胡志強(qiáng)，蔣 鋒，姚 忠

（1.宜興市人民醫(yī)院，江蘇宜興 214200；2.江蘇鵬鷂藥業(yè)有限公司，江蘇宜興 214200）

青蒿琥酯阿莫地喹片，化學(xué)名為二氫青蒿素－10－α－丁二酸單酯，分子式是C19O8H28，為具有一定水溶性的青蒿素衍生物，對對傳統(tǒng)藥物產(chǎn)生抗藥性的惡性瘧疾有著很高的活性，臨床上主要用于腦性瘧疾與危重瘧疾患者的搶救［1］。阿莫地喹為4－氨基喹啉衍生物，通過抑制裂殖體DNA復(fù)制與轉(zhuǎn)錄過程，而呈現(xiàn)強(qiáng)烈的抗瘧作用，臨床上主要用于已發(fā)作的瘧疾，也可預(yù)防其發(fā)作，并可根治惡性瘧疾；此外還可以用于阿米巴肝膿腫、肺吸蟲病、肝吸蟲病以及某些自身免疫性疾?。?－3］。目前，鹽酸阿莫地喹與青蒿琥酯聯(lián)合用藥，是世界衛(wèi)生組織（WHO）推薦的優(yōu)質(zhì)抗瘧藥。現(xiàn)行只有單方片的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，采用UV法測定阿莫地喹的含量，該方法繁瑣，且易受到輔料及其他雜質(zhì)的干擾造成誤差。為更好地控制產(chǎn)品質(zhì)量，本文建立了RP－HPLC法測定青蒿琥酯和鹽酸阿莫地喹片的含量，結(jié)果表明該方法簡便、準(zhǔn)確，專屬性強(qiáng)，有助于更好地控制本品的質(zhì)量；對方法進(jìn)行了驗(yàn)證，為制定質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供了依據(jù)。

1 儀器與試劑

Sartorius BT－25S型電子分析天平（賽多利斯科學(xué)儀器有限公司），島津LC－20AT全自動(dòng)液相色譜儀，PDA檢測器，LC－Solution色譜工作站。

甲醇、乙腈為色譜純，磷酸、高氯酸為分析純，水為純化水。青蒿琥酯鹽酸阿莫地喹片3批樣品和含量測定用對照品由江蘇鵬鷂藥業(yè)有限公司提供。

2 方法與結(jié)果

2.1 青蒿琥酯的含量

2.1.1 色譜條件 色譜柱，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料（安捷倫，4.6mm×15cm，5μm）；流動(dòng)相，乙腈—磷酸鹽緩沖液（取磷酸二氫鉀1.36g，加水1 000 mL使溶解，用磷酸調(diào)pH至3.0）（體積比42∶58）；流速1.0mL／min；檢測波長210nm；進(jìn)樣量20μL。

2.1.2 試驗(yàn)方法 供試品溶液的制備：取本品20片，精密稱定，研細(xì)，精密稱取適量（約相當(dāng)于青蒿琥酯50mg），置50mL量瓶中，加甲醇適量，超聲20 min，振搖，使青蒿琥酯溶解，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，離心，取上清液，作為供試品溶液。

對照品溶液的制備：取青蒿琥酯對照品約50 mg，精密稱定，置50mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，作為對照品溶液。

分別精密量取對照品溶液和供試品溶液各20 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖和峰面積，以外標(biāo)法計(jì)算含量。典型圖譜如圖1和圖2所示。

圖1 青蒿琥酯對照品溶液色譜圖Fig.1 HPLC of artesunate RS

2.1.3 檢測波長的選擇 取青蒿琥酯對照品適量用甲醇溶解并稀釋制成含青蒿琥酯1.0mg／mL的溶液。以PDA作為檢測器，在200～400nm的波長范圍內(nèi)繪制紫外吸收曲線。本品越接近200nm吸收越強(qiáng)，故而選擇210nm作為檢測波長。

圖2 青蒿琥酯供試品溶液色譜圖Fig.2 HPLC of artesunate test solution

2.1.4 線性關(guān)系考察 取含量測定項(xiàng)下的青蒿琥酯對照品儲備液，用流動(dòng)相稀釋成一系列質(zhì)量濃度的溶液，濃度梯度分別為0.5，0.8，1.0，1.2，1.5和2.0mg／mL，按“2.1.1”項(xiàng)下色譜條件檢測，以青蒿琥酯質(zhì)量濃度（ρ）為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)（y），線性回歸得標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果表明，青蒿琥酯在0.500 5～2.002mg／mL質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好，線性回歸方程為y＝608 125ρ－3 311.2，r＝0.999。

2.1.5 精密度試驗(yàn) 按“2.1.2”項(xiàng)下配制青蒿琥酯對照品溶液和供試品溶液，按“2.1.1”項(xiàng)下的色譜條件檢測，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄色譜圖。以峰面積計(jì)算RSD為0.4%（n＝6），小于2.0%，符合要求。

2.1.6 回收率試驗(yàn) 取處方量的輔料空白9份，置50mL量瓶中，分別精密加入青蒿琥酯對照品40，50和60mg，各質(zhì)量濃度平行3份，按“2.1.1”項(xiàng)下的色譜條件檢測。樣品中青蒿琥酯含量以外標(biāo)法計(jì)算，得平均回收率為98.6%，RSD為0.6%（n＝9）。

2.1.7 定量限和檢測限試驗(yàn) 取青蒿琥酯對照品溶液適量，用流動(dòng)相逐級稀釋，按“2.1.1”項(xiàng)下的色譜條件測定，記錄色譜圖。按信噪比10∶1計(jì)算定量限，按信噪比3∶1計(jì)算檢測限。青蒿琥酯定量限為14.1μg／mL，檢測限為4.70μg／mL。

2.1.8 樣品檢測 取青蒿琥酯對照品溶液2份，色譜條件下各進(jìn)3針，再取供試品溶液2份，色譜條件下進(jìn)樣，記錄色譜圖，按外標(biāo)法計(jì)算含量，即得。本品3批青蒿琥酯含量結(jié)果分別為99.2%，99.3%和100.1%，符合規(guī)定。

2.2 阿莫地喹的含量

2.2.1 色譜條件 色譜柱，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料（安捷倫，4.6mm×15cm，5μm）；流動(dòng)相，甲醇—磷酸鹽緩沖液（取磷酸二氫鉀13.6g，加水溶解并稀釋成2 000mL，加高氯酸2.0mL，用磷酸調(diào)pH至2.5±0.5）（體積比22∶78）；流速1.0mL／min；檢測波長224nm；進(jìn)樣量20μL。

2.2.2 試驗(yàn)方法 供試品溶液的制備：精密量取青蒿琥酯測定項(xiàng)下供試品溶液2mL置100mL量瓶中，加水稀釋至刻度，作為供試品溶液。

對照品溶液的制備：取阿莫地喹對照品約10 mg，精密稱定，置200mL量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，作為對照品溶液。

分別精密量取阿莫地喹對照品溶液和供試品溶液各20μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖和峰面積，以外標(biāo)法計(jì)算含量。典型圖譜如圖3和圖4所示。

圖3 阿莫地喹對照品溶液色譜圖Fig.3 HPLC of amodiaquine RS

圖4 阿莫地喹供試品溶液色譜圖Fig.4 HPLC of amodiaquine test solution

2.2.3 檢測波長的選擇 取阿莫地喹對照品適量用水溶解并稀釋制成含阿莫地喹50μg／mL的溶液，以PDA作為檢測器，在200～400nm的波長范圍內(nèi)繪制紫外吸收曲線。本品在224nm處有最大吸收，故而選擇224nm作為檢測波長。

2.2.4 線性關(guān)系考察 取含量測定項(xiàng)下的阿莫地喹對照品儲備液，用水稀釋成一系列質(zhì)量濃度的溶液，濃度梯度分別為25，40，50，60，75和100μg／mL，按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件檢測，以阿莫地喹質(zhì)量濃度（ρ）為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)（y），線性回歸得標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果表明，阿莫地喹在25.03～100.1 μg／mL質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好，線性回歸方程為y＝29 695ρ＋4 493.8，r＝0.999。

2.2.5 精密度試驗(yàn) 按“2.2.2”項(xiàng)下配制阿莫地喹對照品溶液和供試品溶液，按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件檢測，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄色譜圖。以峰面積計(jì)算RSD為0.4%（n＝6），小于2.0%，符合要求。

2.2.6 回收率試驗(yàn) 取處方量的輔料空白9份，置50mL量瓶中，分別精密加入阿莫地喹對照品40，50和60mg，各濃度平行3份，按“2.2.1”項(xiàng)下的色譜條件檢測。樣品中阿莫地喹含量以外標(biāo)法計(jì)算，得平均回收率為99.5%，RSD為0.2%（n＝9）。

2.2.7 定量限和檢測限試驗(yàn) 取阿莫地喹對照品溶液適量用流動(dòng)相逐級稀釋，按“2.2.1”項(xiàng)下的色譜條件測定，記錄色譜圖。按信噪比10∶1計(jì)算定量限，按信噪比3∶1計(jì)算檢測限。阿莫地喹定量限為14.1μg／mL，檢測限為4.70μg／mL。

2.2.8 樣品檢測 取阿莫地喹對照品溶液2份，色譜條件下各進(jìn)3針，再取供試品溶液2份，色譜條件下進(jìn)樣，記錄色譜圖，按外標(biāo)法計(jì)算含量，即得。本品3批阿莫地喹含量結(jié)果分別為98.7%，99.4%和99.6%，符合規(guī)定。

3 結(jié)論

本文采用反相高效液相色譜法測定青蒿琥酯和阿莫地喹的含量，生產(chǎn)時(shí)投料100%，3批中試產(chǎn)品含量結(jié)果在98.7%～100.1%之間，符合規(guī)定。方法學(xué)驗(yàn)證結(jié)果表明該方法簡單、快捷、靈敏、準(zhǔn)確，可有效測定本品含量。

［1］ 張洪，閆士君，張福明.高效液相色譜法測定青蒿琥酯的含量［J］.中國醫(yī)院藥學(xué)雜志，2012，32（1）：65－67.

［2］ 蘭文，朱迎軍，黃莉，等.RP－HPLC法測定鹽酸阿莫地喹片的含量及有關(guān)物質(zhì)［J］.中國藥品標(biāo)準(zhǔn)，2013，14（1）：15－17.

［3］ 周于祿，劉世坤，張杰，等.高效液相色譜法測定人血漿中阿莫地喹含量［J］.中國醫(yī)院藥學(xué)雜志，2006，26（2）：704－706.

［4］ 周海鈞.藥品注冊的國際技術(shù)要求（質(zhì)量部分）［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，2001：43.

［5］ 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典2010年版（二部）［M］.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005：附錄61－65.