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        余甘子中沒食子酸等活性成分在自然儲藏時的變化及分析

        2014-03-27 07:05:50趙江盛徐志平張建博
        云南中醫(yī)中藥雜志 2014年2期

        范 源, 趙江盛, 徐志平, 張建博, 林 青

        (1.云南中醫(yī)學院, 云南 昆明 650500; 2.龍潤集團愛尼食品廠, 云南 昆明 650100)

        余甘子(Phyllanthus emblica)是大戟科(Euphorbiaceae)葉下珠屬(Phyllanthus)的一種生長在中國亞熱帶、熱帶部分地區(qū),特別是干熱河谷地區(qū)的落葉喬木或灌木資源植物[1]。余甘子因其具有抗氧化、抗衰老、防癌癥、抗心血管病、治糖尿病等多種保健與治療的作用而廣泛應用[2-5]。余甘子果實在貯運中易發(fā)生褐變對其保存與加工及產品的穩(wěn)定性均有較大的影響。

        1 實驗材料與方法

        1.1 實驗材料 余甘子果實:本文采用對云南瀾滄江、金沙江、元江流域的7個縣同時采集獲得的余甘子作為實驗材料。

        1.2 試驗方法

        1.2.1 沒食子酸含量測定方法

        1.2.1.1 儀器與試劑 Agilent1100(VWD檢測器)、甲醇(色譜純)、磷酸、純化水、沒食子酸對照品(購自云南省藥檢所)含量98%。

        1.2.1.2 測定方法 以十八烷基硅烷鍵和硅膠為填充劑;以甲醇-0.2%磷酸溶液(5:95)為流動相;檢測波長為273 nm。理論板數(shù)按沒食子酸峰計算應不低于2000。對照品制備:取沒食子酸對照品適量,精密稱定,加50%甲醇制成每1 mL含25 μg的溶液。供試品制備:取約200 g橄欖果實榨汁后,稱取原果汁約1 g,精密稱定,置具塞錐形瓶中,精密加入50%甲醇50 mL,稱定重量,加熱回流1 h,放冷,再稱定重量,用50%甲醇補足減失的重量,搖勻,濾過,取續(xù)濾液。分別精密吸取對照品溶液10 μL與供試品溶液10 μL,注入液相色譜儀,測定,外標法計算。

        1.2.2 超氧化物歧化酶(SOD)活性的測定

        1.2.2.1 儀器與試劑 紫外-可見分光光度計:島津UV2450、精密酸度計(0.01 pH)、離心機、10 mL比色管、10 mL離心管、玻璃乳缽、A液:pH 8.20的0.1 mol/L三羥甲基氨基甲烷-鹽酸緩沖液(內含1 mmol/L EDTA 2Na)、B液:4.5 mmol/L鄰苯三酚鹽酸溶液、10 mmol/L鹽酸溶液、蒸餾水。

        1.2.2.2 測定方法 (1)在25℃左右,于10 mL比色管中依次加入A液2.35 mL,蒸餾水2.00 mL,B液0.15 mL,加入B液立即混合并傾入比色皿,分別測定在325 nm波長條件下初始時和1 min后吸光值,二者之差即鄰苯三酚自氧化速率ΔA325(min-1)。本試驗確定ΔA325(min-1)為0.060。(2)樣液和SOD酶液抑制鄰苯三酚自氧化速率測定按步驟1分別加入一定量樣液或酶液使抑制鄰苯三酚自氧化速率約為1/2ΔA325(min-1),即ΔA325(min-1)為0.030。

        (公式1)

        1.2.3 抗壞血酸(維生素C)含量的測定

        1.2.3.1 儀器與試劑 恒溫箱:(37±0.5)℃、可見-紫外分光光度儀:島津(UV2450)、搗碎機、4.5mol/L硫酸、85%硫酸、2,4-二硝基苯肼溶液(20 g/L)、草酸溶液(20 g/L)、草酸溶液(10 g/L)、硫脲溶液(10 g/L)、硫脲溶液(20 g/L)、1 mol/L鹽酸、抗壞血酸標準溶液:稱取100 mg純抗壞血酸溶解于100 mL濃度為10 g/L草酸溶液中,此溶液每毫升相當于1mg抗壞血酸、活性炭:將100 g活性炭加到750 mL濃度為1 mol/L的鹽酸中,回流1~2 h,過濾,用水洗數(shù)次,至濾液中無鐵離子(Fe3+)為止,然后置于110℃烘箱中烘干。

        1.2.3.2 測定方法 在避光的條件下,稱取100 g鮮余甘子果肉及吸取100 mL濃度為20 g/L草酸溶液,倒入搗碎機中打成勻漿,取0.2 g~1 g勻漿(含1 mg~2 mg抗壞血酸)倒入100 mL容量瓶中,用10 g/L草酸溶液稀釋至刻度,混勻;過濾取25 mL濾液,加入2 g活性炭,振搖1 min,過濾,棄去最初數(shù)毫升濾液。取10 mL此氧化提取液,加入10 mL濃度為20 g/L硫脲溶液,混勻,此試樣定為稀釋液。

        呈色反應:于三個試管中各加入4 mL稀釋液。一個試管作為空白,在其余試管中加入1.0 mL濃度為20 g/L的2、4-二硝基苯肼溶液,再將所有試管放入(37±0.5)℃恒溫箱或水浴中,保溫3h后取出,除空白管外將所有試管放入冰水中。空白管取出使其變?yōu)槭覝?,然后加?.0 mL濃度為20 g/L的2、4-二硝基苯肼溶液,在室溫中放置10 min~15 min后放入冰水內。其它步驟同其余3個試樣。當試管放入冰水后,向每一試管加入85%硫酸5 mL,后將試管自冰水中取出,在室溫放置30 min后比色。

        標準曲線的繪制:加2 g活性炭于50 mL標準溶液中,振搖1 min,過濾,取10 mL濾液放入500 mL容量瓶中,加5.0 g硫脲,用10 g/L草酸溶液稀釋至刻度、抗壞血酸(20 μg/mL),取5,10,20,25,40,50,60 mL稀釋液,分別放入7個100 mL容量瓶中,用10 g/L硫脲溶液稀釋至刻度,使最后稀釋液中抗壞血酸的濃度分別為1,2,4,5,8,10,12 μg/mL,按試樣測定步驟形成脎并比色,以吸光值為縱坐標,抗壞血酸濃度(μg/mL)為橫坐標繪制標準曲線。

        (公式2)

        式中:X——試樣中總抗壞血酸含量,單位為毫克每百克(mg/100 g)。c——由標準曲線查得或由回歸方程算得“試樣氧化液”中總抗壞血酸的濃度,單位為微克每毫升(μg/mL)。V——試樣用10 g/L草酸溶液定容的體積,單位為毫升(mL)。F——試樣氧化處理過程中的稀釋倍數(shù)。m——試樣的質量,單位為克(g)。計算結果表示小數(shù)點后兩位。

        2 結果與分析

        7個不同產地的余甘子儲藏前與儲藏中相比,其沒食子酸的含量變化均上升(見表1);不同產地余甘子儲藏前及儲藏中比較,含維生素C量變化有5例呈上升趨勢,2例呈下降趨勢(見表2);余甘子中SOD在不同產地儲存前及儲存中的活性變化在表中可以看出有5例活性減弱,2例活性增強(見表3);結果顯示,在余甘子儲藏前及儲藏中,與維生素C和SOD的變化相比,在余甘子儲藏中,沒食子酸含量上升的比例最為明顯(見表1~3及圖1)。

        表1 滇橄欖不同產地儲藏前及儲藏中沒食子酸含量的變化

        表2 滇橄欖不同產地儲藏前及儲藏中維生素C含量的變化

        表3 余甘子不同產地儲藏前及儲藏中SOD活性的變化

        圖與儲存前相比儲存中沒食子酸含量變化的比率

        沒食子酸含量增多,可能因為采摘后發(fā)生呼吸躍變[5],膜透性降低,果實多酚化合物與氧結合,導致余甘子中復雜的多酚化合物如單寧酸、五沒食子酰基葡萄糖、槲皮素、糅花酸等發(fā)生分解反應使沒食子酸從這些化合物中解離、脫落,致使沒食子酸增多,并發(fā)生褐變[7~9];Vc含量多為減少趨勢,可能因為果實采摘后呼吸鏈發(fā)生斷裂等環(huán)境變化導致Vc降解反應使其含量降低,或發(fā)生非酶褐變從而導致Vc含量的下降[10];SOD活性多為降低的現(xiàn)象可能是采摘后呼吸鏈斷裂使果實內部成分發(fā)生變化致使有機酸濃度升高、pH下降導致銅鋅氧化酶銅離子解離、PPO逐漸失活引起SOD失活等,當采摘后由于褐變等一系列變化導致酶類分解,SOD活性降低[11]。部分余甘子采摘后SOD活性增高,可能是由于當?shù)丨h(huán)境脅迫導致果實中產生大量的ROS的積累促使SOD活性增加。

        3 結論

        從以上實驗數(shù)據(jù)可以看出:不同產地余甘子中的沒食子酸、維生素C、SOD等活性成分在貯藏中會發(fā)生變化,其中沒食子酸含量變化尤為突出,可以考慮將沒食子酸作為余甘子早期褐變的質量控制指標之一。研究并分析余甘子貯藏中活性產物含量及變化對余甘子等果實類中藥的貯藏及養(yǎng)護有較高價值。

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