張文靜，李見(jiàn)春，朱 娜，王 秀，張 勁（蚌埠醫(yī)學(xué)院藥學(xué)系，安徽蚌埠 233030）

富馬酸喹硫平（Quetiapine fumarate）是一種新的非經(jīng)典抗精神疾病的藥物，屬苯二氮類(lèi)衍生物，結(jié)構(gòu)與氯氮平相似，臨床研究表明該藥是一種安全有效的抗精神病藥，與多種神經(jīng)遞質(zhì)受體有相互作用[1]。富馬酸喹硫平主要作用于5-羥色胺2受體和多巴胺的D1、D2、D4受體，不但對(duì)精神分裂癥的陽(yáng)性癥狀有效，對(duì)陰性癥狀也同樣有效[2]。富馬酸喹硫平最常見(jiàn)的不良反應(yīng)是中樞及外周神經(jīng)系統(tǒng)損害，發(fā)生率為20.7%[3]。因其錐體外系不良反應(yīng)發(fā)生率低，患者軀體不適感較輕微，患者耐受性及依從性較好[4]，其在改善患者的精神癥狀同時(shí)也大大提高了患者的生活質(zhì)量。富馬酸喹硫平起效時(shí)間快、不良反應(yīng)輕，目前已成為精神分裂癥與雙向情感障礙治療的一線用藥[5-6]。本實(shí)驗(yàn)采用反相高效液相色譜法對(duì)大鼠灌胃給予富馬酸喹硫平后不同時(shí)間點(diǎn)的血藥濃度進(jìn)行了測(cè)定，并對(duì)其體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)過(guò)程進(jìn)行了研究，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料

1.1 儀器

LC-20AD 二元高壓梯度高效液相色譜儀，包括SPD-10Avp紫外檢測(cè)器、CTO-20A柱溫箱、SIL-20AC自動(dòng)進(jìn)樣器（日本島津公司）；FC204電子天平（上海精密科學(xué)儀器有限公司）；XW-80A 微型渦旋混合儀（上海滬西分析儀器廠）；TG16-W 微量高速臺(tái)式離心機(jī)（長(zhǎng)沙湘儀離心機(jī)儀器有限公司，離心半徑：6.22 cm）。

1.2 藥品與試劑

富馬酸喹硫平原料藥（武漢大華偉業(yè)醫(yī)藥化工有限公司，批號(hào)：131228FM，純度：99.4%）；卡馬西平標(biāo)準(zhǔn)品（內(nèi)標(biāo)，中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：100142-201105，純度：99.7%）；甲醇、乙腈為色譜純；三乙胺、冰醋酸等試劑均為分析純。

1.3 動(dòng)物

健康成年SD清潔級(jí)大鼠，♀♂各半，體質(zhì)量（200±20）g，由上海杰思捷實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供，許可證號(hào)：SCXK（滬）2012-0006，合格證號(hào)：201000260051。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

[7]，確定色譜柱：Thermo C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動(dòng)相：甲醇-水（含0.5%三乙胺，冰醋酸調(diào)節(jié)pH 至6～8）（78 ∶22），流速：1 ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：289 nm；柱溫：45 ℃；進(jìn)樣量：20 μl。

2.2 給藥方法

取成年健康大鼠6只，♀♂各半，于實(shí)驗(yàn)前12 h 禁食不禁水。給藥前，先取空白血（0 h）并稱(chēng)體質(zhì)量，記錄后分別按40 mg/kg灌胃給予富馬酸喹硫平（劑量的選擇是根據(jù)大鼠按單位體質(zhì)量換算與人體臨床用藥的等效劑量）。于給藥后5、15、30、45 min 和1、1.5、2、4、6、8、12、24 h 靜脈采血約0.5 ml，將血樣置于1.5 ml EP 低分子肝素鈉離心管中，經(jīng)4 000 r/min 離心15 min，取血漿層，于－20 ℃超低溫冷凍儲(chǔ)藏，備用。

2.3 溶液的制備

精密稱(chēng)取富馬酸喹硫平原料藥12.5 mg，置于25 ml 量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，搖勻，即得質(zhì)量濃度為497 μg/ml的貯備液，至4 ℃冰箱保存?zhèn)溆?。臨用前，用甲醇將貯備液稀釋為所需質(zhì)量濃度的對(duì)照品溶液。精密稱(chēng)取卡馬西平標(biāo)準(zhǔn)品12.6 mg，置于25 ml量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，即得質(zhì)量濃度為502.488 μg/ml 的貯備液，用甲醇稀釋至7.851 μg/ml作為內(nèi)標(biāo)溶液。

2.4 血漿樣品的處理

精密量取20 μl 內(nèi)標(biāo)溶液（7.851 μg/ml）置于空白離心管中，氮?dú)獯蹈杉尤?00 μl血漿，渦旋30 s，再加入乙腈400 μl沉淀，渦旋3 min，4 000 r/min 離心10 min，取上清液，進(jìn)樣測(cè)定，按內(nèi)標(biāo)法計(jì)算血漿中富馬酸喹硫平的濃度。

2.5 方法專(zhuān)屬性考察

在色譜條件下，分別將空白血漿、空白血漿+對(duì)照品、對(duì)照品+內(nèi)標(biāo)、血漿樣品（給藥后45 min）+內(nèi)標(biāo)，處理后進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜。結(jié)果富馬酸喹硫平與內(nèi)標(biāo)的色譜峰分離良好，血漿樣品中的內(nèi)源性物質(zhì)對(duì)富馬酸喹硫平及內(nèi)標(biāo)的測(cè)定干擾不明顯，表明方法的專(zhuān)屬性良好，色譜圖見(jiàn)圖1。

圖1 高效液相色譜圖A.空白血漿；B.空白血漿+對(duì)照品；C.對(duì)照品+內(nèi)標(biāo)；D.血漿樣品+內(nèi)標(biāo)；1.富馬酸喹硫平；2.內(nèi)標(biāo)Fig 1 HPLC chromatogramsA.blank plasma；B.blank plasma+substance control；C.substance control+internal standard；D.plasma sample+internal standard；1.quetiapine fumarate；2.internal standard

2.6 標(biāo)準(zhǔn)曲線制備

取空白血漿200 μl，精密加入對(duì)照品貯備液，配制成富馬酸喹硫平質(zhì)量濃度分別為0.259、1.035、2.071、4.142、16.567、49.7 μg/ml的血漿樣品，按“2.4”項(xiàng)下方法處理后，進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜。方法學(xué)驗(yàn)證時(shí)間為3 d，以富馬酸喹硫平質(zhì)量濃度（x）為橫坐標(biāo)、其峰面積與內(nèi)標(biāo)峰面積之比（y）為縱坐標(biāo)，每日繪制1 條標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行分析。得回歸方程為：第1 天y＝5 116.8x+185.67（r＝0.999 9）；第2 天y＝5 934.4x－666.7（r＝0.999 6）；第3天y＝4 793.5x－263.91（r＝0.999 8）。結(jié)果表明，富馬酸喹硫平檢測(cè)質(zhì)量濃度的線性范圍為0.259～49.7 μg/ml，在血漿中的定量限為0.259 μg/ml。

2.7 回收率與精密度試驗(yàn)

取空白血漿200 μl，精密加入對(duì)照品貯備液，配制成富馬酸喹硫平質(zhì)量濃度分別為0.518、8.283、33.133 μg/ml的樣品血漿，按“2.4”項(xiàng)下方法處理后，進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜，根據(jù)內(nèi)標(biāo)法計(jì)算方法回收率和提取回收率。同日內(nèi)測(cè)定6 次考察日內(nèi)精密度，連續(xù)測(cè)定3 d考察日間密度度?；厥章试囼?yàn)結(jié)果見(jiàn)表1，精密度試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2。

表1 回收率試驗(yàn)結(jié)果（n＝3）Tab 1 Results of recovery test（n＝3）

表2 精密度試驗(yàn)結(jié)果（n＝6）Tab 2 Results of precision test（n＝6）

2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn)

配制富馬酸喹硫平質(zhì)量濃度分別為0.518、33.133 μg/ml的樣品血漿，按“2.4”項(xiàng)下方法處理，分別在處理后室溫下放置8 h、4 ℃下冷藏30 h 和處理前反復(fù)凍融3 次、長(zhǎng)期冷凍（處理前－20 ℃冷凍9、21 d）考察血漿樣品的穩(wěn)定性。結(jié)果0.518、33.133 μg/ml的樣品血漿處理后室溫放置8 h質(zhì)量濃度的RSD分別為6.67%、10.74%；4 ℃下冷藏30 h 的RSD 分別為10.38%、11.09%；處理前反復(fù)凍融3次后處理進(jìn)樣的質(zhì)量濃度的RSD 分別為13.21%、9.6%；長(zhǎng)期冷凍試驗(yàn)的質(zhì)量濃度的RSD分別為13.57%、10.28%（n均為6）。以上表明血漿樣品的穩(wěn)定性良好。

2.9 藥動(dòng)學(xué)考察

取“2.2”項(xiàng)下各時(shí)間點(diǎn)的血漿，按“2.4”項(xiàng)下方法處理后，進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜，根據(jù)內(nèi)標(biāo)法計(jì)算血藥濃度，繪制藥-時(shí)曲線，見(jiàn)圖2。

圖2 富馬酸喹硫平在大鼠體內(nèi)的藥-時(shí)曲線Fig 2 Plasma concentration-time curves of quetiapine fumarate in rats

將各時(shí)間點(diǎn)的血藥濃度代入DAS 2.0 藥動(dòng)學(xué)軟件進(jìn)行分析，結(jié)果顯示富馬酸喹硫平在大鼠體內(nèi)按一級(jí)動(dòng)力學(xué)消除，房室模型為二室模型。藥動(dòng)學(xué)參數(shù)結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 富馬酸喹硫平在大鼠體內(nèi)的的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)（，n＝6）Tab 3 Pharmacokinetic parameters of quetiapine fumarate in rat（，n＝6）

表3 富馬酸喹硫平在大鼠體內(nèi)的的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)（，n＝6）Tab 3 Pharmacokinetic parameters of quetiapine fumarate in rat（，n＝6）

3 討論

藥動(dòng)學(xué)參數(shù)結(jié)果表明，富馬酸喹硫平在大鼠體內(nèi)分布與消除都比較快，清除相對(duì)較慢；由V1/F較小提示其在體內(nèi)分布不廣泛[8]。

本實(shí)驗(yàn)建立了以卡馬西平為內(nèi)標(biāo)，用反相高效液相色譜法測(cè)定血漿中富馬酸喹硫平濃度的方法。與以往發(fā)表文獻(xiàn)[7，9]相比，文獻(xiàn)中血漿樣品處理均采用工序煩瑣的乙醚萃??；本方法采用的乙腈沉淀操作簡(jiǎn)單，該方法快速、準(zhǔn)確，色譜條件易得，樣品制備簡(jiǎn)便，試劑成本低廉，結(jié)果穩(wěn)定可靠，單個(gè)樣品測(cè)定所需時(shí)間適中，適用于富馬酸喹硫平治療常規(guī)血濃度監(jiān)測(cè)。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)對(duì)富馬酸喹硫平在大鼠體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)研究，為富馬酸喹硫平的藥效學(xué)和毒理學(xué)研究奠定了基礎(chǔ)，同時(shí)為富馬酸喹硫平進(jìn)一步的新藥開(kāi)發(fā)和臨床用藥提供了依據(jù)。

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