王秋菊，肖輝建，吳 雙，凌月明

伯樂(lè)質(zhì)控品復(fù)溶后在Sysmex CA7000凝血儀上穩(wěn)定性的研究

王秋菊，肖輝建，吳 雙，凌月明

目的：通過(guò)凝血酶原時(shí)間（prothrombin time，PT）、部分凝血活酶時(shí)間（activated partial thromboplastin time，APTT）、凝血酶時(shí)間（thrombin time，TT）、纖維蛋白原（fibrinogen，F(xiàn)IB）的伯樂(lè)質(zhì)控品在冷凍保存不同時(shí)間后復(fù)溶的檢測(cè)結(jié)果，研究伯樂(lè)質(zhì)控品復(fù)溶后-30℃冷凍保存對(duì)其在Sysmex CA7000凝血儀上檢測(cè)的穩(wěn)定性影響。方法：取3瓶干粉狀凝血質(zhì)控品復(fù)溶后分裝于14支具蓋離心管中，留1支當(dāng)天檢測(cè)，其余13支-30℃冷凍保存，每天各取1支，快速?gòu)?fù)溶后隨標(biāo)本一起進(jìn)行質(zhì)控測(cè)試，測(cè)定結(jié)果導(dǎo)入伯樂(lè)質(zhì)控軟件中。結(jié)果：伯樂(lè)凝血質(zhì)控品復(fù)溶后PT、APTT、TT、FIB結(jié)果的日間CV值均小于5%，分裝后第2～14天的測(cè)定結(jié)果與開(kāi)瓶當(dāng)日的測(cè)定結(jié)果間差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。結(jié)論：伯樂(lè)凝血質(zhì)控品復(fù)溶后-30℃冷凍保存14 d內(nèi)，在Sysmex CA7000血凝儀上的檢測(cè)結(jié)果具有良好的穩(wěn)定性。

伯樂(lè)質(zhì)控品；Sysmex CA7000凝血儀；冷凍保存；穩(wěn)定性

0 引言

凝血結(jié)果的可靠性直接影響臨床對(duì)血液凝固功能的判斷，而室內(nèi)質(zhì)量控制是保證測(cè)定結(jié)果精密性和準(zhǔn)確性的關(guān)鍵，能夠滿(mǎn)足為臨床判斷提供穩(wěn)定可靠的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的基本要求。室內(nèi)質(zhì)控的目的是檢測(cè)分析過(guò)程中的誤差，控制與分析有關(guān)的各個(gè)環(huán)節(jié)，保證檢測(cè)結(jié)果的可靠準(zhǔn)確。質(zhì)控品的穩(wěn)定性是質(zhì)量控制過(guò)程中的重要一環(huán)，質(zhì)控物就是質(zhì)量控制的物質(zhì)基礎(chǔ)，所以在凝血質(zhì)控品的選擇上，準(zhǔn)確性、穩(wěn)定性及有效性是首先考慮的，近年來(lái)，伯樂(lè)凝血質(zhì)控品以良好的穩(wěn)定性和有效期長(zhǎng)等優(yōu)點(diǎn)備受關(guān)注。伯樂(lè)凝血干粉質(zhì)控品復(fù)溶后按其規(guī)定的條件放置于2～8℃下保存，但發(fā)現(xiàn)質(zhì)控檢測(cè)的結(jié)果并不是很穩(wěn)定，且有效期較短，復(fù)溶后只能在2～8℃下保存48 h，有的甚至導(dǎo)致失控，不是很穩(wěn)定，給實(shí)驗(yàn)室?guī)?lái)較大的成本壓力?？紤]如果質(zhì)控液復(fù)溶分裝后在冷凍條件下能夠較長(zhǎng)時(shí)間保持穩(wěn)定，可解決反復(fù)凍融帶來(lái)的不準(zhǔn)確性問(wèn)題，使穩(wěn)定性明顯提高，也可以大幅減少實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)成本的支出。為此，對(duì)伯樂(lè)凝血質(zhì)控品復(fù)溶后分裝放置于-30℃冷凍保存下解凍后在 Sysmex CA7000血凝儀上檢測(cè)結(jié)果的穩(wěn)定性進(jìn)行研究，通過(guò)觀(guān)察其穩(wěn)定性，可避免失控時(shí)對(duì)儀器穩(wěn)定性狀況的錯(cuò)誤判定。

1 材料與方法

1.1 儀器及試劑

全自動(dòng)血凝分析儀Sysmex CA7000；低溫保存箱為海爾DW-40L508；測(cè)定所用試劑均為德國(guó)Dade Behring Marburg公司提供；質(zhì)控品為美國(guó)伯樂(lè)公司的干粉質(zhì)控品，批號(hào)為78201、78202。

1.2 方法

1.2.1 質(zhì)控均值的測(cè)定

操作者在儀器每天處于良好的運(yùn)行狀態(tài)時(shí)，按照《CNAS-CL43醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和能力認(rèn)可準(zhǔn)則》在臨床血液學(xué)檢驗(yàn)領(lǐng)域的應(yīng)用說(shuō)明要求，將質(zhì)控品連續(xù)檢測(cè)20 d，得到20個(gè)質(zhì)控項(xiàng)目凝血酶原時(shí)間（prothrombin time，PT）、部分凝血活酶時(shí)間（activated partial thromboplastin time，APTT）、凝血酶時(shí)間（thrombin time，TT）、纖維蛋白原（fibrinogen，F(xiàn)IB）的測(cè)定值，導(dǎo)入伯樂(lè)質(zhì)控軟件中，計(jì)算出其變異系數(shù)（CV）和測(cè)量均值（X），并以此作為質(zhì)控均值。

1.2.2 質(zhì)控品復(fù)溶后不同保存時(shí)間的測(cè)定

取3瓶伯樂(lè)干粉凝血質(zhì)控品，各加無(wú)菌注射用水1 mL復(fù)溶，該過(guò)程嚴(yán)格按照本實(shí)驗(yàn)室復(fù)溶標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程操作，將其中2瓶質(zhì)控液倒入另一瓶質(zhì)控液中，充分混勻消除瓶間差后分裝成14支，每支200μL。取1支當(dāng)天在CA7000血凝儀上測(cè)定，另13支放入-30℃冰箱冷凍保存。之后每天取1支冷凍分裝質(zhì)控品常溫下復(fù)溶，完全解凍后與常規(guī)標(biāo)本一起進(jìn)行檢測(cè)，連續(xù)測(cè)定14 d。按該方法操作5次。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

將每天的質(zhì)控結(jié)果分別進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，并導(dǎo)入到伯樂(lè)質(zhì)控軟件程序中。使用SPSS13.0和Excel 2003統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，多組間的比較用單因素方差分析，組間均數(shù)比較用t檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同保存時(shí)間內(nèi)所測(cè)質(zhì)控結(jié)果

伯樂(lè)凝血質(zhì)控品復(fù)溶后不同保存時(shí)間內(nèi)PT、APTT、TT、FIB測(cè)定的±s和CV值見(jiàn)表1。

表1 凝血質(zhì)控品溶解分裝后在-30℃下不同保存時(shí)間的穩(wěn)定性比較

2.2 檢測(cè)結(jié)果比較

由表1可知，不同保存時(shí)間內(nèi)PT、APTT、TT、FIB兩水平所測(cè)結(jié)果相對(duì)比較穩(wěn)定，且比較方差分析顯示不同保存時(shí)間測(cè)定結(jié)果之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；t檢驗(yàn)顯示冷凍分裝后第2～14天的PT、APTT、TT、FIB檢測(cè)結(jié)果與第1天的檢測(cè)結(jié)果差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

3 討論

Sysmex CA7000凝血儀是檢驗(yàn)科常見(jiàn)的凝血儀器，其具有精密度好、準(zhǔn)確性高、分析檢測(cè)范圍寬、檢測(cè)限低、樣本間及試劑間攜帶污染率低的特點(diǎn)，已有文獻(xiàn)證實(shí)[1]，它是檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確性必備的基礎(chǔ)條件。本儀器對(duì)PT、APTT、TT的測(cè)定采用光學(xué)法，即PT是在體外模擬人體內(nèi)外源性凝血的全部條件，測(cè)定血漿凝固所需的時(shí)間，用以反映外源性凝血途徑和共同凝血途徑凝血因子是否異常，是篩檢凝血功能最基本的試驗(yàn)之一；APTT是在外界環(huán)境下模擬人體內(nèi)內(nèi)源性凝血所需的條件，測(cè)定血漿凝固所需的時(shí)間，用以反映內(nèi)源凝血因子是否異常，是篩檢止凝血功能最常用的試驗(yàn)之一；TT是在纖維蛋白原逐漸變成纖維蛋白時(shí)，入射光發(fā)生散射，測(cè)定散射光或透射光發(fā)生變化，從而測(cè)定血漿凝固時(shí)間；SysmexCA7000凝血儀對(duì)FIB的檢測(cè)采用Clauss法，即在被檢血漿中加入凝血酶，從國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)品FIB參照血漿測(cè)定的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)中可獲得被檢血漿的FIB實(shí)際含量[2]。采用全自動(dòng)儀器法檢測(cè)，操作簡(jiǎn)便、檢測(cè)快速、準(zhǔn)確性高，且儀器可連續(xù)記錄凝血過(guò)程中光、電或機(jī)械運(yùn)動(dòng)的變化，試劑、校準(zhǔn)品、質(zhì)控品均是配套來(lái)源，保證了實(shí)驗(yàn)高精度。

《臨床實(shí)驗(yàn)室管理辦法》要求對(duì)有質(zhì)控品供應(yīng)的檢驗(yàn)項(xiàng)目及各級(jí)臨床檢驗(yàn)中心開(kāi)展室間質(zhì)量評(píng)價(jià)的檢驗(yàn)項(xiàng)目必須進(jìn)行室內(nèi)質(zhì)量控制。室內(nèi)質(zhì)量控制是保證臨床實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)質(zhì)量最重要的環(huán)節(jié)。質(zhì)控品是質(zhì)控的物質(zhì)基礎(chǔ)，質(zhì)控品的穩(wěn)定性是日常室內(nèi)質(zhì)量評(píng)價(jià)的必要條件[3]。所以，日常在使用Sysmex CA7000凝血儀檢測(cè)前，除了需要保證儀器處于良好穩(wěn)定的狀態(tài)下，還需要有良好穩(wěn)定性的質(zhì)控品進(jìn)行室內(nèi)質(zhì)量評(píng)價(jià)。

而質(zhì)控品保存復(fù)溶環(huán)節(jié)對(duì)其穩(wěn)定性有直接的影響，如質(zhì)控品中凝血因子的穩(wěn)定性較差，可評(píng)價(jià)該種凝血質(zhì)控品質(zhì)量較差。有文獻(xiàn)報(bào)道，凝血因子在室溫下的穩(wěn)定性較差，其保存時(shí)間與保存溫度有關(guān)[4-5]，常溫下樣品應(yīng)在2 h內(nèi)完成測(cè)定，若常溫下不能及時(shí)檢測(cè)，應(yīng)置于低溫下保存。本科室選擇伯樂(lè)凝血質(zhì)控品對(duì)Sysmex CA7000凝血儀日常檢測(cè)前進(jìn)行室內(nèi)質(zhì)量評(píng)價(jià)?？紤]干粉質(zhì)控品在復(fù)溶時(shí)瓶間差較大[6]，本方法試采用一次性溶解3瓶同一批號(hào)凍干質(zhì)控品混合后分裝低溫冷凍保存的方法，以降低該因素影響；并將溶解后的質(zhì)控品在-30℃下分裝冷凍保存14 d復(fù)融后檢測(cè)，以消除反復(fù)凍融后的誤差。

以上數(shù)據(jù)顯示，凝血質(zhì)控品溶解分裝后在-30℃下不同保存時(shí)間的PT、APTT、FIB 3個(gè)檢測(cè)項(xiàng)目日間CV值均小于5%，符合CLIA′88規(guī)定的可接受范圍；因CLIA′88對(duì)TT項(xiàng)目的總誤差（TEa）沒(méi)有具體

（????）（????）要求，筆者按PT及APTT項(xiàng)目的要求設(shè)定TT的TEa為15%，所以TT項(xiàng)目符合要求，說(shuō)明Sysmex CA7000血凝儀在檢測(cè)伯樂(lè)質(zhì)控品PT、APTT、TT、FIB 4個(gè)項(xiàng)目的穩(wěn)定性較好。置于-30℃下不同保存時(shí)間PT、APTT、TT、FIB測(cè)定結(jié)果之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，冷凍分裝后第2～14天的測(cè)定結(jié)果與第1天的測(cè)定結(jié)果間差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，表明復(fù)溶后分裝放置在-30℃冷凍條件下保存14 d內(nèi)能夠保持良好的穩(wěn)定性。Sysmex CA7000血凝儀在使用伯樂(lè)凝血質(zhì)控品時(shí)，可應(yīng)用該方法，以減小室內(nèi)質(zhì)控測(cè)試項(xiàng)目的不精密度，滿(mǎn)足日常Sysmex CA7000血凝儀室內(nèi)質(zhì)控工作的需要。綜上所述，一次性溶解數(shù)瓶干粉質(zhì)控品混勻后分裝保存于-30℃下、用時(shí)復(fù)溶的質(zhì)控品具有質(zhì)控血清特性，可降低干粉質(zhì)控品瓶間差導(dǎo)致的不準(zhǔn)確性，保證檢測(cè)結(jié)果的穩(wěn)定性、有效性及即時(shí)性，可降低實(shí)驗(yàn)室成本，避免浪費(fèi)檢測(cè)時(shí)間，并能夠迅速把準(zhǔn)確可靠的檢驗(yàn)結(jié)果提供給臨床醫(yī)師，讓其對(duì)病患作出正確的診斷和治療。該方法不僅能保證質(zhì)量，而且可節(jié)約成本，使用方便，值得在中小型實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行推廣。

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（收稿：2013-10-13 修回：2014-05-08）

（欄目責(zé)任編校：李 影 傅 靂）

Post-redissolution stability research on Bio-Rad coagulation quality control materials by Sysmex CA7000 coagulation system

WANG Qiu-ju,XIAO Hui-jian,WU Shuang,LING Yue-ming
(Department of Clinical Laboratory,the 180th Hospital of the PLA,Quanzhou 362000,Fujian Province,China)

ObjectiveTo explore the effects of Bio-Rad coagulation quality control materials with different storage time by detecting prothrombin time (PT),activated partial thromboplastin time (APTT),thrombin time (TT)and fibrinogen (FIB),and to study its post-resolution stability on Sysmex CA7000 coagulation system after-30℃ cryopreservation. MethodsTotally 3 bottles of powder quality control materials redissolved and then loaded into 14 centrifuge tubes with covers,and 1 tube was tested on the day.The remained 13 tubes were reserved at-30℃,and then redissolved for quality control test one by one in 13 days.The test results were introduced into Bio-Rad quality control software.ResultsThe daytime CV values for PT,APTT,TT and FIB were all less than 5%,and there was no statistical difference between the results on the day and the ones on 2 to 14 days after loading (P＞0.05).ConclusionSysmex CA7000 coagulation system proves that Bio-Rad coagulation quality control materials has high post-redissolution stability after 14-day-30℃ cryopreservation.[Chinese Medical Equipment Journal，2014，35（11）：98-99，108]

Bio-Rad coagulation quality control material;CA7000 coagulation system;cryopreservation;stability

R318.6；TH776

A

1003-8868（2014）11-0098-03

10.7687/J.ISSN1003-8868.2014.11.098

王秋菊（1986—），女，檢驗(yàn)師，主要從事臨床檢驗(yàn)方面的研究工作。

362000福建泉州，解放軍180醫(yī)院檢驗(yàn)科（王秋菊，肖輝建，吳雙，凌月明）