張小舟，甄玉萍，高建偉，王 巖，裴世春,*

高分子微球免疫吸附劑的制備及其對黃曲霉毒素M1的吸附性能

張小舟1，甄玉萍2，高建偉2，王 巖2，裴世春2,*

（1.齊齊哈爾大學(xué)材料科學(xué)與工程學(xué)院，黑龍江 齊齊哈爾 161006；2.齊齊哈爾大學(xué)食品與生物工程學(xué)院，黑龍江 齊齊哈爾 161006）

制備用于牛乳中吸附黃曲霉毒M1的免疫吸附劑。以乙醇和水溶液為反應(yīng)介質(zhì)， 聚乙烯吡咯烷酮為分散劑，偶氮二異丁腈為引發(fā)劑，采用分散聚合法制備苯乙烯-甲基丙烯酸縮水甘油酯共聚物微球。利用微球表面的環(huán)氧基團(tuán)將抗黃曲霉毒M1的單克隆抗體固定在微球表面，獲得免疫吸附劑。制備的微球粒徑約為1.7 μm，微球中環(huán)氧基量在67.2%～71.6%之間，制備的免疫吸附劑對乳中黃曲霉毒素M1的吸附量達(dá)1.2 ?g/g以上。該免疫吸附劑對乳中黃曲霉毒素M1的選擇性吸附較好，是去除乳中黃曲霉毒素M1較理想的免疫吸附材料。

共聚物微球；黃曲霉毒素M1；免疫吸附劑；吸附

黃曲霉毒素M1（aflatoxin M1，AFM1）因其主要存在于乳中，因此最初也叫“牛奶毒素”，是由de Iongh等[1]發(fā)現(xiàn)后發(fā)表在1964年的Nature雜志上，隨著研究的深入發(fā)現(xiàn)AFM1是黃曲霉毒素B1（aflatoxin B1，AFB1）在體內(nèi)經(jīng)細(xì)胞色素P450系列酶的作用下經(jīng)羥基化所形成，一般認(rèn)為AFB1的羥基代謝物是毒素的解毒形式，然而AFM1不能被看作是AFB1的解毒產(chǎn)物，有許多實驗研究表明AFM1具有細(xì)胞毒性和致癌性，是目前影響乳制品安全性的重要有害物之一[2]。

AFM1耐高溫、穩(wěn)定性強，在乳制品的加工過程中通常無法通過高溫殺菌工藝直接去除，因此，目前還沒有通過直接技術(shù)手段去除乳中AFM1的污染的方法，控制乳中AFM1的措施只有采用嚴(yán)格的法定殘留限量標(biāo)準(zhǔn)和精密檢測技術(shù)來進(jìn)行，一旦超標(biāo)就需要將污染AFM1的乳液進(jìn)行銷毀，常造成巨大的經(jīng)濟損失。

由于黃曲霉在自然界普遍存在，并且對生長條件要求不高，谷物、油料作物及飼料是霉菌最易滋生之處，常造成AFB1污染，進(jìn)而通過食物鏈進(jìn)行轉(zhuǎn)移，因此間接控制乳中AFM1的方法主要是通過對飼料的嚴(yán)格管理降低哺乳動物攝入AFB1來進(jìn)行，但是即便是加強管理的同時采用了預(yù)防等補助措施也難以完全杜絕飼料、環(huán)境中的AFB1的污染，常有AFB1污染事件的發(fā)生及相關(guān)報告[3]，AFB1可通過通過飼料和水?dāng)z入轉(zhuǎn)移至哺乳動物體內(nèi)，攝入的AFB1可在哺乳動物體內(nèi)轉(zhuǎn)化為AFM1并通過乳汁排出，進(jìn)而造成乳品中AFM1的污染[4]，由于鮮乳在食用前及加工過程中不便于直接采用化學(xué)試劑、生物降解劑和輻射等方法去除乳中AFM1的污染，因此，利用高特異性單克隆抗體和特殊載體材料制備高效專一的體外免疫吸附劑，通過免疫吸附去除乳中AFM1的殘留是一個可以考慮的方法之一。

而作為生物固定化的載體，聚合物微球具有良好的機械強度，較大的比表面積、良好的單分散性以及穩(wěn)定性，且微球表面可以設(shè)計羥基[5]、羧基[6]、醛基[7]、環(huán)氧基[8]等多種功能基，可以用來與生物分子反應(yīng)從而實現(xiàn)化學(xué)鍵合[9]。因此可以利用聚合物微球作吸附劑的載體，將免疫活性抗體通過適當(dāng)?shù)姆椒ㄅ悸?lián)到載體上獲得固相免疫吸附劑，用于清除與免疫有關(guān)的致病因子以及各種毒素[10-13]。制備聚合物微球的材料有球形纖維素[14]、聚乙烯醇[15]、聚酰胺衍生物[16]以及硅膠殼聚糖[17]等，這些材料都是利用活潑的反應(yīng)基團(tuán)與生物分子偶聯(lián)制備免疫吸附劑。

甲基丙烯酸縮水甘油酯（glycidyl methacrylate，GMA）分子中含有活潑的環(huán)氧基團(tuán)，可與其他單體共聚制備聚合物微球材料。而聚合物微球上帶有的環(huán)氧基團(tuán)由于其與生物分子上的伯氨基具有反應(yīng)活性高、條件溫和、反應(yīng)速度快，是一種很好的固定生物分子的功能基[18]。本實驗利用分散聚合法制備了表面含有環(huán)氧基團(tuán)的單分散苯乙烯-甲基丙烯酸縮水甘油酯共聚物(poly(styrene-glycidyl methacrylate)，P（St-GMA））微球，用其作為載體，將抗AFM1單克隆抗體偶聯(lián)到聚合物微球上獲得固相免疫吸附劑，并對其吸附乳中AFM1的性能進(jìn)行了分析。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

苯乙烯、聚乙烯基吡咯烷酮、乙醇、偶氮二異 丁腈、1,4-二氧六環(huán)（均為分析純） 天津凱通化學(xué)試劑有限 公司；甲基丙烯酸縮水甘油酯 上海晶純試劑有限公司；黃曲霉毒素M1-牛血清白蛋白偶聯(lián)物（aflatoxin M1-bovine serum albumin conjugate，AFM1-BSA）、黃曲霉毒素M1美國Sigma公司；抗AFM1單克隆抗體為本實驗室自主開發(fā)。

1.2 儀器與設(shè)備

TENSOR 27傅里葉紅外光譜儀 德國Brucker光譜儀器公司；VICTOR X4多功能酶標(biāo)儀、Wahser400 96孔洗板機、NanoVue 100 微量紫外分光光度計 美國GE公司；超濾杯 美國密理博公司；S-4300掃描電鏡 日本日立公司；TDL-5型低速大容量離心機 常州中捷實驗儀器制造有限公司。

1.3 方法

1.3.1 P（St-GMA）微球的制備

將一定質(zhì)量的聚乙烯基吡咯烷酮（polyvinylpyrrolidone，PVP）加入一定質(zhì)量比的乙醇和水中，構(gòu)成分散體系。而后將分散體系加入有導(dǎo)氣管、冷凝管、溫度計的三頸瓶中，同時通入氮氣，在磁力加熱攪拌器中預(yù)分散30 min。而后先將溶有偶氮二異丁腈的苯乙烯（styrene，St）加入，30～40 min后再將一定質(zhì)量比的甲基丙烯酸縮水甘油酯滴入反應(yīng)體系，St∶GMA比值范圍為0.6～1.5（質(zhì)量比）。在70 ℃，一定轉(zhuǎn)速下反應(yīng)12 h，得到亮白色乳狀液。將此反應(yīng)體系于3 000～3 500 r/min離心10 min，得到白色沉淀。用乙醇和水分別洗滌沉淀物3 次以上，將此沉淀物于30～40 ℃條件下真空干燥，即得共聚微球產(chǎn)物。

1.3.2 P（St-GMA）微球中環(huán)氧基含量的測定

采用鹽酸-二氧六環(huán)法測定定環(huán)氧基團(tuán)的剩余濃度。該方法利用了鹽酸和環(huán)氧基之間的反應(yīng)，反應(yīng)消耗酸的同時產(chǎn)生氯乙醇。將一定質(zhì)量的聚合物微球溶解于1,4-二氧六環(huán)中，再加入過量的0.1 mol/L濃度的鹽酸，在30 ℃條件下攪拌反應(yīng)3 h。未反應(yīng)的鹽酸濃度用0.1 mol/L的氫氧化鈉溶液進(jìn)行滴定，以酚酞為指示劑。對每種樣品至少進(jìn)行5 次重復(fù)測定。

1.3.3 載體與抗體的偶聯(lián)

向裝有一定量P（St-GMA）微球的錐形瓶中分批加入用PBS配成1 ?g/mL的抗AFM1單克隆抗體溶液，置錐形瓶于4 ℃搖床中振蕩反應(yīng)，反應(yīng)過程中通過酶聯(lián)免疫法測定反應(yīng)液中殘留的抗AFM1單克隆抗體的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，當(dāng)抗體質(zhì)量分?jǐn)?shù)無變化時推斷為微球充分與抗體完成偶聯(lián)反應(yīng)。

1.3.4 靜態(tài)吸附

取已制備的免疫吸附劑和P（St-GMA）微球各6份，每份0.3 g， 分放于2 mL管中。加入預(yù)先制備好的0.5?g/L的AFM1牛奶溶液1.5 mL，室溫?fù)u床以140 r/min 反應(yīng)2 h。同時用不加任何吸附劑的6 支管加入1.5 mL 預(yù)先添加0.5 ?g/L的AFM1牛乳溶液振蕩作為對照。考慮到GB 2761—2011《食品中真菌毒素限量》中規(guī)定乳及乳制品中AFM1的殘留限量為0.5 ?g/kg，因此，靜態(tài)吸附實驗牛乳以國標(biāo)殘留限量值為參考值進(jìn)行。

1.3.5 動態(tài)吸附

將人為添加AFM1的牛乳、裝有免疫吸附劑的吸附柱、蠕動泵用硅膠導(dǎo)管按順序連接好，開啟蠕動泵進(jìn)行循環(huán)。牛乳添加AFM1后使其質(zhì)量濃度為1、5、20 ?g/L，吸附劑每份0.3 g，每份牛乳體積總量為30 mL，流動速率為2 mL/ min，使其完成一次吸附循環(huán)為15 min，并于0、15、30 min 時分別采集200 ?L樣品進(jìn)行測定。

1.3.6 酶聯(lián)免疫吸附測定AFM1

酶聯(lián)免疫吸附測定（enzyme-linked immune sorbent assay，ELISA）參照張園園等[19]進(jìn)行，取AFM1-BSA用PBS稀釋后包被液包被酶標(biāo)板，以5%脫脂奶粉溶液封閉，每孔加50 ?L抗AFM1單克隆抗體，再加入待測乳品50 ?L， 溫浴后以辣根過氧化物酶標(biāo)記的羊抗鼠IgG抗體及OPD顯色，加入終止液后測定OD值并計算吸附率。按下式計算吸附劑對AFM1的吸附率。

式中：A1為吸附前乳液測定的質(zhì)量分?jǐn)?shù)；A2為吸附后乳液測定的質(zhì)量分?jǐn)?shù)。

2 結(jié)果與分析

2.1 共聚微球的紅外光譜表征

圖1 P（St-GMA）微球紅外光譜圖Fig.1 FTIR analysis of P(St-GMA) composite particles

圖2 甲基丙烯酸縮水甘油酯紅外光譜圖Fig.2 FTIR analysis of GMA

圖3 苯乙烯紅外光譜圖Fig.3 FTIR analysis of St

由圖1可以明顯看出，共聚物含有甲基丙烯酸縮水甘油酯單體單元特征吸收峰：1 728 cm-1吸收峰為酯羰基特征峰，2 932 cm-1處吸收峰為側(cè)甲基的特征峰。同時，圖1中909 cm-1處和847 cm-1明顯的環(huán)氧吸收峰，證明了共聚微球中環(huán)氧基團(tuán)的存在。與圖2對比，圖1中1 638 cm-1處吸收峰消失。1 638 cm-1處吸收峰本為甲基丙烯酸縮水甘油酯中C＝C吸收峰，由此可知，說明甲基丙烯酸縮水甘油酯是以C＝C鍵參加反應(yīng)的。與圖3對比，圖1中3 000～3 100 cm-1處吸收峰保留，此為C—H鍵的伸縮振動；1 601 cm-1處有明顯吸收，此為苯環(huán)骨架振動吸收峰；這表明在反應(yīng)中苯環(huán)并未受影響。同時1 620～1 680 cm-1處圖1中無明顯吸收峰存在，說明在共聚微球中無C＝C鍵存在，苯乙烯也是以C＝C鍵參加反應(yīng)。

2.2 共聚微球的微觀形貌

用微量取樣器取無水乙醇稀釋樣品，振蕩形成懸浮，然后超聲約20 min。取一滴滴于取樣盤的導(dǎo)電紙片上，放置于培養(yǎng)皿中室溫干燥，用離子濺射法對樣品表面噴金后，采用掃描電子顯微鏡（scanning electron microscope，SEM）直接掃描（SEM測試的加速電壓為20.0 kV），觀察微球表觀的形貌。

圖4 P（St-GMA）微球SEM圖Fig.4 SEM images of P(St-GMA) composite particles

通過共聚物微球微觀形貌（圖4）可以得出，通過調(diào)控實驗條件，采用分散聚合法可成功制得粒徑可控、粒徑分布均勻的P（St-GMA）微球，微球的粒徑約為1.7 μm、球形規(guī)則、單分散性好。從實驗結(jié)果可知，當(dāng)分散劑PVP用量1.5%（反應(yīng)體系）、單體配比（質(zhì)量比，St∶GMA）1∶1、分散介質(zhì)乙醇和水比（質(zhì)量比）為95∶5、單體占反應(yīng)體系質(zhì)量比為15%、引發(fā)劑用量1.0%（單體）、攪拌速率300 r/min、反應(yīng)溫度70 ℃、共聚單體先后加入反應(yīng)12 h時，可獲得良好的聚合物微球。

2.3 共聚物微球表面環(huán)氧基團(tuán)的含量

表1列出了依據(jù)不同配方用分散共聚法制得的P（St-GMA）微球中環(huán)氧基的含量。環(huán)氧基含量的數(shù)據(jù)是以初始配方中的環(huán)氧基的物質(zhì)的量百分比來表示的。實驗數(shù)據(jù)表明，大部分的環(huán)氧基在共聚微球中得以保留。在本實驗中采用了同時加入單體和先加入苯乙烯單體，反應(yīng)30～40 min后再加入甲基丙烯酸縮水甘油酯的兩種單體加入方式。單體先后加入，苯乙烯先形成齊聚物，形成穩(wěn)定的成核中心，再加入甲基丙烯酸縮水甘油酯均勻包裹在苯乙烯核心之外，形成規(guī)則圓滑的共聚物微球，這樣使得甲基丙烯酸縮水甘油酯上的環(huán)氧基團(tuán)能夠保留在微球表面。從表1可以看出，隨著混合單體中甲基丙烯酸縮水甘油酯比例的增加，微球中的環(huán)氧基含量稍有改變，但是變化不大，這說明采用不同比例的單體加方式，其含量對微球表面的環(huán)氧基含量影響不大。而采用同時加入單體的方式，其環(huán)氧含量稍有下降但不明顯。這是因為，甲基丙烯酸縮水甘油酯是親水性單體，而苯乙烯是親油性單體，在反應(yīng)中由于采用的是乙醇與水的混合體系，因此親水性單體聚合后會鍵合在微球表面，因此微球表面的環(huán)氧基團(tuán)變化不大。

表1 P（St-GMA）微球中保留的環(huán)氧基含量Table 1 Epoxy group contents of P(St-GMA) composite particles

2.4 靜態(tài)免疫吸附性能

P（St-GMA）微球偶聯(lián)抗體的吸附劑的吸附率達(dá)到86.7%，對牛乳中AFM1的吸附率數(shù)據(jù)進(jìn)行兩組間t檢驗發(fā)現(xiàn)，以抗AFM1為配基的免疫吸附劑的吸附率顯著高于僅有載體P（St-GMA）微球的吸附率（P＜0.01）（表2），本實驗表明，P（St-GMA）微球?qū)θ橹械奈紸FM1作用有限，吸附乳中AFM1的功能主要在于固定在微球中的抗AFM1單克隆抗體。

表2 免疫吸附劑對牛乳中AFM1的吸附Table 2 Adsorption of immunoadsorbents for AFM1ine milk

免疫吸附技術(shù)已在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中用于特異性地吸附自身免疫病中的抗原、抗體或其他物質(zhì)等致病成分用于免疫治療的目的。王玉祥等[20]利用免疫吸附劑對致病性乙酰膽堿受體抗體的靜態(tài)吸附實驗表明，吸附率可達(dá)40.33%。金權(quán)鑫等[21]也進(jìn)行了類似的實驗，他們將人工合成的人乙酰膽堿受體為配基，固定于環(huán)氧氯丙烷活化后的球型纖維素上，制備出免疫吸附劑，其吸附率為26.59%，這些研究都為用于免疫治療提供了實驗參考依據(jù)。目前在食品加工領(lǐng)域利用免疫吸附技術(shù)吸附去除有害物質(zhì)的參考性文獻(xiàn)還很缺乏，但是本實驗利用免疫吸附劑對AFM1的吸附實驗表明，對超標(biāo)乳品中的AFM1吸附率可達(dá)86.7%，可有效去除乳中AFM1，因此，本實驗結(jié)果為液體食品中免疫吸附去除各種有害物質(zhì)研究及其相關(guān)產(chǎn)品的開發(fā)提供了基礎(chǔ)性實驗數(shù)據(jù)。

2.5 動態(tài)免疫吸附效能

以靜態(tài)吸附實驗為基礎(chǔ)，對吸附劑進(jìn)行動態(tài)免疫吸附效能的實驗結(jié)果表明，所制備的特異性免疫吸附劑對乳中AFM1的吸附率在1 次性循環(huán)中即可吸附80%以上的AFM1，吸附效率高，基本在15 min內(nèi)可完成吸附反應(yīng)，之后吸附率未見明顯變化，保持較為穩(wěn)定的狀態(tài)。

動態(tài)吸附實驗中，用于免疫吸附實驗的吸附劑質(zhì)量為0.3 g，牛乳體積為30 mL，牛乳溶液添加有5、10、20 ?g/L的AFM1，經(jīng)過循環(huán)動態(tài)吸附，吸附性能如圖5所示，添加5、10 ?g/L和20 ?g/L的牛乳中AFM1的吸附率分別是86%、92%和61%，通過計算表明，當(dāng)牛乳中質(zhì)量濃度超過20 ?g/L的AFM1時實驗用的吸附劑（0.3 g）吸附量已經(jīng)處于飽和狀態(tài)，無法繼續(xù)吸附，而對AFM1為10 ?g/L的牛乳中的吸附率為92%，因此，可以初步判斷制備的免疫吸附劑吸附AFM1的能力在1.2 ?g/g以上，具有較高的吸附性能，有望應(yīng)用于乳品中吸附去除AFM1技術(shù)提供一種新材料。

圖5 免疫吸附劑對牛乳中AFM1的吸附效能Fig.5 Absorption efficiency of the immunoadsorbent for AFM1in milk

3 結(jié) 論

利用分散聚合的方法合成了單分散的P（St-GMA）微球，這種微球可以通過表面的環(huán)氧基團(tuán)與抗AFM1單克隆抗體反應(yīng)，將抗體固定在微球表面，獲得特異性免疫吸附劑。免疫吸附劑在牛乳中對AFM1的吸附效果良好，利用單克隆抗體的免疫吸附技術(shù)在食品安全領(lǐng)域具有潛在的應(yīng)用前景。

[1] de IONGH H, VLES R O, van PELTN P V. Milk of mammals fed an aflatoxin-containing diet[J]. Nature, 1964, 202: 466-467.

[2] 張東升, 趙曉聯(lián), 趙春城, 等. 黃曲霉毒素M1的危害、污染現(xiàn)狀及檢測方法進(jìn)展[J]. 中國衛(wèi)生檢驗雜志, 2004, 14(3): 266-269.

[3] CREPPY E E. Update of survey, regulation and toxic effects of mycotoxins in Europe[J]. Toxicology Letters, 2002, 127(1/3): 19-28.

[4] FIRMIN S, MORGAVI D P, YIANNIKOURIS A, et al. Effectiveness of modified yeast cell wall extracts to reduce aflatoxin B1absorption in dairy ewes[J]. Journal of Dairy Science, 2011, 94(11): 5611-5619.

[5] 張榮榮, 徐自力, 李樹新. 表面富含羥基的單分散PS微球的制備與表征[J]. 材料科學(xué)與工藝, 2010, 18(5): 706-711.

[6] ZERAVIK J, SKRYJOVA K, NEVORANKOVA Z, et al. Development of direct ELISA for the determination of 4-nonylphenol and octylphenol[J]. Analytical Chemistry, 2004, 76(4): 1021-1027.

[7] XIAO Xiao, YANG Xu, LIU Ting, et al. Preparing a highly specific inert immunomolecular-magnetic beads for rapid detection and separation of S. aureus and group G Streptococcus preparation and characterization of polymer- coated core- shell structured magnetic microbeads[J]. Applied Microbiology and Biotechnology, 2007, 75(5): 1209-1216.

[8] DU Yongzhong, TOMOHIRO T, KODAKA M. Synthesis of hemispherical poly (2-hydroxylethyl methacrylate-co-methyl methacrylate)/poly (styrene-co-glycidyl methacrylate) composite particles with heterobifunctional groups by soap-free seeded emulsion polymerization[J]. Macromolecules, 2004, 37(3): 803-812.

[9] YOU Jian, HU Fuqiang, DU Yongzhong. Polymeric micelles with glycolipid-like structure and multiple hydrophobic domains for mediating molecular targetdelivery of paclitaxel[J]. Biomacromolecules, 2007, 8(8): 2450-2456.

[10] 鄒長軍. 球型纖維素固定Anti-HBsAg單克隆抗體制備免疫吸附劑[J].化學(xué)與生物工程, 2004(1): 32-33.

[11] MENG Qingbin, LI Zhanyong, LI Gang. Aggregation of biotinylated polymeric microspheres induced by interaction with avidin[J]. Pure Apply Chemical, 2007, 79(9): 1575-1582.

[12] NAKASHIMA T, ONO T. Effects of dispersion stabilizer and reaction solvent on forming monodisperse polystyrene microspheres by dispersion polymerization[J]. Colloid Polymer Science, 2008, 286: 1587-1592.

[13] 孟慶斌, 李湛勇, 李剛, 等. 用于固定抗體的新型溫敏性核-殼結(jié)構(gòu)聚合物微球的合成及其初步應(yīng)用研究[J]. 離子交換與吸附, 2007, 23(3): 193-198.

[14] 王永健, 王 連永, 俞耀庭. 類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎吸附劑的制備及間隔臂作用的研究[J]. 中國生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)報, 2005, 24(4): 486-491.

[15] 趙鈞, 李建平. 免疫球蛋白(IgG)吸附介質(zhì)的合成及性能[J]. 桂林工學(xué)院學(xué)報, 2008, 28(2): 200-204.

[16] 王永健, 劉鑒峰, 多佳, 等. 高配基吸附劑的制備新途徑[J]. 科學(xué)通報, 2005, 50(20): 2192-2194.

[17] 張玉玉, 王以明, 蔡國軍. 硅膠/殼聚糖吸附材料的制備及表征[J]. 地質(zhì)災(zāi)害與環(huán)境保護(hù), 2008, 19(3): 109-112.

[18] TOMOHIRO T, SAWADA J, SAWA C. Total analysis and purification of cellular proteins binding to cisplatin-damaged DNA using submicron beads[J]. Bioconjugate Chemistry, 2002, 13(2): 164-166.

[19] 張園園, 裴世春, 才琳, 等. 抗黃曲霉毒素M1單克隆抗體的制備及定量ELISA方法的建立[J]. 中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報, 2008, 30(10): 800-804.

[20] 王玉祥, 孟繁平, 俞耀庭, 等. 重癥肌無力特異性免疫吸附劑的制備及對患者血清的靜態(tài)吸附作用[J]. 中國神經(jīng)免疫學(xué)和神經(jīng)病學(xué)雜志, 2005, 12(2): 73-74.

[21] 金權(quán)鑫, 孫昌元, 李英信, 等. 重癥肌無力特異性免疫吸附劑的制備及對患者血清的動態(tài)吸附實驗[J]. 延邊大學(xué)醫(yī)學(xué)學(xué)報, 2009, 32(2): 79-82.

Preparation of Solid Polymer Microsphere Immune Adsorbent and Its Adsorption Performance for Aflatoxin M1

ZHANG Xiao-zhou1, ZHEN Yu-ping2, GAO Jian-wei2, WANG Yan2, PEI Shi-chun2,*
(1. College of Materials Science and Engineering, Qiqihar University, Qiqihar 161006, China; 2. College of Food and Biological Engineering, Qiqihar University, Qiqihar 161006, China)

In this paper, immune adsorbents were prepared for the adsorption of aflatoxin M1in milk. Copolymer microspheres of glyceryl methacrylate (GMA) and methyl methacrylate (MMA) were prepared using dispersion polymerization with azodiisobutyronitrile (AIBN) as initiator in aqueous ethanol medium in the presence of polyvinylpyrrolidone (PVP) as dispersant under various conditions. Anti-AFM1monoclonal antibody was coupled with the epoxy groups on the microsphere surface to form an immune adsorbent. The microsphere particle size was approximately 1.7 μm, and the quantity of epoxy group in the microspheres was between 67.2% and 71.6%. The adsorption quantity of monoclonal antibodies for aflatoxin M1in milk was more than 1.2 μg/g. These results show that the selective adsorption for aflatoxin M1in milk of the immune adsorbent is good. It can be an ideal immune adsorption material for the removal of aflatoxin M1in milk.

copolymer microspheres; aflatoxin M1; immune adsorbent; adsorption

TS252

B

1002-6630（2014）08-0304-05

10.7506/spkx1002-6630-201408061

2014-01-20

黑龍江省科技廳自然科學(xué)基金項目（C201225）

張小舟（1974—），女，副教授，博士，研究方向為吸附分離功能高分子材料。E-mail：zhangxzh-n@163.com

*通信作者：裴世春（1966—），男，教授，博士，研究方向為食品營養(yǎng)與安全。E-mail：peishichun@qqhru.edu.cn