方麗萍等

摘要：采用田間試驗(yàn)方法研究了乙氧氟草醚在大蒜和土壤中的殘留和降解情況，以評(píng)價(jià)大蒜生產(chǎn)中乙氧氟草醚殘留對(duì)環(huán)境的污染程度以及所得產(chǎn)品的食用安全性。樣品經(jīng)丙酮/乙酸乙酯提取，微波加熱處理，弗羅里硅土柱凈化，氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀檢測(cè)。結(jié)果顯示，乙氧氟草醚在0.01～1.0 mg/L范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)為0.9980，在大蒜及其植株和土壤中的添加回收率為85.2%～104.1%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.8%～9.6%。在大蒜植株中殘留量太低，以致消解現(xiàn)象不明顯；土壤中消解明顯，半衰期為15.4～18.6天，藥后42天消解90%以上。使用30%乙氧氟草醚·撲草凈可濕性粉劑按照900 g a.i./hm2和1 350 g a.i./hm2用藥量分別土壤噴霧，不同收獲期的蒜薹及大蒜樣品中乙氧氟草醚的殘留量均小于檢出限0.01 mg/kg，低于日本和以色列規(guī)定的最高殘留限量0.05 mg/kg。綜上所述，使用30%乙氧氟草醚·撲草凈可濕性粉劑防治大蒜田間雜草，按450～900 g a.i./hm2于大蒜播種后發(fā)芽前土壤噴霧處理一次，所收獲產(chǎn)品食用安全。

關(guān)鍵詞：乙氧氟草醚；大蒜；土壤；殘留消解動(dòng)態(tài)；氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用

中圖分類號(hào)：TQ450.2+6文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)號(hào)：A文章編號(hào)：1001-4942（2014）02-0119-06

乙氧氟草醚（Oxyfluorfen） 又名氟硝草醚、果爾、割草醚，化學(xué)名稱為2-氯-1-（3-乙氧-4-硝基苯氧基）-4-（三氟甲基）苯，化學(xué)分子式為C15H11CF3NO4。乙氧氟草醚是美國(guó)羅姆-哈斯公司開發(fā)的含氟二苯醚類除草劑，是一種高效、低毒、低殘留、選擇性、水旱田兼用、廣譜苗前苗后觸殺型除草劑[1]?？蓱?yīng)用于杉木苗園[2]、花生[3]、大蒜[4～9]等作物，對(duì)闊葉雜草、莎草及稗以及其他多種以種子繁殖的雜草有良好的防除效果，并且能保證當(dāng)茬作物的安全。

國(guó)際上，Morales-Muoz等[10]使用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用（GC-MS）檢測(cè)了海洋沉積物中的乙氧氟草醚；Aramendía等[11]使用氣相色譜-二級(jí)質(zhì)譜聯(lián)用（GC-MS/MS）測(cè)定了橄欖油中的乙氧氟草醚； Laganà等[12]使用高效液相色譜-二級(jí)質(zhì)譜聯(lián)用（HPLC-MS/MS）測(cè)定了自然水中的乙氧氟草醚及其代謝產(chǎn)物；Banerjee等[13]則使用了氣相色譜-飛行時(shí)間質(zhì)譜聯(lián)用（GC-TOF）檢測(cè)了葡萄中的乙氧氟草醚。

而國(guó)內(nèi)目前的檢測(cè)手段尚不成熟，邵鐵華[14]、李麗春[15]等采用氣相色譜法進(jìn)行測(cè)定，樊玲娥[16]、黃修柱[17]等采用氣質(zhì)聯(lián)用對(duì)其結(jié)構(gòu)性質(zhì)進(jìn)行了研究；李闖[18]、沈偉健[19]等分別使用氣相色譜-電子捕獲檢測(cè)器（GC-μECD）和氣相色譜-負(fù)化學(xué)源質(zhì)譜聯(lián)用（GC-NCIMS）對(duì)蔬菜中的乙氧氟草醚進(jìn)行了定性和定量檢測(cè)。

本試驗(yàn)通過(guò)山東省濟(jì)南市和浙江省杭州市兩年兩地的殘留試驗(yàn)，采用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法檢測(cè)，建立了大蒜和土壤中乙氧氟草醚殘留的檢測(cè)方法，測(cè)定了30%乙氧氟草醚·撲草凈可濕性粉劑在大蒜上的消解動(dòng)態(tài)和最終殘留，為乙氧氟草醚的推廣應(yīng)用提供一定的理論基礎(chǔ)。該方法快速、準(zhǔn)確，準(zhǔn)確度和精密度均能達(dá)到定量分析的要求。

1材料與方法

1.1試驗(yàn)材料

供試農(nóng)藥：30%乙氧氟草醚·撲草凈可濕性粉劑（其中乙氧氟草醚6%，四川華豐藥業(yè)有限公司提供）；乙氧氟草醚標(biāo)準(zhǔn)品（99.8%， Sigma-Aldrich Laborchemikalien GmbH）。

供試作物：大蒜（紅四瓣）。

1.2田間試驗(yàn)設(shè)計(jì)

試驗(yàn)時(shí)間：2009年10月～2011年6月；試驗(yàn)地點(diǎn)：山東省濟(jì)南市、浙江省杭州市。所選試驗(yàn)小區(qū)管理水平中等，大蒜長(zhǎng)勢(shì)均勻良好，隨機(jī)區(qū)組設(shè)計(jì)，小區(qū)面積30 m2，小區(qū)間設(shè)保護(hù)行，另設(shè)對(duì)照小區(qū)，重復(fù)3次。于大蒜播種后發(fā)芽前，土壤噴霧處理一次，避免重噴漏噴。

1.2.1消解動(dòng)態(tài)試驗(yàn)30%乙氧氟草醚·撲草凈可濕性粉劑以1 350 g a.i./hm2（制劑量666.7m2為300 g，推薦最高劑量的1.5倍）用藥量對(duì)水噴霧施于土壤表面，施藥1次，分別于施藥后1 h和1、3、5、7、14、21、28、42、56、70、90、120、180 d 隨機(jī)多點(diǎn)采集土壤樣本，植株從大蒜發(fā)芽超過(guò)2 cm開始采樣（以此為0天），采集0、1、3、5、7、14、21、28、42、56 d包括地下部分的整株大蒜植株，同時(shí)采集對(duì)照，樣品采集和處理按照《農(nóng)藥殘留試驗(yàn)準(zhǔn)則》[20]進(jìn)行。

1.2.2最終殘留試驗(yàn)30%乙氧氟草醚·撲草凈可濕性粉劑以900 g a.i./hm2（制劑量666.7m2為200 g，推薦最高劑量）和1 350 g a.i./hm2用藥量分別噴施處理，各施藥1次，施藥時(shí)間及方式同消解動(dòng)態(tài)；分別在蒜薹長(zhǎng)至10、15、20 cm時(shí)，采集蒜薹樣品3次；大蒜收獲期采集大蒜樣品1次，每小區(qū)采集樣品不少于1 kg，同時(shí)采集對(duì)照，樣品采集和處理按照《農(nóng)藥殘留試驗(yàn)準(zhǔn)則》[20]進(jìn)行。

1.3分析方法

1.3.1儀器與試劑Agilent 6890N氣相色譜儀，附帶自動(dòng)進(jìn)樣器（美國(guó)安捷倫公司）；HP5973/6890四極桿質(zhì)譜儀（美國(guó)惠普公司）；Mettler PM200型電子天平（瑞士Mettler公司）；微波爐（格蘭仕家用微波爐，功率800 W）；高速勻漿機(jī)（德國(guó)IKA WORK INC T25 Basic）；KQ500B超聲波提取器（昆山市超聲儀器有限公司）；Re-52 AAA旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海嘉鵬科技有限公司）；Eppendorf精密移液槍（10～100 μl， 100～1 000 μl）。

乙酸乙酯、丙酮、石油醚（沸程60～90℃）、無(wú)水硫酸鈉、弗羅里硅土（100～120目），皆為分析純。endprint

1.3.2樣品前處理①蒜氨酸酶的滅活：大蒜破損后，其體內(nèi)本身含有的蒜氨酸在蒜氨酸酶的作用下水解產(chǎn)生含有不同取代基的上百種含硫化合物，這些硫化物含量高，性質(zhì)差異大，傳統(tǒng)的前處理方法很難將其與待測(cè)物完全分離，嚴(yán)重干擾了農(nóng)藥殘留的檢測(cè)。而蒜氨酸本身不會(huì)產(chǎn)生干擾，所以只要阻斷這種反應(yīng)就可以有效去除硫化物的干擾。由于蒜氨酸和蒜氨酸酶分別存在于植物的細(xì)胞液和細(xì)胞質(zhì)中，在大蒜破損之前，兩者不會(huì)接觸，即研究蒜氨酸酶滅活的條件是在其不破損的情況下進(jìn)行。陳子雷[21]研究發(fā)現(xiàn)微波加熱可以在短時(shí)間內(nèi)達(dá)到滅活效果，同時(shí)因?yàn)橐已醴菝言?0℃以上不穩(wěn)定，所以采用快速微波加熱來(lái)處理大蒜樣品，時(shí)間30 s，能夠取得較好的蒜氨酸酶滅活效果。

②提?。和寥溃悍Q取土壤樣品10.00 g（精確到0.01 g），置于200 ml具塞廣口瓶中，加入丙酮/乙酸乙酯（1/1，V/V，下同）溶液60 ml浸泡，然后超聲波提取30 min，將上清液過(guò)無(wú)水硫酸鈉漏斗脫水，濾渣分別用20 ml丙酮/乙酸乙酯溶液洗滌兩次，合并濾液于平底燒瓶中，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器濃縮至近干，待層析柱凈化。

植株與蒜薹：稱取樣品25.00 g（精確到0.01 g），置于200 ml具塞廣口瓶中，加入丙酮/乙酸乙酯溶液100 ml浸泡，之后用高速勻漿機(jī)勻漿1 min，將上清液過(guò)濾至250 ml具塞量筒內(nèi)，靜置1 h分層，把上層有機(jī)試劑補(bǔ)至100 ml，取20.00 ml于平底燒瓶，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器濃縮至近干，待層析柱凈化。

大蒜：稱取樣品25.00 g（精確到0.01 g），置于200 ml具塞廣口瓶中，逐一放入功率800 W的微波爐中微波30 s，然后加入丙酮/乙酸乙酯溶液100 ml浸泡，高速勻漿機(jī)勻漿1 min，將上清液過(guò)濾至250 ml具塞量筒，靜置1 h分層，把上層有機(jī)試劑補(bǔ)至100 ml，取約20.00 ml于平底燒瓶?jī)?nèi)，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器濃縮至近干，待層析柱凈化。

③凈化：玻璃層析柱填充6 g弗羅里硅土，兩端加2 cm無(wú)水Na2SO4。用20 ml丙酮/石油醚（1/4，V/V，下同）預(yù)淋，濃縮物用10 ml丙酮/石油醚轉(zhuǎn)入柱中，用30、10、10 ml丙酮/石油醚三次洗脫，收集洗脫液并用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器濃縮近干，用5.00 ml乙酸乙酯定容，待氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀檢測(cè)。

④儀器條件：色譜柱：Agilent 122-5032 DB-5MS 色譜柱（0.25 mm×30 m×0.25 μm）；柱溫：60℃保持1 min，20℃/min升溫至180℃，5℃/min升溫至280℃保持3 min；進(jìn)樣口溫度：250℃；進(jìn)樣量：1 μl（不分流）；載氣：高純氮?dú)?；流速?.0 ml/min；電離源：EI源（70 eV）；離子源溫度：230℃；傳輸線溫度：250℃；電子倍增管電壓：1 900 V；掃描方式：SIM；調(diào)諧方式：自動(dòng)調(diào)諧；乙氧氟草醚定性離子（m/z）：252、300、361；乙氧氟草醚定量離子（m/z）：252。

⑤定性定量方法：在上述色譜條件下，注射較高濃度的乙氧氟草醚標(biāo)準(zhǔn)品溶液（1.0 mg/L），用定性離子m/z=252、300、361確認(rèn)乙氧氟草醚的相對(duì)保留時(shí)間為17.10 min。以相對(duì)保留時(shí)間和特征離子作為判定依據(jù)。

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