王 樂，操國景，曹 杰

（1.中國農(nóng)業(yè)大學動物醫(yī)學院，北京 100193；2. 泰華施貿(mào)易（上海）有限公司，上海 200120）

碘泰牛乳頭消毒劑藥浴效果評價

王 樂1，操國景2，曹 杰1

（1.中國農(nóng)業(yè)大學動物醫(yī)學院，北京 100193；2. 泰華施貿(mào)易（上海）有限公司，上海 200120）

采集擠前藥浴前、擠前藥浴30s后、擠后藥浴前（脫杯后立即）、擠后藥浴10min、30min及60min的奶牛乳頭側(cè)壁及乳頭孔樣品，經(jīng)4～6個梯度稀釋后，采用3M細菌總數(shù)測試片進行細菌培養(yǎng)及計數(shù)，分析擠前、擠后乳頭藥浴液殺菌及抑菌效果，以評價不同稀釋比例的碘泰牛乳頭消毒劑擠前藥浴快速殺菌效果以及擠后藥浴殺菌和持續(xù)抑菌效果。結(jié)果表明，按1∶4～1∶6稀釋的碘泰牛乳頭消毒劑具有良好的擠前快速殺菌和擠后藥浴持續(xù)抑菌效果。

乳頭藥?。痪劬S酮碘；3M測試片；細菌總數(shù)

乳房炎是奶牛最常見疾病之一，也是引起牧場經(jīng)濟損失最嚴重的疾病之一。引起乳房炎的因素繁多復雜，其中由病原微生物引發(fā)的乳房炎約占發(fā)病總數(shù)的80～90%。乳頭表面污染的病原微生物可通過奶杯、擠奶員的手以及擦拭乳房用的毛巾等傳播，引發(fā)乳房炎。對奶牛乳頭進行擠奶前、后藥浴消毒，是預防乳房炎的重要措施之一。Moak（1916）首次報道利用松樹油稀釋液進行乳頭藥浴以控制無乳鏈球菌性乳房炎，但該方法當時并未引起重視。20多年后，Newbould 和 Barnum報道了采用碘伏或洗必泰進行奶牛乳頭藥浴以控制葡萄球菌性乳房炎的應用效果。此后乳頭藥浴才逐漸推廣，納入擠奶衛(wèi)生控制流程。Natzke（1977）的田間試驗表明，僅三種成分——洗必泰（0.5%）、碘制劑（0.5%，1%）和氯制劑（4%），可作為有效的乳頭藥浴液。鑒于氯制劑的揮發(fā)性與皮膚刺激性，目前國際上多使用碘制劑和洗必泰成分的藥浴液。

本試驗采用3M細菌總數(shù)測試片檢測奶牛乳頭皮膚及乳頭孔藥浴前后細菌總數(shù)的變化，評價不同稀釋濃度碘泰牛乳頭消毒劑快速殺菌以及持續(xù)抑菌效果。

1. 材料和方法

1.1 試驗動物及分組

本試驗在北京某規(guī)模化牛場進行。該牛場存欄1200頭，成母牛TMR飼喂，每天3次擠奶，2012年成母牛頭年單產(chǎn)11噸。牛場內(nèi)設有實驗室，可立即進行樣品的稀釋及細菌培養(yǎng)。

試驗組奶牛使用碘泰牛乳頭消毒劑進行乳頭藥浴，分為1∶4與1∶6兩個稀釋度試驗組（碘泰一組和碘泰二組）；對照組奶牛使用牧場現(xiàn)有某進口品牌藥浴液進行乳頭藥浴。奶牛擠后藥浴后，在采食通道站立1h。

擠前藥浴試驗選擇臨床健康泌乳牛6頭，隨機分為3組（碘泰一組2頭，碘泰二組2頭，對照組2頭），每組奶牛的各8個乳頭歸入試驗范圍，分別于藥浴前及前藥浴30s后進行皮膚拭子采樣。擠后藥浴試驗選擇臨床健康泌乳牛18頭，隨機分為3組（碘泰一組6頭，碘泰二組6頭，對照組6頭），為消除采樣過程中乳頭皮膚采樣后給后續(xù)試驗造成的誤差，將擠后藥浴試驗進一步分為4小組進行：碘泰一A1組、碘泰二A1組和對照A1組各8個乳頭進行0min-10min配對采樣；碘泰一A2組、碘泰二A2組和對照A2組各8個乳頭進行0min-30min配對采樣；碘泰一A3組、碘泰二A3組和對照A3組各8個乳頭進行0min-60min配對采樣。

1.2 試劑與用品

試驗組藥浴液：碘泰牛乳頭消毒劑，為10%聚維酮碘溶液（有效碘含量10000ppm），由泰華施貿(mào)易（上海）有限公司提供。

碘泰一組擠前、擠后藥浴液，碘泰用清水按1∶4稀釋后使用，工作液有效碘含量約為2000ppm；

碘泰二組擠前、擠后藥浴液，碘泰用清水按1∶6稀釋后使用，工作液有效碘含量約為1500ppm；

對照組藥浴液：為牧場現(xiàn)有某進口品牌碘伏產(chǎn)品（原液有效碘含量20000ppm）。擠前藥浴用清水按1∶1稀釋，工作液有效碘含量10000ppm；擠后藥浴使用原液，工作液有效碘含量20000ppm。

單包裝無菌棉拭子、PetrifilmTM細菌總數(shù)測試片（3M）、1.5mL無菌離心管、無菌盒裝槍頭等，購自北京蘭伯瑞生物技術(shù)有限公司。

1.3 樣品采集及檢測

采樣時間：擠前藥浴殺菌試驗，選取藥浴前及藥浴30s后兩個時間點進行樣品采集；擠后藥浴殺菌和抑菌試驗，奶牛擠完奶脫杯后立即采集樣品（0min），隨即進行擠后藥浴處理，并于擠后藥浴10min、30min和60min采集樣品。

表1 奶牛擠前、擠后藥浴前后乳頭孔及乳頭側(cè)壁細菌計數(shù)變化

采樣區(qū)域：每個乳頭選擇2個區(qū)域采樣（乳頭側(cè)壁1cm2區(qū)域和乳頭孔1cm2區(qū)域）。

采樣方法：使用一次性無菌棉拭子（無菌生理鹽水浸潤），在采樣區(qū)域擦拭5次，而后放入含有1.5mL無菌生理鹽水的滅菌離心管中充分洗脫，標記后置冰盒內(nèi)送實驗室。為消除采樣誤差，所有拭子均在各自含1.5mL無菌生理鹽水的滅菌離心管中浸潤，采樣后洗脫，確保離心管中最終生理鹽水中的細菌總數(shù)與采樣區(qū)域一致。

檢測方法：擠前藥浴前樣品進行6個梯度稀釋（10倍），擠前藥浴30s后樣品進行4個梯度稀釋（10倍）；脫杯后樣品進行6個梯度稀釋（10倍），擠后藥浴10min、30min和60min樣品進行4個梯度稀釋（10倍）。稀釋好的樣品分別取1mL垂直滴加在3M細菌總數(shù)測試片的中央處，壓板后置37℃培養(yǎng)箱加濕培養(yǎng)。所有樣品于采集后2h內(nèi)完成加樣培養(yǎng)，防止細菌在保存過程中增殖。

1.4 計數(shù)及評價方法

3M細菌總數(shù)測試片經(jīng)24h培養(yǎng)后，進行細菌總數(shù)計數(shù)。每個樣品選擇其最佳梯度（適宜計數(shù)范圍為菌落數(shù)25～250）計算細菌總數(shù)，統(tǒng)計殺菌和抑菌率。

2. 結(jié)果與分析

2.1 擠奶前藥浴快速殺菌效果

試驗顯示：碘泰一組奶牛乳頭藥浴30s后，對乳頭側(cè)壁及乳頭孔處的平均殺菌率達99.59%和99.38%；碘泰二組和對照組則分別為93.99%、89.53%和98.71%、97.33%（具體檢測數(shù)據(jù)請參見附表一）。三組均具有較好的快速殺菌效果，可滿足奶牛擠奶前乳頭藥浴需求。

從臨床使用效果比較，碘泰按1∶4稀釋后殺菌效率最強，可以滿足奶牛擠奶前藥浴需求；碘泰按1∶6稀釋后具有快速殺菌功效，可滿足環(huán)境及乳區(qū)特別是乳頭清潔的奶牛擠奶前藥浴需求；對照組用于擠奶前藥浴具有快速殺菌效果，但殺菌效率弱于碘泰按1∶4稀釋的溶液，這表明單質(zhì)碘產(chǎn)品有效碘釋放比聚維酮碘緩慢，提高工作液濃度并不能提高其快速殺菌效果，同時會增加牛奶中碘殘留風險。1500ppm及2000ppm的碘泰牛乳頭消毒劑均可滿足擠前藥浴的要求。

2.2 擠奶后藥浴殺菌及持續(xù)抑菌效果

碘泰一組擠后藥浴10min、30min和60min后，對奶牛乳頭孔的平均殺菌率分別為99.98%、99.90%和99.50%，對乳頭皮膚側(cè)壁的平均殺菌率分別為96.40%、96.02%和96.60%。碘泰二組擠后藥浴10min、30min和60min后，對奶牛乳頭孔的平均殺菌抑菌率分別為97.15%、95.42%和95.02%，對乳頭側(cè)壁皮膚的平均殺菌抑菌率分別為94.49%、90.89%和86.88%。對照組擠后藥浴10min、30min和60min后，對奶牛乳頭孔的平均殺菌抑菌率分別為99.72%、98.81%、98.73%，對乳頭側(cè)壁皮膚的平均殺菌抑菌率分別為97.09%、95.13%、94.75%。

三組藥浴液用于擠后藥浴殺菌和抑菌菌效果均較為理想，可持續(xù)保護開張的乳頭孔免受病原微生物侵入，但碘泰二組擠后藥浴60min時乳頭側(cè)壁的抑菌效果低于90%，考慮到試驗牛擠后處于站立狀態(tài)，而很多牛場擠后只能維持站立30min，或頸枷不足或損壞導致部分牛無法保證站立時間，抑菌效果可能無法保證，因此建議牧場環(huán)境或乳區(qū)衛(wèi)生狀況較差時應適當提高藥浴液濃度。另從經(jīng)濟性及乳頭皮膚的刺激性來看，有效碘濃度在2000ppm左右的碘泰牛乳頭消毒劑效果更佳，并且長期使用時，聚維酮碘較單質(zhì)碘的皮膚刺激性小，更為安全。

3. 討論

3.1 乳房炎的發(fā)生是由環(huán)境、微生物和奶牛機體三者關聯(lián)而發(fā)生，缺一不可。其中以擠奶廳操作及衛(wèi)生管理尤為重要。據(jù)統(tǒng)計，正確的乳頭藥浴可以降低約50%的乳房炎病例。其中擠前藥浴可快速殺滅乳頭表面病原微生物，降低傳染性乳房炎傳播風險并保障原奶微生物及體細胞指標。擠后藥浴可殺滅乳頭表面病原微生物且持續(xù)保護乳房以防止病原微生物侵入松弛的乳頭孔，減少新的乳房炎病例發(fā)生。此外，還應重視臥床和運動場的衛(wèi)生狀況，定期進行臥床及運動場清理消毒。

3.2 對于奶牛乳頭藥浴液的實際殺菌效果評價，按國標法要求應進行細菌分離培養(yǎng)及標準平板計數(shù)等操作，檢測方法繁瑣復雜，工作量極大，費時費力，且檢測結(jié)果可能存在較大誤差。3M Petrifilm法是一種區(qū)別于傳統(tǒng)方法的菌落總數(shù)測定方法, 目前已經(jīng)被廣泛應用于食品類檢測領域。其測定原理如下：3M Petrifilm 為預先制備好的培養(yǎng)基系統(tǒng),測試片上的培養(yǎng)基含有冷水可溶性凝膠和指示劑,菌落測試片中含有的指示染劑可使菌落顯示紅色。在接種樣品并經(jīng)過一定時間的培養(yǎng)后, 計數(shù)測試片所在區(qū)域紅色菌落的數(shù)量來判定樣品的菌落總數(shù)指標。

3.3 與單質(zhì)碘藥浴液產(chǎn)品相比，聚維酮碘（PVP-I）產(chǎn)品原液更穩(wěn)定，PVP增強了碘的殺菌能力，使聚維酮碘藥浴液用于擠前藥浴更快速、高效，且PVP-I具有長效緩釋作用，用于擠后藥浴殺菌保護作用更持久。

3.4 前藥浴30s后，各組奶牛乳頭皮膚仍有少數(shù)細菌殘存。因此最好使用無菌消毒紙進行藥浴后乳頭擦干，且后續(xù)擠奶操作仍應重視相關衛(wèi)生流程要求。脫杯后奶牛乳頭表面細菌數(shù)較高，說明擠奶結(jié)束后擠奶杯組內(nèi)襯表面細菌數(shù)也同樣較高，對于問題較嚴重的牧場，可采用過氧乙酸或碘伏稀釋溶液消毒擠奶杯組。

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