IGF-1與2型糖尿病視網膜病變的相關性研究［J］.中國實驗診斷學，2012，16（7）：89-94.