孫建珍 王際英① 馬晶晶 李寶山 郝甜甜 孫永智 張利民

(1.上海海洋大學水產(chǎn)與生命學院 上海 201306;2.山東省海洋資源與環(huán)境研究院 山東省海洋生態(tài)修復(fù)重點實驗室 煙臺 264006)

脂肪為魚類生長發(fā)育提供能量和必需脂肪酸,是魚類必需的營養(yǎng)物質(zhì)。研究發(fā)現(xiàn),飼料中適宜脂肪水平可提高魚體生長性能(Chouet al,1996;Wanget al,2005);過低會造成必需脂肪酸缺乏,蛋白質(zhì)消耗過多,導(dǎo)致魚體生長緩慢,飼料利用率下降;過高則會抑制魚類生長,導(dǎo)致體內(nèi)脂肪過度蓄積(Duet al,2005;Pedroet al,2009)。

膽汁酸是膽汁的重要組成成分,是膽固醇代謝過程中產(chǎn)生的一系列固醇類物質(zhì)。膽汁酸具有較強的表面活性,能降低油水兩相間的表面張力,促進脂類乳化,擴大脂肪和脂肪酶的接觸面積,加速脂類的消化吸收(唐勝球等,2009)。研究表明,飼料中添加膽汁酸可以顯著提高日本鰻鱺(Anguilla japonica)(Maitaet al,1996)、異育銀鯽(Carassius auratus gibelio)(譚永剛等,2008)、軍曹魚(Rachycentron Canadum)(周書耘等,2010)等的生長并降低餌料系數(shù);提高日本鰻鱺(Maitaet al,1996)和牙鲆(Paralichthys olivaceus)(Alamet al,2001)脂肪酶活性,促進脂肪代謝;降低羅氏沼蝦(Macrobrachium rosenbergii)(馬俊霞等,2008)肝臟脂肪沉積,減少脂肪肝的發(fā)生(Pieterset al,1991)。目前,膽汁酸作為一種降脂因子,在養(yǎng)殖業(yè)上的應(yīng)用越來越廣泛。

大菱鲆(Scophthalmus maximus)屬鲆科(Bothidae)、菱鲆屬(Scophthalmus),生長迅速、肉味鮮美、經(jīng)濟價值高,是我國重要的海水養(yǎng)殖品種。有關(guān)膽汁酸在大菱鲆配合飼料中的研究報道較少且不夠系統(tǒng)(李勇等,2006)。本文以大菱鲆幼魚為實驗對象,在不同脂肪水平(10%和 18%)的配合飼料中分別添加 0%和1.5%的膽汁酸,研究膽汁酸對大菱鲆幼魚生長、體組成和脂肪代謝的影響,旨在為大菱鲆配合飼料中膽汁酸的應(yīng)用提供理論參考。

1 材料與方法

1.1 實驗設(shè)計及飼料制作

以魚粉、豆粕為蛋白源,魚油為脂肪源,使飼料配方中粗蛋白含量為47%,粗脂肪含量分別為10%和18%。在每個脂肪水平下分別添加 0%、1.5%的膽汁酸(以玉米淀粉為載體,純度為 20%,山東龍昌動物保健品有限公司),配制成4種等氮飼料,并分別命名為D1、D2、D3和D4。實驗飼料配方和營養(yǎng)組成見表1。

所有原料粉碎過 80目篩,營養(yǎng)成分分析后,依據(jù)飼料配方,采用逐級擴大法混勻后,加入魚油及適量蒸餾水再次混合均勻,經(jīng)螺旋擠壓機加工成直徑為2.5mm的硬顆粒飼料,自然風干后置于–20°C冰箱保存待用。

1.2 飼養(yǎng)管理

養(yǎng)殖實驗在山東省海洋資源與環(huán)境研究院海水循環(huán)系統(tǒng)內(nèi)進行。大菱鲆幼魚購自蓬萊宗哲養(yǎng)殖有限公司,實驗魚在養(yǎng)殖系統(tǒng)中馴養(yǎng)2周,馴養(yǎng)期間投喂大菱鲆商品飼料(山東升索漁用飼料研究中心,粗蛋白 50%,粗脂肪 12%)。兩周后挑選規(guī)格整齊、體質(zhì)健壯,平均體重為(45.78±0.11)g的幼魚360尾,隨機分為4組,每組3個重復(fù),每個重復(fù)30尾魚,養(yǎng)殖實驗持續(xù)8周。

水質(zhì)條件:水溫 16—18°C,溶氧＞7.0mg/L,氨氮濃度＜0.05mg/L。光照周期為12h光照 :12h黑暗。實驗期間每天飽食投喂兩次(08:00,16:00),日投喂量為魚體重 1.5%左右,根據(jù)魚體生長情況調(diào)整投喂量,投喂30min后從排水口將殘餌排出,記錄殘餌數(shù)量。

1.3 樣品采集

飼養(yǎng)實驗結(jié)束后禁食 24h,稱每桶魚總重,計算增重率。每桶隨機取12尾魚,用MS-222麻醉后測量體長、體重,計算肥滿度。隨機取3尾用作全魚樣本,剩余9尾尾靜脈取血,血樣在4°C靜置4h后,4°C條件下 4000r/min離心 10min,吸取上層血清放置在–80°C超低溫冰箱中保存待測。取血后分離出肝胰臟并稱重,計算肝體比;取背部肌肉,用于常規(guī)成分和脂肪酸的分析;所有樣品均于–80°C保存?zhèn)溆谩?/p>

表1 實驗飼料配方及營養(yǎng)組成(%干物質(zhì))Tab.1 Formulation and nutrient composition of the experimental diets(%,DW)

1.4 測定指標與方法

1.4.1 生長性能

式中,Wo為實驗開始時魚體重量(g),Wt為實驗結(jié)束時魚體重量(g),Wh為肝胰臟重量(g),F為攝食量(g),d為養(yǎng)殖周期(d),CP為飼料粗蛋白。

1.4.2 常規(guī)成分測定 水分采用 105°C 烘干恒重法測定(GB/T6435-2006);粗蛋白采用杜馬斯燃燒法測定(LECO FP-528);粗脂肪采用索氏抽提法測定(GB/T6433-2006);粗灰分采用 550°C 灼燒法(GB/T6433-2007);能量采用氧彈儀燃燒法測定(PARR 6100)。

1.4.3 血清和肝臟生化指標 血清中的甘油三酯(TG)、總膽固醇(TCHO)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)和谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)均采用全自動生化分析儀(日立,7020)測定,試劑盒購于北京利德曼生化股份有限公司。

脂肪酶(LPS)采用聚乙烯醇橄欖油乳化液水解法測定,肝臟蛋白采用考馬斯亮藍法測定。肝脂酶(HL)、脂蛋白脂酶(LPL)采用試劑盒(購自南京建成生物工程研究所)測定。

1.4.4 肌肉脂肪酸含量測定

(1) 分析樣品中總脂肪提取:參照 Folch等(1957)介紹的氯仿-甲醇法,脂肪甲酯化參考氫氧化鉀-甲醇酯化法(寇秀穎等,2005),略作改進,樣品經(jīng)皂化-甲酯化后供高效氣相色譜儀分析用。

(2) 色譜條件:日本島津GC2010氣相色譜儀

SP-2560氣相色譜柱:美國 SUPELCO公司,100m×0.25mm×0.2μm;

載氣:99.99%高純氮,氫氣 40mL/min,空氣400mL/min;

柱溫:240°C;氣化室溫度 260°C;分流比 90 :l;

氫離子火焰檢測器(FID),溫度260°C;

采用程序升溫法:起始溫度140°C,保持5min,以4°C /min升溫至240°C,并維持10min,進樣量為1μL。

(3) 脂肪酸鑒定:根據(jù)標準品氣相色譜出峰的保留時間,鑒定各種脂肪酸;采用峰面積歸一化法計算脂肪酸的相對百分含量。

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析

采用SPSS 16.0軟件對實驗所得數(shù)據(jù)進行雙因素方差分析(Two-way ANOVA),差異顯著時(P＜0.05),用 Duncan’s多重比較檢驗。統(tǒng)計數(shù)據(jù)均以平均值±標準差(Means±SD)表示。

2 結(jié)果

2.1 不同脂肪水平下添加膽汁酸對大菱鲆幼魚生長性能的影響

實驗期間各實驗組大菱鲆均未出現(xiàn)死亡。不同脂肪水平下添加膽汁酸對大菱鲆幼魚生長性能的影響見表2。如表2所示,隨著飼料脂肪水平升高,D3組與D1組相比 WGR、SGR、PER分別提高了 38.16%、26.03%和31.99%(P＜0.05),FCR降低了22.66%,HSI無顯著差異(P＞0.05);在不同脂肪水平下添加膽汁酸后,D2組與D1組相比大菱鲆幼魚WGR、SGR和PER分別提高了12.26%、8.96%和9.84%(P＜0.05),FCR、HSI分別降低了14.84%、40.97%(P＜0.05);D4組與D3組相比WGR、SGR和PER分別提高了8.38%、5.75%和5.16%(P＜0.05),HSI降低了 28.08%(P＜0.05),FCR無顯著變化(P＞0.05);但不同脂肪水平處理組間仍存在顯著差異,表現(xiàn)為D4組WGR、SGR、PER和HSI較D2組分別提高了33.41%、26.03%、26.36%和23.53%(P＜0.05),FCR 降低了17.43%(P＜0.05)。雙因素分析結(jié)果顯示,飼料脂肪和膽汁酸二者之間的交互作用對大菱鲆幼魚生長性能指標均無顯著影響(P＞0.05)。

表2 不同脂肪水平下添加膽汁酸對大菱鲆幼魚生長性能的影響Tab.2 Effects of bile acids on growth performance of juvenile turbot at different dietary lipid levels

2.2 不同脂肪水平下添加膽汁酸對大菱鲆幼魚體組成的影響

不同脂肪水平下添加膽汁酸對大菱鲆幼魚體組成的影響見表3。由表3可知,當飼料脂肪水平由10%升高至18%,未添加膽汁酸組(D1組,D3組)肝臟、背肌、全魚粗脂肪含量均有顯著升高(P＜0.05);全魚粗灰分含量有明顯下降趨勢(P＜0.05);而各組織水分及粗蛋白含量均未見有顯著變化(P＞0.05)。在各脂肪水平下添加膽汁酸可顯著降低全魚和背肌水分、粗脂肪含量(P＜0.05),顯著提高其粗蛋白含量(P＜0.05),但對肝臟粗脂肪及背肌粗灰分含量均無顯著影響(P＞0.05)。D4組全魚、背肌和肝臟粗脂肪含量顯著高于 D2組,但全魚粗灰分,肝臟水分、粗蛋白顯著低于 D2組(P＜0.05)。大菱鲆幼魚常規(guī)成分指標均不受飼料脂肪和膽汁酸二者之間的交互作用的影響(P＞0.05)。

表3 不同脂肪水平下添加膽汁酸對大菱鲆幼魚常規(guī)成分的影響(%)Tab.3 Effects of bile acids on proximate composition of juvenile turbot at different dietary lipid levels(%)

2.3 不同脂肪水平下添加膽汁酸對大菱鲆幼魚肌肉脂肪酸的影響

不同脂肪水平下添加膽汁酸對大菱鲆幼魚肌肉脂肪酸的影響見表4。由表4可知,隨著飼料脂肪水平升高,肌肉 SFA中僅 C17:0含量有顯著升高(P＜0.05)。飼料中添加膽汁酸可顯著提高肌肉C18:0含量(P＜0.05),飼料脂肪和膽汁酸二者之間的交互作用對C18:0含量存在顯著影響(P＜0.05),但均對SFA含量無顯著影響(P＞0.05);飼料脂肪水平對MUFA含量無顯著影響(P＞0.05),但對其中各主要脂肪酸含量(除C22:1n-7外)均有顯著影響(P＜0.05)。飼料膽汁酸能顯著影響肌肉MUFA及其C16:1n-7、C18:1n-9、C18:1n-7和C22:1n-9含量(P＜0.05)。飼料脂肪和膽汁酸二者之間的交互作用僅對C22:1n-9含量有顯著的影響(P＜0.05);飼料脂肪(C18:3n-6除外)和膽汁酸水平(C20:2n-9除外)對PUFA中各脂肪酸含量均有顯著影響,且二者之間的交互作用對 C18:2n-6、C18:3n-6、C20:3n-3、ARA、DPA含量和n-3/n-6比值均有顯著的影響(P＜0.05)。

2.4 不同脂肪水平下添加膽汁酸對大菱鲆幼魚血清生化指標的影響

不同脂肪水平下添加膽汁酸對大菱鲆幼魚血清生化指標的影響見表5。表中數(shù)據(jù)顯示,飼料脂肪和膽汁酸水平對血清 TG、TCHO、HDL-C、LDL-C含量及ALT、AST活性均有顯著影響(P＜0.05)。隨著飼料脂肪水平的升高,D3組血清TG、TCHO、HDL-C、LDL-C、ALT和AST均顯著高于D1組(P＜0.05)。在兩個脂肪水平下添加膽汁酸均能顯著降低以上指標,但 D4組仍顯著高于 D2組(P＜0.05)。TG、TCHO和HDL-C均受飼料脂肪和膽汁酸二者之間的交互作用的影響(P＜0.05)。

2.5 不同脂肪水平下添加膽汁酸對大菱鲆幼魚脂肪代謝酶的影響

表4 不同脂肪水平下添加膽汁酸對大菱鲆幼魚肌肉脂肪酸組成的影響(%總脂肪酸)Tab.4 Effects of bile acids on dorsal muscle fatty acid composition of juvenile turbot at different dietary lipid levels(%,total fatty acids)

表5 不同脂肪水平下添加膽汁酸對大菱鲆幼魚血清生化指標的影響Tab.5 Effects of bile acids on serum biochemical indices of juvenile turbot at different dietary lipid levels

不同脂肪水平下添加膽汁酸對大菱鲆幼魚脂肪代謝酶的影響見表6。由表可知,隨著飼料脂肪水平升高,D3組LPL、HL、TL和LPS活性顯著高于D1組(P＜0.05);在兩個脂肪水平下添加膽汁酸均可顯著提高以上脂肪代謝酶活性(P＜0.05),且D4與D2組間仍存在顯著差異(P＜0.05)。HL、TL活性均顯著受飼料脂肪和膽汁酸二者之間的交互作用的影響(P＜0.05)。

表6 不同脂肪水平下添加膽汁酸對大菱鲆脂肪代謝酶活性的的影響Tab.6 Effects of bile acids on lipid metabolism enzymes activities of juvenile turbot at different dietary lipid levels

3 討論

3.1 不同脂肪水平下添加膽汁酸對大菱鲆幼魚生長性能的影響

Nijhof(1993)研究發(fā)現(xiàn),飼喂含 16.90%脂肪的飼料,大菱鲆增重率和蛋白效率顯著高于飼喂 10.60%脂肪的飼料;Cho等(2005)報道,與6.90%脂肪的飼料相比,16.80%脂肪的飼料提高了大菱鲆生長和特定生長率。在本實驗中,18%脂肪水平組實驗魚WGR、SGR和 PER均顯著高于 10%脂肪水平組,略高于以上研究中大菱鲆飼料脂肪水平,這可能與實驗魚規(guī)格、飼料脂肪水平及脂肪源、實驗條件等因素有關(guān)。另外,本研究結(jié)果表明,在一定脂肪水平范圍內(nèi),大菱鲆幼魚生長性能隨飼料脂肪水平升高呈上升趨勢,與奧尼羅非魚(Oreochromis niloticus×Oreochromis aureus)(甘輝等,2009;林仕梅等,2010)和梭魚(Chelon haematocheilus)(張春暖等,2012)等的研究結(jié)果一致。

研究發(fā)現(xiàn),飼料中添加膽汁酸能有效提高虹鱒(Oncorhynchus mykiss)(頡志剛等,2002)、黃尾魚(Seriola aureovittata)(Deshimaluet al,1982)生長性能、降低飼料系數(shù)。與以上研究一致,本實驗結(jié)果顯示,在10%和18%脂肪水平下,添加膽汁酸均能顯著提高大菱鲆幼魚WGR、SGR和PER,降低FCR,但其提高程度因脂肪水平而異,18%脂肪水平組提高幅度小于 10%脂肪組,表明高脂肪組需要更多的膽汁酸參與脂肪乳化,加速脂類消化吸收,進而促進魚體生長(王繼強等,2009)。在本實驗中,未觀察到飼料脂肪和膽汁酸二者之間的交互作用對其生長性能指標有影響。

3.2 不同脂肪水平下添加膽汁酸對大菱鲆幼魚體組成和肌肉脂肪酸的影響

在本實驗中,大菱鲆幼魚全魚、肌肉和肝臟中脂肪沉積量均隨著飼料脂肪含量增加而增加,與軍曹魚(Wanget al,2005)和大菱鲆(S?theret al,2001;Leeet al,2003)等研究結(jié)果相一致。與本研究結(jié)果不同,Regost等(2001)報道隨著飼料脂肪水平的增加,大菱鲆全魚和肝臟中粗脂肪沉積量均有所增加,但肌肉粗脂肪含量變化不明顯;在兩個脂肪水平下添加膽汁酸均能顯著降低全魚、肌肉中粗脂肪含量,顯著提高其粗蛋白含量,表明膽汁酸能促進脂肪分解供能,對蛋白質(zhì)具有節(jié)約作用,進而提高組織中蛋白沉積量。與本研究結(jié)果相吻合,林仕梅等(2003)報道,飼料中添加膽汁酸可以顯著提高異育銀鯽全魚粗蛋白含量。周書耘等(2010)研究發(fā)現(xiàn),添加膽汁酸能顯著提高軍曹魚全魚和肌肉粗蛋白含量。

本研究結(jié)果顯示,大菱鲆幼魚肌肉 n-3HUFA含量隨飼料脂肪水平升高呈上升趨勢,進一步驗證了Cho等(2005)的研究結(jié)果。王恒(2010)研究發(fā)現(xiàn),添加膽汁酸可降低羅氏沼蝦肌肉中PUFA和HUFA含量。與此一致,在本實驗中,兩個脂肪水平下添加膽汁酸均顯著降低了肌肉PUFA、n-3 PUFA、n-6 PUFA含量和 n-3/n-6比值,表明膽汁酸能較好地促進 PUFA在大菱鲆幼魚體內(nèi)的吸收和利用。

3.3 不同脂肪水平下添加膽汁酸對大菱鲆幼魚脂肪代謝的影響

在本實驗中,隨著飼料脂肪水平的升高,血清TG、TCHO、HDL-C、LDL-C含量呈上升趨勢,與胭脂魚(Myxocyprinus asiaticus)(王朝明等,2010)和梭魚(Chelon haematocheilus)(張春暖等,2013)等的研究結(jié)果相似。飼料中添加膽汁酸能顯著降低大菱鲆幼魚血清TG、TCHO、HDL-C和LDL-C含量,可能是因為膽汁酸可以通過提高極低密度脂蛋白核受體、載脂蛋白A-V和載脂蛋白C-Ⅱ的表達,促進TG的水解,進而降低血清TG含量(Sirventet al,2004);通過降低肝臟載脂蛋白A-Ⅰ的表達,減少高密度脂蛋白(HDL)中膽固醇的含量,最終降低血清TCHO水平(Massonet al,2005)。Boulias等(2005)研究表明,膽汁酸可以通過FXR-α途徑調(diào)控與HDL代謝相關(guān)的基因,被激活的 FXR-α可以通過誘導(dǎo) SHP表達上調(diào)肝細胞 HDL外向轉(zhuǎn)運載體和下調(diào)肝細胞內(nèi)攝 HDL載體,減少HDL的分泌,降低血清HDL-C的濃度。但郭永麗等(2008)對草魚(Ctenopharyngodon idella)的研究表明,外源膽汁酸能夠提高草魚血清中TG、TCHO、HDL-C和LDL-C含量。周書耘(2010)在軍曹魚的飼料中添加膽汁酸,提高了血液中TG和HDL-C的含量,降低了TCHO和LDL-C含量。本實驗結(jié)果與以上結(jié)論有一定差異,這可能與魚的種類、生長階段、食性及飼養(yǎng)條件等有關(guān)系,具體原因有待進一步研究。

谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)是肝細胞內(nèi)兩種重要轉(zhuǎn)氨酶。當肝細胞遭受破壞或細胞膜通透性增加時,血液中 AST和 ALT活性會顯著升高,可用于反映肝臟損傷情況(金芬芬等,2001;蔣永芳等,2005)。本研究中,AST、ALT隨飼料脂肪水平升高而升高,與奧尼羅非魚(甘輝等,2009)、草魚(汪開毓等,2012)的研究結(jié)果相似。但在兩個脂肪水平下,各膽汁酸處理組的AST、ALT活性均有顯著降低,表明膽汁酸對肝臟有一定保護作用,進而促進了營養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收。

脂蛋白脂酶(LPL)和肝脂酶(HL)是肝胰臟中參與脂肪降解的兩種關(guān)鍵酶,合稱總脂酶(TL)。LPL可將血液中的乳糜顆粒和極低密度脂蛋白攜帶的TG水解成甘油和脂肪酸(Wonget al,2002;Mukherjee,2003),控制其在各組織的含量,決定從飼料中攝入脂類的代謝途徑(Auwerxet al,1992;Zechner,1997)。HL在肝細胞中合成,可作為配體促進 LDL和乳糜顆粒殘粒進入肝細胞,并直接參與HDL-C的逆轉(zhuǎn)和HDL殘粒的分解(Choiet al,1998)。已有研究發(fā)現(xiàn),高脂肪水平可以誘導(dǎo)瓦氏黃顙魚肝臟LPL mRNA表達(鄭珂珂等,2010),增強梭魚肝臟 LPL、HL活性(張春暖等,2013)。在本實驗中,隨著飼料脂肪水平升高,大菱鲆幼魚LPL、HL和TL活性呈顯著升高趨勢,且在10%和 18%脂肪水平下添加膽汁酸均能顯著提高其活性,這可能是因為膽汁酸能通過增加載脂蛋白表達激活LPL(向梟等,2008)。同時還可通過乳化脂肪成乳糜顆粒,促進肝細胞 HL合成,且該作用隨飼料脂肪水平升高有增強趨勢。以上結(jié)果表明添加膽汁酸可以改善高脂水平下大菱鲆幼魚的肝臟功能(倪燕君等,1999;Wonget al,2002)。

脂肪酶是魚類消化食物中的脂肪所必需的。對真鯛(Pagrosomus major)(王重剛等,1998)、星斑川鰈(Platichthys stellatus)(Dinget al,2010)、奧尼羅非魚(Oreochromis niloticus×Oreochromis aureus)(黎軍勝等,2004)的研究表明,脂肪酶活性與飼料脂肪含量呈負相關(guān)。但本實驗中,實驗魚脂肪酶活性隨著飼料脂肪水平升高而升高,這可能與兩個實驗中所用實驗動物和脂肪梯度不同有關(guān)。研究發(fā)現(xiàn),膽汁酸能夠?qū)⑿∧c內(nèi)脂肪酶原激活為有活性的脂肪酶使其發(fā)揮作用,并能增強其活性(劉敬盛等,2010)。膽汁酸能使脂肪酶結(jié)合到甘油三酯的脂滴表面上且起催化作用,提高脂肪酶活性,促進脂肪消化。目前為止,仍未發(fā)現(xiàn)其它物質(zhì)可以替代膽汁酸對脂肪酶的這種橋梁和聯(lián)結(jié)作用(Romanski,2007)。Maita等(1996)研究發(fā)現(xiàn),添加膽汁酸可顯著增強日本鰻鱺脂肪酶活性。Alam等(2001)報道膽汁酸可以顯著提高牙鲆脂肪酶活性,進而促進脂肪代謝。與此一致,在本實驗中,添加膽汁酸可顯著提高大菱鲆幼魚腸道脂肪酶活性,進一步驗證了以上觀點。

4 結(jié)語

本研究結(jié)果表明,飼料脂肪和膽汁酸水平均可顯著影響大菱鲆幼魚生長性能、體組成及脂肪代謝等指標,但膽汁酸添加效果受飼料脂肪水平的影響。因此,不同脂肪水平下膽汁酸的適宜添加量以及飼料脂肪與膽汁酸的交互作用仍有待進一步研究。

馬俊霞,張勝鵬,李卓建等,2008.含膽汁酸制劑對羅氏沼蝦脂肪代謝的影響.全國動物生理生化第十次學術(shù)交流會論文摘要匯編.陜西楊凌:中國畜牧獸醫(yī)學會動物生理生化學分會,133—134

王 恒,2010.不同脂肪源及膽汁酸對羅氏沼蝦生長性能及脂肪酸組成的影響.揚州:揚州大學碩士學位論文,52—62

王重剛,陳品建,顧 勇等,1998.不同餌料對真鯛稚魚消化酶活性的影響.海洋學報,20(4):103—106

王繼強,龍 強,李愛琴等,2009.膽汁酸的生理功能及在養(yǎng)殖業(yè)的應(yīng)用研究進展.中國動物保健,(7):103—107

王朝明,羅 莉,張桂眾等,2010.飼料脂肪水平對胭脂魚生長性能、腸道消化酶活性和脂肪代謝的影響.動物營養(yǎng)學報,22(4):969—976

甘 輝,李堅明,馮光明等,2009.飼料脂肪水平對奧尼羅非魚幼魚生長和血漿生化指標的影響.上海海洋大學學報,18(1):35—41

向 梟,周興華,陳 建等,2008.飼料中脂肪含量對翹嘴紅鲌幼魚消化酶活性的影響.北京水產(chǎn),5:35—38

劉敬盛,楊玉芝,王君榮等,2010.膽汁酸的營養(yǎng)特性及其在家禽生產(chǎn)中應(yīng)用的研究進展.中國畜牧獸醫(yī),37(1):13—16

李 勇,王優(yōu)軍,王 雷等,2006.不同添加劑及其組合對大菱鲆生長性能與水環(huán)境的影響.飼料工業(yè),27(10):25—28

汪開毓,苗常鴻,黃錦爐等,2012.投喂高脂飼料后草魚主要生化指標和乙酰輔酶A羧化酶 1 mRNA表達的變化.動物營養(yǎng)學報,24(12):2375—2383

張春暖,王愛民,劉文斌等,2012.飼料脂肪水平對梭魚生長營養(yǎng)物質(zhì)消化及體組成的影響.江蘇農(nóng)業(yè)學報,28(5):1088—1095

張春暖,王愛民,劉文斌等,2013.飼料脂肪水平對梭魚脂肪沉積、脂肪代謝酶及抗氧化酶活性的影響.中國水產(chǎn)科學,20(1):108—115

林仕梅,葉元土,羅 莉,2003.膽汁酸添加劑對異育銀鯽生長的影響.廣東飼料,(3):14—15

林仕梅,羅 莉,2010.飼料脂肪水平和復(fù)合降脂因子對羅非魚生長性能和肝胰臟代謝、抗氧化指標的影響.動物營養(yǎng)學報,22(6):1585—1591

金芬芬,徐 團,秦圣娟等,2001.鎘對長江華溪蟹肝胰腺線粒體抗氧化酶活力和脂質(zhì)過氧化水平的影.水生生物學報,35(6):1019—1023

周書耘,2010.飼料中磷水平和添加膽汁酸對軍曹魚幼魚生長、體組成和肝臟組成的影響.廣州:中山大學碩士學位論文,46—48

周書耘,劉永堅,梁海鷗等,2010.飼料中添加膽汁酸對軍草魚生長及體組成的影響.南方水產(chǎn),8(1):20—25

鄭珂珂,朱曉鳴,韓 冬等,2010.飼料脂肪水平對瓦氏黃顙魚生長及脂蛋白脂酶基因表達的影響.水生生物學報,34(4):815—821

倪燕君,劉厚鈺,張順財?shù)?1999.肝酯酶、脂蛋白酯酶在脂肪肝發(fā)病中的作用.中華消化雜志,19(4):324—327

郭永麗,饒碧波,馬俊霞等,2008.外源膽汁酸對草魚生長、抗氧化能力及脂肪代謝的影響.全國動物生理生化第十次學術(shù)交流會論文摘要匯編.陜西楊凌:中國畜牧獸醫(yī)學會動物生理生化學分會,185—186

唐勝球,董小英,孫德文,2009.飼用添加劑膽汁酸的最新研究進展.廣東飼料,1:32—35

頡志剛,牛翠娟,2002.可利康對虹鱒生長的影響.飼料研究,(10):22—25

蔣永芳,曠暉峰,2005.慢性乙型病毒性肝炎患者血清 HBV DNA水平和谷丙轉(zhuǎn)氨酶與肝組織病理的關(guān)系.重慶醫(yī)科大學學報,30(4):578—580

譚永剛,魏文志,曾黨勝等,2008.飼料中添加膽汁酸對異育銀鯽生長性能的影響.廣東飼料,17(1):25—26

黎軍勝,李建林,吳婷婷,2004.飼料成分與環(huán)境溫度對奧尼羅非魚消化酶活性的影響.中國水產(chǎn)科學,11(6):585—588

Alam M S,Teshima S,Ishikawa Met al,2001.Methionine requirement of juvenile Japanese flounderParalichthys olivaceusestimated by the oxidation of radioactive methionine.Aquaculture Nutrition,7(3):201—209

Auwerx J,Leroy P,Schoonjans K,1992.Lipoprotein lipase:recent contributions from molecular biology.Critical Reviews Clinical Laboratory Sciences,29(34):243—268

Boulias K,Katrakili N,Bamberg Ket al,2005.Regulation of hepatic metabolic pathways by the orphan nuclear receptor SHP.The EMBO Journal,24:2624—2633

Cho S H,Lee S M,Lee J Het al,2005.Effect of dietary protein and lipid levels on growth and body composition of juvenile turbot(Scophthalmus maximusL) reared under optimum salinity and temperature conditions.Aquaculture Nutrition,11,235—240

Choi S Y,Goldberg I J,Curtiss L Ket al,1998.Interaction between ApoB and hepatic lipase mediates the uptake of ApoB-containing lipoproteins.Journal of Biological Chemistry,273(32):20456—20462

Chou B S,Shiau S Y,1996.Optimal dietary lipid level for growth of juvenile hybrid tilapia,Oreochromis niloticus×Oreochromis aureus.Aquaculture,143:185—195

Deshimalu O,Kuroki K,Yone Y,1982.Suitable levels of lipids and ursodeoxycholic acid in diet for yellowtail.Bulletin of Japanese Society of Scientific Fisheries,48:1265—1270

Ding L Y,Zhang L M,Wang J Yet al,2010.Effect of dietary lipid level on growth performance,feed utilization,body composition and blood chemistry of juvenile starry flounder(Platichthys stellatus).Aquaculture Research,41(10):1470—1478

Du Z Y,Liu Y J,Tian L Xet al,2005.Effect of dietary lipid level on growth,feed utilization and body composition by juvenile grass carp(Ctenopharyngodon idella).Aquaculture Nutrition,(11):139—146

Lee J K,Cho S H,Park S Uet al,2003.Dietary protein requirement for young turbot(Scophthalmus maximusL.).Aquaculture Nutrition,9:283—286

Maita M,Tachiki,Kaibar Aet al,1996.Pharmacological effect of ursodeoxycholic acid in juvenile eel.Nippon Suisan Gakkaisi,62(1):129—130

Masson D,Lagrost L,Athias Aet al,2005.Expression of the preguane X receptor in mice antagonizes the cholic acidmediated changes in plasma lipoprotein profile.Arteriosclerosis Thrombosis and Vascular Biology,25:2164—2169

Mukherjee M,2003.Human digestive and metabolic lipasesabrief review.Journal of Molecular Catalysis B:Enzymatic,22:369—376

Nijhof N,1993.Effects of Body Weight on Diet Requirements of Turbot(Scophthalmus maximus) with Special Reference to Feed Intake and Body Composition.In:Kaushik S J,Luquet P ed.Fish Nutrition in Practice.INRA,Paris,501—513

Pedro B,Beatriz O,Susana Cet al,2009.Dietary lipid level affects growth performance and nutrient utilization of Senegalese sole(Solea senegalensis) juveniles.British Journal of Nutrition,102:1007—1014

Pieters M N,Schouten D,Bakkerren H Fet al,1991.Selective uptake of cholesteryl esters from apolipoprotein-E-free high-density lipoproteins by rat parenchymal cells in vivo is efficiently coupled to bile synthesis.Biochemical Journal,280:359—365

Regost C,Arzel J,Cardinal L Met al,2001.Dietary lipid level,hepatic lipogenesis and flesh quality in turbot(Psetta maxima).Aquaculture,193:291—309

Romanski K W,2007.The role and mechanism of action of bile acids in the digestive system-bile acids in the liver and bile.Advances in Clinical and Experimental Medicine,16(6):793—799

S?ther B S,Jobling M,2001.Fat content in turbot feed:influence on feed intake,growth and body composition.Aquaculture Research,32:451—458

Sirvent A,Claudel T,Martin Get al,2004.The farnesoid X receptor induces very low density lipoprotein receptor gene expression.FEBS Lett,566:137—173

Wang J T,Liu Y J,Tian L Xet al,2005.Effect of dietary lipid level on growth performance,lipid deposition,hepatic lipogenesis in juvenile cobia(Rachycentron canadum).Aquaculture,249:439—447

Wong H,Schotz M C,2002.The lipase gene family.Journal of Lipid Research,43:993—999

Zechner R,1997.The tissue specific expression of lipoprotein lipase:implications for energy and lipoprotein metabolism.Current Opinion in Lipidolopy,8(2):77—88