朱立娜，陳士華，吳興泉

（河南工業(yè)大學(xué) 生物工程學(xué)院，河南 鄭州 450001）

0 引言

近年來，食品安全問題引起人們的廣泛關(guān)注，頻頻爆發(fā)的食品安全事件也使其成為亟需解決的問題.在食用植物油脂領(lǐng)域同樣存在安全問題，例如地溝油、摻偽摻劣油、食用調(diào)和油標(biāo)識(shí)混亂、轉(zhuǎn)基因油脂標(biāo)識(shí)等.在食用植物油脂生產(chǎn)消費(fèi)過程中出現(xiàn)的這些安全問題不僅對(duì)消費(fèi)者的身體健康造成威脅，同時(shí)也損害了消費(fèi)者的合法權(quán)益，破壞消費(fèi)者的消費(fèi)信心，影響了食用油市場(chǎng)的良性發(fā)展.

以DNA 為靶標(biāo)的分子生物學(xué)檢測(cè)技術(shù)可應(yīng)用于食用植物油脂的純度測(cè)定、摻偽檢測(cè)、轉(zhuǎn)基因檢測(cè)等，與以脂肪酸、特定代謝物等為靶標(biāo)的其他檢測(cè)方法相比，分子生物學(xué)檢測(cè)技術(shù)更加穩(wěn)定、可靠.因?yàn)橹舅?、特定代謝物等會(huì)隨著油料作物的生長(zhǎng)環(huán)境、栽培條件等因素的改變而發(fā)生變化，其含量并不恒定，以此為靶標(biāo)會(huì)給檢測(cè)結(jié)果帶來偏差.而DNA 作為生物遺傳物質(zhì)其含量穩(wěn)定不會(huì)受到外界環(huán)境條件的影響，以此為靶標(biāo)的檢測(cè)方法更具有穩(wěn)定性.

DNA 的富集與有效提取是分子生物學(xué)檢測(cè)技術(shù)在食用植物油脂檢測(cè)中應(yīng)用的前提.由于DNA在食用植物油脂的加工過程中受破壞嚴(yán)重，且含量很低，因此提取難度很大.目前，關(guān)于食用油DNA 的提取方法，已有很多報(bào)道［1-4］，但大多為壓榨油脂.與精煉油有所不同，初級(jí)壓榨油不經(jīng)過特殊的加工工藝處理，DNA 保存相對(duì)完整，殘留量相對(duì)較多，因此DNA 提取較精煉油更容易.如Pauli等[5]于粗制的大豆油中提取到DNA，Matteo Busconi等[6]從壓榨橄欖油中提取到DNA 并利用其對(duì)生產(chǎn)品種進(jìn)行了鑒定，覃文等[7]早在2002 年就從市售的食用油中提取到了DNA 并檢測(cè)到了植物內(nèi)源基因.盡管應(yīng)用于植物油脂DNA 提取的方法已有較多報(bào)道，但目前尚未見到對(duì)植物油脂DNA 提取方法進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)、全面評(píng)述的文章.

將現(xiàn)有的油脂DNA 提取技術(shù)進(jìn)行比較，選擇更高效快速的提取技術(shù)以及對(duì)現(xiàn)有的提取技術(shù)進(jìn)行適當(dāng)?shù)膬?yōu)化以提高DNA 提取效果已成為當(dāng)前研究的重點(diǎn).筆者全面介紹了目前應(yīng)用于植物油脂DNA 提取的方法，并進(jìn)行了綜合評(píng)價(jià)，以期為開展深入研究提供參考.

1 植物油脂DNA 提取方法

1.1 十六烷基三乙基溴化銨（CTAB）法

1.1.1 CTAB 法原理

CTAB 法是油脂DNA 提取中應(yīng)用最為普遍的方法，CTAB 不僅可以裂解細(xì)胞，同時(shí)又能很好地去除多酚類、糖類等物質(zhì).CTAB 是一種陽離子去污劑，能夠與核酸形成復(fù)合物，該復(fù)合物在低鹽條件下溶解度降低而沉淀，在高鹽條件下解離，從而使DNA 與多糖等物質(zhì)分開，最后用乙醇沉淀DNA，除去CTAB，獲得純化DNA.

所用緩沖溶液為Tris-HCl（pH 8.0），緩沖溶液可提供一個(gè)緩沖環(huán)境防止核酸被破壞；EDTA 螯合Mg2+或Mn2+離子，抑制DNase 活性；NaCl 提供一個(gè)高鹽環(huán)境，使DNP 充分溶解于液相中；CTAB 可溶解細(xì)胞膜并結(jié)合核酸，使核酸便于分離.PVP（聚乙烯吡咯烷酮）能與多酚形成一種不溶的絡(luò)合物，也能與多糖結(jié)合，從而有效地去除多酚、多糖類物質(zhì)，降低DNA 的污染.

1.1.2 CTAB 法在植物油脂DNA 提取中的應(yīng)用

CTAB 提取法能夠有效地去除多糖及酚類物質(zhì)，更適用于提取富含酚類及糖類物質(zhì)的植物材料的DNA.為了縮短提取流程，提高提取質(zhì)量，更適合于植物油脂中DNA 的提取，研究人員對(duì)CTAB 法進(jìn)行了改良[8].通過向CTAB 提取緩沖液中加入PVP 和巰基乙醇，經(jīng)酚/三氯甲烷抽提，最后用異丙醇和醋酸銨沉淀油脂中的DNA，取得了不錯(cuò)的效果[9].Innocenzo Muzzalupo 等[4]利用改良CTAB 法從橄欖油中提取出了純度較高的DNA，其改良方法中添加了蛋白酶K，并且在緩沖液中加入2%的β-巰基乙醇，這樣可使蛋白質(zhì)充分降解，也可去除殘留的酚類物質(zhì)，保護(hù)DNA 的完整性，使其能夠成功應(yīng)用到后續(xù)的PCR 檢測(cè)技術(shù)當(dāng)中.Matteo Busconi 等[6]采用提高CTAB 濃度的方法，并使用三氯甲烷/辛醇代替三氯甲烷/異戊醇來抽提，提高了橄欖油中DNA 的提取效率.

1.1.3 CTAB 法的特點(diǎn)

CTAB 法操作相對(duì)于其他DNA 手提方法簡(jiǎn)單，且成本較低，所使用的試劑及儀器很容易操作和獲得，實(shí)驗(yàn)室普遍適用.但是此方法耗時(shí)較長(zhǎng)，容易在提取過程中對(duì)DNA 造成破壞及損失，而且提取過程中所用試劑部分有毒，例如：三氯甲烷、酚等，因此，在食用油DNA 提取方面，CTAB 法存在一定的缺陷，具有局限性.

1.2 十二烷基磺酸鈉（SDS）法

1.2.1 SDS 法原理

SDS 是一種陰離子去污劑，高溫條件下可以裂解細(xì)胞、使蛋白質(zhì)變性、染色體離析，同時(shí)可與多糖、蛋白質(zhì)等物質(zhì)形成復(fù)合物，使核酸釋放出來.通過降低溫度，提高鹽濃度，使SDS-蛋白質(zhì)復(fù)合物溶解度減小，以此來實(shí)現(xiàn)蛋白質(zhì)、多糖物質(zhì)的沉淀，進(jìn)而用酚/氯仿抽提上清液，乙醇沉淀DNA.

常規(guī)SDS 提取液由Tris-HCl、EDTA、NaCl、SDS和巰基乙醇配制而成.最初SDS 法主要應(yīng)用在植物DNA 的提取上，后來經(jīng)過改進(jìn)，現(xiàn)在其應(yīng)用范圍更廣，且DNA 的提取質(zhì)量和效率也在不斷提高.

1.2.2 SDS 方法在植物油脂DNA 提取中的應(yīng)用

依據(jù)植物油脂特殊的性質(zhì)及特點(diǎn)，對(duì)SDS 方法進(jìn)行改良，可以提取到質(zhì)量較高的DNA.Maja Hellebrand 等[10]應(yīng)用SDS 法從菜籽油中成功地提取到DNA，他們?cè)陬A(yù)處理過的菜籽油中加入SDS 緩沖液的同時(shí)加入蛋白酶K，經(jīng)酚/氯仿抽提后用乙醇沉淀DNA，取得了良好的效果.姚菲等[11]也運(yùn)用改良的SDS 法在茶籽油中成功提取到了茶籽DNA，在預(yù)熱的巰基乙醇和SDS 緩沖液中加入鉀鹽提高鹽濃度，以便使SDS-蛋白質(zhì)復(fù)合物溶解度更小，以此來沉淀蛋白質(zhì)、多糖等物質(zhì)，最后用氯仿/異戊醇抽提，乙醇漂洗、TE 溶解富集DNA.

1.2.3 SDS 法的特點(diǎn)

SDS 法操作相對(duì)溫和簡(jiǎn)單，也可以提取到較完整的DNA，但所提DNA 雜質(zhì)較多，質(zhì)量不高，也有報(bào)道稱CTAB 法所提DNA 的品質(zhì)要高于SDS 法[12-14].

1.3 高鹽低pH 法

1.3.1 高鹽低pH 法原理

高鹽低pH 法利用高鹽沉淀蛋白質(zhì)，低pH 介質(zhì)能夠有效防止細(xì)胞破碎及沉淀大量材料時(shí)的電離化作用及酚化合物的進(jìn)一步氧化，從而保證所提DNA 的質(zhì)量.

高鹽低pH 法的緩沖液通常由NaAC、EDTA、NaCl、PVP、SDS、β-巰基乙醇組成，pH 值為5.5.其酸性條件可避免多酚類物質(zhì)電離化及進(jìn)一步氧化，PVP 可結(jié)合酚類物質(zhì)防止DNA 褐化；高濃度Na+有利于SDS 與蛋白質(zhì)及多糖形成復(fù)合物，然后經(jīng)離心除去，從而徹底去除蛋白質(zhì)和多糖.DNA 存于上層水相，最后用異丙醇抽提去除殘留酚類、蛋白質(zhì)物質(zhì)，乙醇漂洗TE 溶解回收DNA.

1.3.2 改良的高鹽低pH 法

高鹽低pH 法所提的DNA 相對(duì)分子質(zhì)量較高，不但適用于PCR 反應(yīng)，且可用于RLFP 分析.姚菲等[11]在2012 年利用高鹽低pH 法從茶籽油中成功提取到了茶籽DNA.很多研究針對(duì)該方法進(jìn)行改良，通過改變提取緩沖液中β-硫基乙醇的終濃度，增加用酚、氯仿快速抽提的過程，獲得了良好的提取效果[15-16]，得到的DNA 可滿足酶切、PCR等分子生物學(xué)分析.

1.3.3 高鹽低pH 法的特點(diǎn)

高鹽低pH 法在DNA 提取中應(yīng)用也較廣泛，此方法所用的試劑僅有無機(jī)鹽和異丙醇，而醋酸鉀等又是常用的無機(jī)鹽試劑.而且高鹽低pH 法無需反復(fù)抽提，因此所需材料相對(duì)較少.但高鹽低pH 法無法在多糖物質(zhì)或者次級(jí)代謝產(chǎn)物含量高的組織中提取到高質(zhì)量的DNA，所提取的DNA 中蛋白質(zhì)污染嚴(yán)重、重復(fù)性也不好，因此其應(yīng)用也存在局限性.

1.4 異硫氰酸胍（GuSCN）法

1.4.1 異硫氰酸胍（GuSCN）法原理

異硫氰酸胍是一種蛋白質(zhì)變性劑，它可以迅速破壞細(xì)胞結(jié)構(gòu)，釋放核酸，高濃度的異硫氰酸胍溶液還會(huì)使核酸酶變性，防止核酸降解.異硫氰酸胍裂解液（GuSCN 5 mol/L，Tris-HCl 0.1 mol/L，EDTA 0.02 mol/L，pH 8.0）可裂解細(xì)胞，釋放核酸，Tris-HCl 提供緩沖環(huán)境，防止核酸被破壞，EDTA 結(jié)合二價(jià)金屬離子，抑制核酸酶活性.

1.4.2 異硫氰酸胍法在植物油脂DNA 提取中的應(yīng)用

異硫氰酸胍法不但適用于普通動(dòng)植物DNA 提取，還適用于經(jīng)過加工的食用油DNA 提取.Simona Pafundo 等[17]使用Nucleospin Plant 試劑盒（該試劑盒的裂解液中的主要成分之一為異硫氰酸胍）提取橄欖油中的DNA，并將提取的DNA 成功用于AFLP 分析.聞偉剛等[18]在2005 年運(yùn)用此方法從市售的大豆油中提取DNA，他們用異硫氰酸胍裂解液與大豆油混勻乳化，取水相，加蛋白質(zhì)沉淀劑離心沉淀蛋白質(zhì)，氯仿抽提，異丙醇去酚類雜質(zhì)，離心棄上清，乙醇漂洗收集DNA，但結(jié)果發(fā)現(xiàn)異硫氰酸胍裂解液與大豆油互溶，因此，其不能用于大豆油DNA 的提取.

1.5 試劑盒法

試劑盒法提取油脂DNA 已經(jīng)越來越普遍，也是操作最簡(jiǎn)便、最省時(shí)省力的方法.例如油類DNA提取試劑盒，核酸共沉劑法[19]等，特別是QIamp DNA stool kit（QIagen）、Gene Elute Plant Kit（Sigma）、Nucleospin Food 和Nucleospin Plant（Macherey Nagel）已經(jīng)獲得了很好的應(yīng)用效果.Wizard Genomic DNA Purification Kit（Promega 公司）試劑盒方法，其主要成分為異硫氰酸胍.金紅等[20]在2004 年采用DNA 提取試劑盒（中國(guó)農(nóng)科院生物技術(shù)研究所）提取大豆色拉油DNA，結(jié)果證明充分乳化、反復(fù)沉淀以富集小片段DNA、延長(zhǎng)醇沉淀時(shí)間等措施是從精煉食用油中提取DNA 的關(guān)鍵.通過采取上述措施，可有效地從大豆色拉油中提取到DNA，以此為模板可通過PCR 擴(kuò)增得到大豆特異內(nèi)源基因（Lectin 基因）.

1.6 其他方法

食用油DNA 提取方法中，除以上比較傳統(tǒng)的、應(yīng)用最為廣泛的幾種方法外，還有一些針對(duì)實(shí)驗(yàn)情況，綜合各種改進(jìn)的提取方法，也具有很好的提取效果.

1.6.1 離心柱法及手提法

離心柱法是將樹脂或硅膠膜固定在離心管中，在高鹽低pH 值條件下，DNA 選擇性吸附于離心柱內(nèi)的樹脂或膜上，通過漂洗、離心等步驟，去除蛋白和多糖雜質(zhì)，最后用低鹽高pH 值的洗脫緩沖液將DNA 從樹脂或硅膠膜上洗脫.Joana Costa 等[21]使用以離心柱法為原理的Nucleospin DNA 提取試劑盒從精煉油中提取到大豆DNA.

程紅梅等[22]在2007 年利用人工手提法和離心柱法提取精煉大豆油中的DNA，研究證明利用人工手提法從500 mL 大豆油中或利用離心柱法從10 mL 大豆油中均可提取獲得0.4 μg 高純度DNA.他們采用的手提法是將正己烷與油脂充分混勻乳化，沉淀離心取水相，硫酸銨沉淀過夜使蛋白質(zhì)鹽析.離心取沉淀，用酚和氯仿抽提，因DNA存在于上清液中，用乙醇漂洗上清液，富集回收DNA.

1.6.2 冷凍干燥法

姚菲等[11]利用冷凍干燥法從茶籽油中提取到茶籽DNA，他們將20 mL 茶籽油與20 mL 無菌水混勻，使DNA 充分溶于水相，取水相-80 ℃冷凍過夜，然后轉(zhuǎn)至真空干燥機(jī)干燥至水分完全蒸發(fā)，加入CTAB 緩沖液沖洗，與線性丙烯酰胺、NaAc、無水乙醇混勻沉淀DNA，線性丙烯酰胺作為擔(dān)體提高DNA 提取效率，棄上清液乙醇漂洗DNA，無菌水溶解收集DNA.

1.6.3 磁珠法

磁珠法的原理是將細(xì)胞中游離的核酸分子吸附到磁性顆粒表面，蛋白質(zhì)等雜質(zhì)留在溶液中.在磁場(chǎng)作用下，磁性顆粒與液體分開，回收顆粒（即磁珠-DNA 混合物），再用洗脫液洗脫即可以得到純凈的DNA.

利用磁珠法提取的DNA 質(zhì)量高、純度好，已經(jīng)被應(yīng)用于多種復(fù)雜及深加工食品的DNA 提取.Wu等[1]比較了Wizard 磁珠純化試劑盒和CTAB 法對(duì)大豆油DNA 的提取效率，發(fā)現(xiàn)磁珠法提取DNA 的lectin 基因擴(kuò)增效率更高.Catherine 等[23]對(duì)比Wizard 試劑盒磁珠、硅膠和羥基磷灰石3 種材料吸附提取橄欖油中的DNA，結(jié)果發(fā)現(xiàn)Wizard 磁珠試劑盒法對(duì)橄欖油DNA 提取效果最好，提取的DNA 可用于微衛(wèi)星分析.磁珠法提取的DNA 相對(duì)分子質(zhì)量高、純度好、質(zhì)量可靠，且不需要離心、操作簡(jiǎn)單、試劑簡(jiǎn)單，基本達(dá)到核酸自動(dòng)化提取的要求，也是未來核酸提取的發(fā)展方向.

1.6.4 擔(dān)體法

在食用油DNA提取過程中，加入適量的DNA或者RNA等物質(zhì)作為擔(dān)體，可以提高DNA的提取效率，且所加擔(dān)體一般要選擇與目的DNA物種關(guān)系較遠(yuǎn)的物種的DNA或者RNA.

覃文等[7]在用異丙醇沉淀油脂DNA 之前加入植物基因組DNA 作為擔(dān)體，獲得良好的提取效果.白立群等[24]在大豆油DNA 富集過程中，比較了以線性丙烯酰胺和鮭魚精DNA 為擔(dān)體的效果，發(fā)現(xiàn)前者富集的DNA 擴(kuò)增效率更高.Giménez 等[25]在提取橄欖油DNA 過程中，也使用了線性丙烯酰胺作為擔(dān)體，且提取效果顯著.王澎等[26]在提取大豆油中DNA 過程中，在用無水乙醇沉淀DNA 時(shí)加入少量東北大豆黑衣33 號(hào)DNA 作為擔(dān)體，不僅能夠提高大豆油中DNA 的得率，而且不會(huì)影響轉(zhuǎn)基因檢測(cè)的結(jié)果，從而為轉(zhuǎn)基因深加工產(chǎn)品檢測(cè)過程中的DNA 提取提供了新的手段.

2 植物油脂DNA 提取方法的綜合評(píng)價(jià)

應(yīng)用于植物油脂DNA 的提取方法很多，對(duì)這些方法的提取效果、成本、復(fù)雜度等方面進(jìn)行全面的綜合評(píng)價(jià)可為今后的研究工作提供指導(dǎo).姚菲等[11]對(duì)高鹽低pH 法、改良SDS 法、冷凍干燥法、試劑盒法、手提法進(jìn)行了對(duì)比分析，欒鳳俠等[27]比較了CTAB 法和離心柱法提取精煉大豆油DNA 的效果，結(jié)果表明離心柱法操作簡(jiǎn)單快速，提取的DNA質(zhì)量高，效果顯著優(yōu)于CTAB 法.Andreas Zimmermann 等[28]比較了SDS 法、離心柱法、CTAB 法等9種DNA 提取方法在提取大豆深加工產(chǎn)品中的效果，并從DNA 質(zhì)量和產(chǎn)量?jī)蓚€(gè)方面進(jìn)行評(píng)價(jià).他們發(fā)現(xiàn)，離心柱法提取的DNA 質(zhì)量高、易進(jìn)行PCR擴(kuò)增，但提取量相對(duì)較低；與之相比，CTAB、SDS 等方法雖然提取的DNA 質(zhì)量低，含有PCR 抑制劑，但其提取量卻較高.Angela Di Pinto 等[29]也發(fā)現(xiàn)，試劑盒中采用的磁珠法和離心柱法與CTAB 法和SDS 法相比，含有相對(duì)較少的污染物和PCR 抑制劑.對(duì)上述植物油脂DNA 提取方法進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)，結(jié)果見表1.

雖然CTAB 法和SDS 法提取的DNA 可以滿足后續(xù)試驗(yàn)要求，但其提取耗時(shí)、費(fèi)力，提取過程中DNA 損失較大，且所提DNA 質(zhì)量不高，有些提取試劑例如：酚、三氯甲烷有毒，損害操作者的身體健康.因此，其使用有一定的缺陷.磁珠法和離心柱法多被應(yīng)用于提取試劑盒，除去了三氯甲烷、酚等有毒試劑，操作安全可靠，且提取的DNA 質(zhì)量較好，用時(shí)較短、操作簡(jiǎn)便、但成本高.冷凍干燥法及乳化法操作步驟簡(jiǎn)單，提取過程中DNA 損失量少，富集程度較好.

表1 植物油脂DNA提取方法的綜合比較

［1］Wu Yajun，Chen Ying，Ge Yiqiang，et al.Detection of olive oil using the Evagreen realtime PCR method［J］.Eur Food Res Technol，2008，227:1117-1124.

［2］Rayda Ben Ayed，Naziha Grati-Kamoun，F(xiàn)abienne Moreau，et al.Comparative study of microsatellite profiles of DNA from oil and leaves of two Tunisian olive cultivars［J］.Eur Food Res Technol，2009，229:757-762.

［3］Innocenzo Muzzalupo，Massimiliano Pellegrino，Enzo Perri.Detection of DNA in virgin olive oils extracted from destoned fruits［J］.Eur Food Res Technol，2007，224:469-475.

［4］Innocenzo Muzzalupo，Enzo Perri.Recovery and characterisation of DNA from virgin olive oil［J］.Eur Food Res Technol，2002，214:528-531.

［5］Pauli U，Liniger M，Zimmermann A.Detection of DNA in soybean oil ［J］.Z Lebensm Unters Forsch A，1998，207:264-267.

［6］Matteo Busconi，Chiara Foroni，Massimiliano Co-rradi，et al.DNA extraction from olive oil and its use in the identification of the production cultivar［J］.Food Chemistry，2003，83:127-134.

［7］覃文，董潔，鄧?guó)欌彛?PCR 法定性檢測(cè)食用油脂中轉(zhuǎn)基因成分［J］.中國(guó)油脂，2002，27（2）：4-6.

［8］張海亮，吳亞君，陳銀基，等.食用油中DNA提取方法的研究進(jìn)展［J］.食品與發(fā)酵工業(yè)，2010（11）：128-132.

［9］王亞.食用油DNA 提取方法及轉(zhuǎn)基因成分檢測(cè)技術(shù)的研究［D］.合肥:安徽大學(xué)，2007.

［10］Hellebrand M，Nagy Marion，Morsel Jorg -Thomas.Determination of DNA traces in rapeseed oil［J］.Z Lebensm Unters Forsch A，1998，206:237-242.

［11］姚菲，周慧，吳蘇喜.茶籽油DNA 提取方法的比較［J］.糧油食品科技，2012，20（3）:17-19.

［12］易干軍，于曉英，霍合強(qiáng)，等.香蕉種質(zhì)資源的AFLP 鑒別與分類中DNA 模板的制備［J］.果樹學(xué)報(bào)，2001，18（6）:345-348.

［13］王彩虹，王倩，戴洪義，等.蘋果基因組AFLP分析的DNA 模板的制備及技術(shù)體系的建立［J］.山東農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào):自然科學(xué)版，2001，32（2）:197-200.

［14］周明芹.SDS 法和CTAB 法提取蠟梅DNA 質(zhì)量的比較［J］.長(zhǎng)江大學(xué)學(xué)報(bào):自然科學(xué)版，2009，6（3）:42-44.

［15］裴黎，?；坻?，涂政，等.改良高鹽低pH 方法提取陳舊大麻DNA 初探［J］.中國(guó)法醫(yī)學(xué)雜志，2009，24（3）：145.

［16］劉少林，靖深蓉，郭立平，等.用改進(jìn)的高鹽低pH 法分離和純化棉花葉綠體及葉綠體DNA［J］.棉花學(xué)報(bào)，1997，9（5）∶239-241.

［17］Simona Pafundo，Matteo Busconi，Caterina Agrimonti，et al.Storage-time effects on olive oil DNA assessed by Amplified Fragments Length Polymorphisms［J］.Food Chemistry，2010，123:787-793.

［18］聞偉剛，崔俊霞，趙秀玲.大豆油中轉(zhuǎn)基因成分的Nested PCR 和Semi-nested PCR 檢測(cè)方法研究［J］.生物技術(shù)通報(bào)，2005（6）:84-87.

［19］鄧?guó)欌?，覃芳芳，郭新東，等.食用大豆油中轉(zhuǎn)基因成分的檢測(cè)［J］.中國(guó)油脂，2007，32（8）:79-81.

［20］金紅，程奕，趙昕，等.大豆色拉油中轉(zhuǎn)基因成分檢測(cè)技術(shù)研究［J］.華北農(nóng)學(xué)報(bào)，2004，19（1）：24-27.

［21］Joana Costa，Isabel Mafra，Joana S Amaral，et al.Detection of genetically modified soybean DNA in refined vegetable oils［J］.Eur Food Res Technol，2010，230:915-923.

［22］程紅梅，彭于發(fā)，金蕪軍，等.一種快速、簡(jiǎn)便提取大豆油DNA 的方法及轉(zhuǎn)基因大豆油的檢測(cè)［J］.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)，2007，40（5）：1069-1072

［23］Breton C，Claux D，Metton I，et al.Comparative study of methods for DNA preparation from olive oil samples to identify cultivar SSR alleles in commercial samples:possible forensic applications［J］.J Agric Food Chem，2004，52:531-537.

［24］白立群，吳亞君，韓建勛.一種有效的大豆精煉油DNA 提取新方法—冷凍干燥法［J］.食品與工業(yè)發(fā)酵，2009，35（12）：155-159.

［25］Maria J Giménez，F(xiàn)ernando Pistón，Antonio Martín，et al.Application of real-time PCR on the development of molecular markers and to evaluate critical aspects for olive oil authentication［J］.Food Chemistry，2010，118:482-487.

［26］王澎，金麗晨，耿志明，等.食用大豆油中DNA 的快速提取和轉(zhuǎn)基因成分定性檢測(cè)［J］.江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2008，24（6）:940-943.

［27］欒鳳俠，張洪祥，白月.食用油脂中DNA 高效快速提取方法及實(shí)時(shí)熒光PCR 檢測(cè)技術(shù)的研究［J］.中國(guó)油脂，2005，30（7）:41-43.

［28］Andreas Zimmermann，Jürg Lüthy，Urs Pauli.Quantitative and qualitative evaluation of nine different extraction methods for nucleic acids on soya bean food samples ［J］.Z Lebensm Unters Forsch A，1998，207:81-90.

［29］Angela Di Pinto，Vito Tony Forte，Maria Corsignano Guastadisegni，et al.A comparison of DNA extraction methods for food analysis［J］.Food Control，2007，18:76-80.