劉 燕 柳華平 杜紅萍 劉亞平

（重慶市石柱土家族自治縣人民醫(yī)院，重慶 石柱 409199）

高效價冷凝集素引起血型鑒定及交叉配血困難1例

劉 燕 柳華平 杜紅萍 劉亞平

（重慶市石柱土家族自治縣人民醫(yī)院，重慶 石柱 409199）

目的 探討在臨床輸血中疑難血型鑒定及配血困難的解決方案。方法 通過臨床病例分析，紅細胞ABO正反血型鑒定，冷凝集素效價檢測，直接抗人球蛋白試驗，吸收試驗，鹽水法、聚凝胺、微柱凝膠法交叉合血等血清學(xué)檢測方法來正確鑒定血型，成功配血。結(jié)果 高效價冷凝集素的存在容易給患者血型鑒定及交叉配血帶來困難。結(jié)論 在臨床輸血中，患者體內(nèi)冷凝集素效價增高引起ABO血型鑒定正反不符，干擾結(jié)果。對于疑難血型鑒定標(biāo)本，應(yīng)該有針對性的選擇不同的方法共同驗證，以防漏檢誤診，確保臨床輸血安全。

冷凝集素；血型鑒定；交叉配血

冷凝集素是一種自身抗體，正常人血清中的冷凝集素效價在4 ℃時一般不超過1∶16，但在某些病理情況下，冷凝集素的效價可異常增高而導(dǎo)致血型鑒定及交叉配血困難，影響臨床輸血治療的及時進行?，F(xiàn)將我院收治的1例含高效價冷凝集素患者的血型鑒定及交叉配血過程報道如下。

1 臨床資料

患者男性，82歲，農(nóng)民，漢族，既往無輸血史。2013年1月12日因反復(fù)咳嗽、咳痰3年，喘累、氣促2+個月，加重3 d入我院內(nèi)科治療。隨后診斷為左肺肺癌、重度貧血的可能性大。實驗室血常規(guī)檢查見HB：45 g/L，RBC：1.4×1012/L，申請懸浮紅細胞2 U。檢查血型時發(fā)現(xiàn)正反定型不一致，正定型為AB型，反定型與A細胞、B細胞、O細胞均凝集，正反定型不符，肉眼觀察血液標(biāo)本凝固成果凍狀。實驗室技術(shù)員到患者床旁做血型鑒定，血液離體后迅速凝集成團，不能確定血型。由于是老年患者，綜合臨床癥狀分析，懷疑為冷凝集素或其他抗體干擾所致。經(jīng)進一步實驗檢測，證實為AB型，正反定型不一致正是由于其自身含有高效價冷凝集素所致。用患者的紅細胞與自身血清置4℃吸收后進行配血試驗，聚凝胺法及微柱凝膠法配血均相合。

2 血型血清學(xué)檢查

2.1 試劑與儀器

抗A、抗B單克隆血清(河北醫(yī)科大生物醫(yī)學(xué)中心，批號：20120904)；反定型試劑紅細胞：自制，凝聚胺試劑(合肥天一生物技術(shù)研究所，批號：20111018)；抗人球蛋白交叉配血卡(長春博訊，批號：20120806)；TDZ4-WS離心機、FYQ型免疫微柱孵育器、TD-3A型血型血清學(xué)離心機(長春博研)。37 ℃水浴箱。

2.2 血型鑒定

試管法，取干燥潔凈的試管三支，分別加入抗A、抗B、抗D血清各兩滴，再分別加入患者3%紅細胞懸液一滴，混合；另取干燥清潔的試管3支，各加入患者血清2滴，再分別加入A、B、O型3%紅細胞懸液1滴，混合；另取一只試管，加入患者血清2滴及患者紅細胞懸液1滴，混合。1000 r/min，1 min。鏡下觀察記錄結(jié)果。將患者正反定型試管均放入37 ℃水浴箱中10 min，取出輕輕混勻觀察記錄結(jié)果。

2.3 冷凝集素效價測定[1]

將未除去冷凝集素的患者血清經(jīng)連續(xù)等倍稀釋（共17管），分別加入50%自身洗滌紅細胞懸液，混勻，置于4 ℃反應(yīng)2 h，1000 r/min，離心1 min，記錄結(jié)果，然后置于37 ℃ 15 min后，1000 r/min，離心1 min，記錄結(jié)果。

2.4 直接抗人球蛋白試驗

按抗人球蛋白檢測卡說明書標(biāo)準(zhǔn)操作。

2.5 吸收冷凝集素試驗[2]

用O型壓積紅細胞1.5 mL經(jīng)37 ℃生理鹽水反復(fù)洗滌5次，取1體積洗滌O型壓積紅細胞與2體積患者血清，混合后立即置4 ℃冰箱吸收1 h，其間搖動數(shù)次，使其充分吸收，立即分離血清，備用。

2.6 交叉配血實驗

利用吸收處理后的患者血清及經(jīng)37 ℃生理鹽水洗滌8次的紅細胞懸液與AB型獻血者（獻血者編號0040412022842）在室溫(20 ℃)聚凝胺配血中，主側(cè)出現(xiàn)凝集，次側(cè)無凝集，放37 ℃ 10 min，取出試管輕輕混合觀察結(jié)果，主側(cè)凝集消失，配血相合。在微柱凝膠配血法中，主側(cè)和次側(cè)均相合。

3 結(jié) 果

3.1 ABO血型鑒定結(jié)果見表1。

3.2 用未除去冷凝集素患者血清與自身洗滌紅細胞懸液測定在不同溫度的效價，見表2。

3.3 直接抗人球蛋白試驗：陰性。

3.4 用處理后的患者血清，紅細胞做凝聚胺交叉配血試驗，主次側(cè)均無凝聚，無溶血。在微柱凝膠配血法中，主側(cè)和次側(cè)均相合。

4 討 論

高效價冷凝集素是患者體內(nèi)產(chǎn)生了抗自身紅細胞的嗜異性冷抗體。此抗體為IgM類，在體外4 ℃或室溫條件下可與自身紅細胞或ABO系統(tǒng)其他各個血型的紅細胞發(fā)生非特異性凝集反應(yīng)，不規(guī)則抗體可呈強陽性。一般健康人血清中含少量冷凝集素，效價很低，一般在1∶16以下。這種抗體在32 ℃以下(0～4 ℃)時活性最強，能與紅細胞結(jié)合，當(dāng)溫度升高時凝集的紅細胞呈可逆性完全散開，可迅速從紅細胞表面解離，因此不引起非特異性凝集，但在某些病理情況下，如自身免疫性貧血，淋巴系統(tǒng)惡性腫瘤、支原體肺炎、EB病毒感染及某些腫瘤等會表達高效價[3]。本例患者系癌癥病患，體內(nèi)冷凝集素高效價表達，致使血液標(biāo)本在室溫下離體后馬上發(fā)生凝集，無法正確鑒定血型，成功配血。經(jīng)過一系列的有針對性的血清學(xué)試驗，證實患者血型為AB型，高效價冷凝集素是引起血型鑒定困難的原因。

表1 高效價冷凝集素患者血型鑒定

表2 患者血清與自身洗滌紅細胞在不同溫度的效價

在臨床輸血中，安全輸血是根本宗旨。遇到疑難血型鑒定及交叉配血，應(yīng)該有針對性的選擇不同的血清學(xué)方法，如經(jīng)典的抗球蛋白法及卡式配血系統(tǒng)，凝聚胺法配血，最好是幾種方法聯(lián)合使用，共同驗證，以免漏檢。以上方法不能確診時，再輔以吸收，放散試驗，有條件的實驗室甚至可以進行血型物質(zhì)測定和家族血型調(diào)查，最終可以解決輸血難題。通過一系列的試驗，不斷分析總結(jié)經(jīng)驗，也能不斷提高輸血技術(shù)員的臨床實踐能力。總之臨床輸血關(guān)系到人的生命安危，一定要小心、仔細、嚴謹，確保輸血安全。

[1] 肖星甫.輸血技術(shù)手冊[M].成都:四川科學(xué)技術(shù)出版社,1992: 147-155.

[2] 龐桂芝,張趁利,姜燕娟.高效價冷凝集素配血不合1例[J].中華現(xiàn)代臨床醫(yī)學(xué)雜志,2005,3(12):1202-1203.

[3] 楊世明,張勇萍,潘曉莉.冷凝集素綜合征的血清學(xué)特征及檢測方法探討[J].細胞與分子免疫學(xué)雜志,2006,22(4):541-543.

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