陳祥娜

福建醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院病理科，福建福州 350003

晚期非小細胞肺癌靶向治療中循環(huán)DNA檢測EGFR基因突變應(yīng)用價值

陳祥娜

福建醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院病理科，福建福州 350003

目的結(jié)合該院在非小細胞癌（NSCLC）靶向治療中，循環(huán)DNA檢測EGFR基因突變的相關(guān)情況，對其臨床價值進行評估。方法 從該院中選取接受EGDR TIKs治療的54例患者，分別對其進行血清采集和組織采集，并制作成標本，對DNA進行提取檢測。結(jié)果 女性出現(xiàn)基因變異的情況高于男性，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；組織類型、臨床分析以及EGFR TIKs無基因突變誤差，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；血清樣本測定EGDR基因突變，特異性為97.30%；靈敏度為41.18%；所有患者的客觀緩解率為27.78%，疾病控制率為48.15%；EGFR TKIs對晚期患者的客觀緩解率為50.00%，對野生型的患者則只有16.67%。結(jié)論在EGDR基因突變的測定中，血清循環(huán)DNA具有一定的價值，且可有效優(yōu)化晚期肺癌靶向治療患者的臨床效果。

NSCLC；循環(huán)DNA；EGDR基因突變

靶向治療的出現(xiàn)極大的改善了晚期非小細胞肺癌患者的預(yù)后。肺癌組織的EGFR基因突變可以有效預(yù)測靶向藥物EGFRTKI的臨床療效。目前臨床上多采用手術(shù)或穿刺標本來檢測EGFR基因突變。但這種有創(chuàng)操作在一定程度上限制了EGFR基因突變的檢測。研究發(fā)現(xiàn)肺癌患者循環(huán)血中游離DNA含量顯著高于正常人，并與原發(fā)腫瘤組織具有高度的遺傳一致性[1-2]。鑒于此，該院2011年1月—2014年6月期間在NSCLC靶向治療中，運用血清循環(huán)DNA檢測EGFR基因突變，對其臨床價值進行評估。現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

從該院2011年 1月—2014年6月所接診的 NSCLC患者中，選取54例采用小分子表皮生長因子受體細胞內(nèi)酪氨酸激酶抑制劑（EGDR TIKs）治療的患者；其中女性23例，男性31例，患者平均年齡為（65.41±1.24）歲；其中19例為非腺癌，35例為腺癌；患者中26例為Ⅲb期，28例為Ⅳ期；在進行采樣時，24例為曾經(jīng)或者正在接受EGDR TIKs治療，30例為首次接受EGDR TIKs臨床治療。在獲得患者同意之后，對其進行血清樣本的采集，并同時進行石蠟組織標本的制作，所有患者均滿足以下幾點：①患者年齡在20歲或以上；②經(jīng)細胞學(xué)或者病理學(xué)證實，患者為Ⅲb期或Ⅳ期，其中包括了初次治療后復(fù)發(fā)或者未接受過化療治療的患者；③經(jīng)ECOG功能狀態(tài)評分，測評結(jié)果為0～2分，具有能夠測量的病灶；④具有較高的依從性，并且能夠及時到院或者電話接受隨訪；⑤無重要臟器功能障礙。

1.2 方法

1.2.1 樣本采集 ①血清樣本采集：提前一日叮囑患者清晨空腹接受靜脈血采集，每例患者采集5 mL，于黃色促凝管內(nèi)室溫放置4 h后，離心分離血清，-80℃下保存待用；②石蠟組織樣本采集：選取肺穿標本或者手術(shù)標本腫瘤部分，切取10張6 μm的蠟片，置于Eppendorf管內(nèi)編號保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 DNA的提取 ①血清樣本DNA的提?。涸撗芯窟x取Qiagen公司試劑盒QIAamp DNA Blood Mini Kit，并按照說明書進行血清循環(huán)DNA的提??；②石蠟組織樣本DNA的提?。罕狙芯窟x取QIAamp DNA FFPE Tissue Kit，并按照說明書進行血清循環(huán)DNA的提取。

1.2.3 EGFR突變檢測 該研究使用ARMS（amplified refractory mutation system）法進行EGFR突變檢測。

1.3 EGFR TIKs的治療方法

為患者提供EGFR TIKs口服治療，每日服用尼洛替尼150 mg，在進食前1 h或者進食后2 h服用；或者在空腹狀態(tài)下，與食物共同服用的情況下，服用250 mg吉非替尼。直到患者出現(xiàn)不可耐受的藥物毒副作用或者腫瘤疾病進展；在治療前1周對患者的身體狀態(tài)進行全面評估。

2 結(jié)果

2.1 血清及組織標本中

EGFR基因突變型患者的臨床分布特征 女性出現(xiàn)基因變異的情況高于男性，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；組織類型、臨床分析以及EGFR TIKs無基因突變誤差，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。見表1。

2.2 血清EGFR基因突變檢測的真實性和可靠性評價

通過血清樣本測定EGFR基因突變，其特異性達到了97.30%；靈敏度則達到了41.18%。見表2。

2.3 EGFR基因突變與EGFR TKIs療效關(guān)系

所有患者的客觀緩解率為27.78%，疾病控制率為48.15%；其中EGFR TKIs對晚期患者的客觀緩解率為50.00%，而對野生型的患者則只有16.67%。見表3。

3 討論

人類表皮生長因子受體（EGFR）是一種受體酪氨酸激酶，正常情況表達于上皮細胞表面，而在一些惡性腫瘤中常過度表達。EGFR基因突變包括基因擴增和點突變，主要集中在18、19、20、21號外顯子上，第19外顯子的缺失和第21外顯子的L858R點突變，占到89%～95.5%，與腫瘤對TKIs的敏感度有重要關(guān)系。60%～85%的NSCLC細胞存在EGFR過度表達/突變，這部分患者接受腫瘤分子靶向治療（EGFR抑制劑）的臨床療效優(yōu)于常規(guī)化療。臨床研究表明，肺癌細胞中有EGFR酪氨酸激酶基因編碼區(qū)外顯子19缺失或外顯子21突變的患者，靶向藥物易瑞沙的有效率高達80%以上[3]。該研究中主要針對19和21外顯子的突變型檢測，其中19外顯子突變?yōu)?5.56%(10/18)，21外顯子突變?yōu)?4.44%(8/18)；所檢測出的基因突變型(19DelK746-A750、19DelK745-E749、19DelK745-A750；21 L858R、21 L861Q)與當前研究顯示的已檢測出的基因突變類型及突變率相符。

表1 EGFR基因突變型的單因素分析

表2 血清EGFR基因突變檢測篩查試驗分析

表3 EGFR基因突變與EGFR TKIs療效關(guān)系

一些臨床實驗結(jié)果進一步證實，通過篩查EGFR基因突變對肺癌初治患者進行吉非替尼治療，中位無進展生存時間達到12個月，中位生存時間達到20個月[4]。因而針對EGFR突變進行選擇性靶向治療，患者可以顯著獲益[5]。

2013年5月，美國病理學(xué)家協(xié)會(CAP)、國際肺癌研究協(xié)會(IASLC)和美國分子病理學(xué)會(AMP)三大權(quán)威機構(gòu)發(fā)布了一項基于循證醫(yī)學(xué)證據(jù)的肺癌分子檢測指南，建議所有晚期肺腺癌患者不論性別、種族、是否吸煙或伴有其他臨床危險因素，均應(yīng)接受EGFR突變和ALK融合基因檢測，以判斷是否適于接受酪氨酸激酶抑制劑治療[6]。但是對于晚期肺癌患者，其腫瘤組織標本往往難以獲得，或不能取得足夠適合檢測的標本。這就需要一種能方便取得EGFR突變信息的檢測方法[7-8]。

在該次研究中，對血清循環(huán)DNA與腫瘤組織DNA的突變檢測結(jié)果進行對比，結(jié)果表明，血清游離DNA檢測到的突變類型與組織檢測到的類型無差異，依據(jù)血清EGFR檢測結(jié)果進行選擇性靶向治療，可以使患者顯著受益。由于血液采集方便，患者易于接受，血清EGFR檢測技術(shù)可以作為腫瘤組織EGFR檢測的補充與替代，值得臨床推廣應(yīng)用。但是，由于檢測還具有一定的局限性，故表現(xiàn)出相應(yīng)的假陰性率，故在實際應(yīng)用中，還需要與其他檢測手段同時使用。

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A

1674-0742（2014）11（b）－0053-02

2014-08-16）

陳祥娜（1985.1-），女，山東臨沂人，研究生，技師，研究方向：分子病理。