陳芬芬

湖北省恩施州動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所，湖北恩施 445000

幾種畜產(chǎn)品安全檢測(cè)技術(shù)簡(jiǎn)介

陳芬芬

湖北省恩施州動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所，湖北恩施 445000

隨著人民生活水平的提高，肉、蛋、奶等動(dòng)物性食品在人民膳食中所占的比例越來越高，如何吃的安全、食的放心是群眾關(guān)心的頭等大事，也給畜產(chǎn)品生產(chǎn)、加工及監(jiān)管人員提出了更高的要求。做好畜產(chǎn)品質(zhì)量安全監(jiān)測(cè)是確保動(dòng)物產(chǎn)品安全上桌前的重要環(huán)節(jié)，也是畜產(chǎn)品安全監(jiān)管工作的重要內(nèi)容。這就要求基層規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)和屠宰場(chǎng)在依法做好安全生產(chǎn)的同時(shí)，做好自檢，確保畜產(chǎn)品出場(chǎng)前安全；同時(shí)，畜產(chǎn)品安全監(jiān)管人員也要對(duì)各環(huán)節(jié)的畜產(chǎn)品進(jìn)行抽檢，確保全程畜產(chǎn)品的安全，這就需要一些簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、高效的畜產(chǎn)品檢測(cè)技術(shù)。目前檢測(cè)畜產(chǎn)品質(zhì)量安全的方法有很多，常用的包括免疫膠體金技術(shù)、酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定技術(shù)、放射免疫測(cè)定技術(shù)、熒光免疫分析技術(shù)、化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)、高效液相色譜分析技術(shù)等。下面就這幾種畜產(chǎn)品安全檢測(cè)技術(shù)進(jìn)行簡(jiǎn)要介紹，以供參考。

1 免疫膠體金技術(shù)

羅－蛋白偶聯(lián)物的結(jié)合。如果樣本中鹽酸克倫特羅含量大于3 ng/mL，檢測(cè)線不顯色，結(jié)果判為陽性；反之，檢測(cè)線顯紅色，結(jié)果判為陰性。

基層屠宰企業(yè)和畜產(chǎn)品安全監(jiān)管人員在用試紙條檢測(cè)“瘦肉精”時(shí)要注意以下幾個(gè)方面。一是使用前檢查試劑盒的組成是否齊全并核對(duì)名稱。不同的“瘦肉精”試劑盒不可混用。二是要正確儲(chǔ)存。應(yīng)于2～30℃干燥陰涼處保存，不得凍存。三是要檢查有效期。過期試劑盒不可使用。四是樣品處理。用干燥、潔凈的容器采集50 mL左右尿液，如果不立即檢測(cè)，尿樣在2～8℃冷藏可保存24 h，應(yīng)避免腐敗造成失效或污染。五是使用時(shí)將試劑盒恢復(fù)至室溫，嚴(yán)格按照說明書操作。六是結(jié)果判定。僅質(zhì)控區(qū)（C）出現(xiàn)1條紫紅色條帶為陽性；出現(xiàn)2條紫紅色條帶為陰性；質(zhì)控區(qū)（C）未出現(xiàn)紫紅色條帶，提示測(cè)試失敗或試紙已失效。七是出現(xiàn)陽性結(jié)果時(shí)應(yīng)用本卡復(fù)檢并做陽性對(duì)照試驗(yàn)，有條件的可同時(shí)用相同的ELISA試劑盒進(jìn)行復(fù)檢。

免疫膠體金技術(shù)是一種常用的標(biāo)記技術(shù)，是以膠體金作為示蹤標(biāo)志物應(yīng)用于抗原抗體的一種新型的免疫標(biāo)記技術(shù)。其優(yōu)點(diǎn)是方便、快速、成本低、應(yīng)用范圍廣、肉眼可判斷結(jié)果，便于基層使用和現(xiàn)場(chǎng)使用。目前該項(xiàng)技術(shù)在獸藥殘留、病原檢測(cè)、毒素檢測(cè)的定性分析等方面均已起到了積極作用，而在基層應(yīng)用最廣泛的免疫膠體金技術(shù)就是“瘦肉精”快速檢測(cè)卡。

本文以鹽酸克倫特羅（“瘦肉精”）為例來介紹一下其基本原理，應(yīng)用競(jìng)爭(zhēng)抑制免疫層析的原理，樣本中的鹽酸克倫特羅在流動(dòng)的過程中與膠體金標(biāo)記的特異性單克隆抗體結(jié)合，占據(jù)了抗體結(jié)合位點(diǎn)，從而抑制抗體和NC膜檢測(cè)線上鹽酸克倫特

2 酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定技術(shù)

酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（簡(jiǎn)稱ELISA），過程包括抗原（抗體）物理吸附在固相載體表面，并保持其免疫學(xué)活性；加待測(cè)抗體（抗原），再加相應(yīng)酶標(biāo)記抗體（抗原），生成抗原（抗體）-待測(cè)抗體（抗原）-酶標(biāo)記抗體的復(fù)合物；再與該酶的底物反應(yīng)生成有色產(chǎn)物，借助ELISA檢測(cè)儀計(jì)算抗體（抗原）的量。待測(cè)抗體（抗原）的量與有色產(chǎn)物成正比。該方法具有速度快、靈敏度高、樣品容量大、樣品前處理簡(jiǎn)單、儀器成本低、分析成本低等優(yōu)點(diǎn)，適用于基層養(yǎng)殖場(chǎng)、屠宰場(chǎng)或獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)，對(duì)初步分析動(dòng)物源性食品的獸藥殘留、霉菌毒素、微生物等方面的定性或半定量檢測(cè)具有重要作用。而基層最常用的就是用于畜產(chǎn)品中獸藥殘留的檢測(cè)，或判定畜產(chǎn)品是否含有“瘦肉精”等違禁藥物的檢測(cè)?，F(xiàn)在國(guó)際上比較重視的殘留藥物有抗生素類、激素類、磺胺類、呋喃類、喹諾酮類和轉(zhuǎn)基因類藥物。

具體操作中要注意以下幾個(gè)方面。一是ELISA檢測(cè)試劑盒要保存在2～8℃下，使用前從冰箱拿出充分恢復(fù)至室溫（18～25℃）；二是操作前仔細(xì)閱讀說明書和操作步驟，將每一步所需的試劑分類放好，切忌試劑混用；三是根據(jù)說明書上的反應(yīng)溫度調(diào)好可調(diào)控恒溫箱的溫度；四是樣品若有沉淀，要先進(jìn)行離心處理，取上清液進(jìn)行反應(yīng)；五是用加樣器加樣速度要快而準(zhǔn)，防止反應(yīng)板上的前后孔反應(yīng)時(shí)間相差太長(zhǎng)，造成誤差，影響檢測(cè)結(jié)果；六是洗板用水應(yīng)用高質(zhì)量的蒸餾水配制；七是若有標(biāo)準(zhǔn)曲線，最好加兩列標(biāo)準(zhǔn)液，加好陽性對(duì)照和陰性對(duì)照樣品；八是出現(xiàn)陽性結(jié)果時(shí)，應(yīng)利用本試劑盒加復(fù)孔重復(fù)驗(yàn)證。

3 放射免疫測(cè)定技術(shù)

放射免疫測(cè)定（RIA）技術(shù)是用放射性同位素作為標(biāo)記物，將同位素分析的靈敏性和抗原抗體反應(yīng)的特異性結(jié)合起來的一種標(biāo)記技術(shù)。該方法測(cè)定靈敏度高，結(jié)果準(zhǔn)確，適用性廣，速率較快，操作易自動(dòng)化。目前在畜產(chǎn)品安全檢測(cè)方面已應(yīng)用在人工合成激素、氯霉素等的檢測(cè)，但在使用時(shí)需要專門的儀器設(shè)備且價(jià)格昂貴，同時(shí)RIA測(cè)定還會(huì)產(chǎn)生不可忽視的放射性污染，基層使用較少。

4 化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)

化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)是將具有高靈敏度的化學(xué)發(fā)光測(cè)定技術(shù)與高特異性的免疫反應(yīng)相結(jié)合，用于各種抗原、半抗原、抗體、激素、酶、脂肪酸、維生素、藥物等的檢測(cè)分析技術(shù)。該技術(shù)是繼RIA、ELISA、熒光免疫分析之后發(fā)展起來的一項(xiàng)最新免疫測(cè)定技術(shù)，主要具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、試劑價(jià)格低廉、試劑穩(wěn)定且有效期長(zhǎng)、方法穩(wěn)定快速、檢測(cè)范圍寬、操作簡(jiǎn)單、自動(dòng)化程度高等優(yōu)點(diǎn)。可應(yīng)用于獸藥殘留、畜產(chǎn)品中微生物的測(cè)定等，但在畜產(chǎn)品安全檢測(cè)方面，這是一項(xiàng)新測(cè)定技術(shù)，還未在基層廣泛應(yīng)用。但由于其優(yōu)點(diǎn)眾多，隨著科技的發(fā)展和操作人員素質(zhì)的提高，其應(yīng)用于基層畜產(chǎn)品安全檢測(cè)指日可待。

5 高效液相色譜分析技術(shù)

高效液相色譜（HPLC）分析技術(shù)以液體為流動(dòng)相，采用高壓輸液系統(tǒng)，將具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩沖液等流動(dòng)相泵入裝有固定相的色譜柱，在柱內(nèi)各成分被分離后，進(jìn)入檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)試樣的分析。其優(yōu)點(diǎn)是專屬性好、選擇性強(qiáng)、檢測(cè)精確度較高，而且假陽性率低，目前主要應(yīng)用于磺胺類藥物、恩諾沙星、環(huán)丙沙星、沙拉沙星、達(dá)氟沙星等獸藥殘留的檢測(cè)。但是這種方法樣品處理時(shí)間長(zhǎng)、檢測(cè)過程繁瑣、需貴重儀器、需要專業(yè)人員操作，在實(shí)際應(yīng)用中受到一定的限制。

6 高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)

高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用（HPLC-MS）技術(shù)以液相色譜作為分離系統(tǒng)，質(zhì)譜作為檢測(cè)系統(tǒng)，經(jīng)純化后的樣品在液相色譜和質(zhì)譜部分經(jīng)過分離和離子化，經(jīng)由檢測(cè)器得到質(zhì)譜圖。該技術(shù)具有高分離能力、高選擇性、高靈敏度、能夠提供相對(duì)分子量和結(jié)構(gòu)信息的優(yōu)點(diǎn)，主要用于β-受體激動(dòng)劑、硝基呋喃類代謝物等物質(zhì)的確證檢測(cè)。這種方法同樣具有樣品處理時(shí)間長(zhǎng)、檢測(cè)過程繁瑣、需貴重儀器、需要專業(yè)人員操作等局限性，在基層應(yīng)用中受到一定的限制。

7小 結(jié)

綜上所述，免疫膠體金法和ELISA檢測(cè)法由于其操作簡(jiǎn)便和安全性高，是最適用于基層畜產(chǎn)品安全檢測(cè)的兩種技術(shù)，也已在基層獸醫(yī)檢測(cè)中得到廣泛應(yīng)用。但因其檢測(cè)準(zhǔn)確率和靈敏度存在一定的缺陷，可作為基層畜產(chǎn)品安全檢測(cè)的初步篩選方法。一旦樣品被上述兩種方法重復(fù)檢測(cè)為陽性，應(yīng)立即由官方獸醫(yī)按法定程序分裝動(dòng)物肉品、內(nèi)臟或動(dòng)物尿液樣品送農(nóng)業(yè)部指定的實(shí)驗(yàn)室用于確證法檢測(cè)。

2014-07-30

陳芬芬，女，1983年生，碩士，中級(jí)獸醫(yī)師。