陳芬芬

湖北省恩施州動物衛(wèi)生監(jiān)督所，湖北恩施 445000

幾種畜產(chǎn)品安全檢測技術(shù)簡介

陳芬芬

湖北省恩施州動物衛(wèi)生監(jiān)督所，湖北恩施 445000

隨著人民生活水平的提高，肉、蛋、奶等動物性食品在人民膳食中所占的比例越來越高，如何吃的安全、食的放心是群眾關(guān)心的頭等大事，也給畜產(chǎn)品生產(chǎn)、加工及監(jiān)管人員提出了更高的要求。做好畜產(chǎn)品質(zhì)量安全監(jiān)測是確保動物產(chǎn)品安全上桌前的重要環(huán)節(jié)，也是畜產(chǎn)品安全監(jiān)管工作的重要內(nèi)容。這就要求基層規(guī)模養(yǎng)殖場和屠宰場在依法做好安全生產(chǎn)的同時，做好自檢，確保畜產(chǎn)品出場前安全；同時，畜產(chǎn)品安全監(jiān)管人員也要對各環(huán)節(jié)的畜產(chǎn)品進行抽檢，確保全程畜產(chǎn)品的安全，這就需要一些簡便、準確、高效的畜產(chǎn)品檢測技術(shù)。目前檢測畜產(chǎn)品質(zhì)量安全的方法有很多，常用的包括免疫膠體金技術(shù)、酶聯(lián)免疫吸附測定技術(shù)、放射免疫測定技術(shù)、熒光免疫分析技術(shù)、化學發(fā)光免疫分析技術(shù)、高效液相色譜分析技術(shù)等。下面就這幾種畜產(chǎn)品安全檢測技術(shù)進行簡要介紹，以供參考。

1 免疫膠體金技術(shù)

羅－蛋白偶聯(lián)物的結(jié)合。如果樣本中鹽酸克倫特羅含量大于3 ng/mL，檢測線不顯色，結(jié)果判為陽性；反之，檢測線顯紅色，結(jié)果判為陰性。

基層屠宰企業(yè)和畜產(chǎn)品安全監(jiān)管人員在用試紙條檢測“瘦肉精”時要注意以下幾個方面。一是使用前檢查試劑盒的組成是否齊全并核對名稱。不同的“瘦肉精”試劑盒不可混用。二是要正確儲存。應(yīng)于2～30℃干燥陰涼處保存，不得凍存。三是要檢查有效期。過期試劑盒不可使用。四是樣品處理。用干燥、潔凈的容器采集50 mL左右尿液，如果不立即檢測，尿樣在2～8℃冷藏可保存24 h，應(yīng)避免腐敗造成失效或污染。五是使用時將試劑盒恢復至室溫，嚴格按照說明書操作。六是結(jié)果判定。僅質(zhì)控區(qū)（C）出現(xiàn)1條紫紅色條帶為陽性；出現(xiàn)2條紫紅色條帶為陰性；質(zhì)控區(qū)（C）未出現(xiàn)紫紅色條帶，提示測試失敗或試紙已失效。七是出現(xiàn)陽性結(jié)果時應(yīng)用本卡復檢并做陽性對照試驗，有條件的可同時用相同的ELISA試劑盒進行復檢。

免疫膠體金技術(shù)是一種常用的標記技術(shù)，是以膠體金作為示蹤標志物應(yīng)用于抗原抗體的一種新型的免疫標記技術(shù)。其優(yōu)點是方便、快速、成本低、應(yīng)用范圍廣、肉眼可判斷結(jié)果，便于基層使用和現(xiàn)場使用。目前該項技術(shù)在獸藥殘留、病原檢測、毒素檢測的定性分析等方面均已起到了積極作用，而在基層應(yīng)用最廣泛的免疫膠體金技術(shù)就是“瘦肉精”快速檢測卡。

本文以鹽酸克倫特羅（“瘦肉精”）為例來介紹一下其基本原理，應(yīng)用競爭抑制免疫層析的原理，樣本中的鹽酸克倫特羅在流動的過程中與膠體金標記的特異性單克隆抗體結(jié)合，占據(jù)了抗體結(jié)合位點，從而抑制抗體和NC膜檢測線上鹽酸克倫特

2 酶聯(lián)免疫吸附測定技術(shù)

酶聯(lián)免疫吸附測定（簡稱ELISA），過程包括抗原（抗體）物理吸附在固相載體表面，并保持其免疫學活性；加待測抗體（抗原），再加相應(yīng)酶標記抗體（抗原），生成抗原（抗體）-待測抗體（抗原）-酶標記抗體的復合物；再與該酶的底物反應(yīng)生成有色產(chǎn)物，借助ELISA檢測儀計算抗體（抗原）的量。待測抗體（抗原）的量與有色產(chǎn)物成正比。該方法具有速度快、靈敏度高、樣品容量大、樣品前處理簡單、儀器成本低、分析成本低等優(yōu)點，適用于基層養(yǎng)殖場、屠宰場或獸醫(yī)實驗室檢測，對初步分析動物源性食品的獸藥殘留、霉菌毒素、微生物等方面的定性或半定量檢測具有重要作用。而基層最常用的就是用于畜產(chǎn)品中獸藥殘留的檢測，或判定畜產(chǎn)品是否含有“瘦肉精”等違禁藥物的檢測。現(xiàn)在國際上比較重視的殘留藥物有抗生素類、激素類、磺胺類、呋喃類、喹諾酮類和轉(zhuǎn)基因類藥物。

具體操作中要注意以下幾個方面。一是ELISA檢測試劑盒要保存在2～8℃下，使用前從冰箱拿出充分恢復至室溫（18～25℃）；二是操作前仔細閱讀說明書和操作步驟，將每一步所需的試劑分類放好，切忌試劑混用；三是根據(jù)說明書上的反應(yīng)溫度調(diào)好可調(diào)控恒溫箱的溫度；四是樣品若有沉淀，要先進行離心處理，取上清液進行反應(yīng)；五是用加樣器加樣速度要快而準，防止反應(yīng)板上的前后孔反應(yīng)時間相差太長，造成誤差，影響檢測結(jié)果；六是洗板用水應(yīng)用高質(zhì)量的蒸餾水配制；七是若有標準曲線，最好加兩列標準液，加好陽性對照和陰性對照樣品；八是出現(xiàn)陽性結(jié)果時，應(yīng)利用本試劑盒加復孔重復驗證。

3 放射免疫測定技術(shù)

放射免疫測定（RIA）技術(shù)是用放射性同位素作為標記物，將同位素分析的靈敏性和抗原抗體反應(yīng)的特異性結(jié)合起來的一種標記技術(shù)。該方法測定靈敏度高，結(jié)果準確，適用性廣，速率較快，操作易自動化。目前在畜產(chǎn)品安全檢測方面已應(yīng)用在人工合成激素、氯霉素等的檢測，但在使用時需要專門的儀器設(shè)備且價格昂貴，同時RIA測定還會產(chǎn)生不可忽視的放射性污染，基層使用較少。

4 化學發(fā)光免疫分析技術(shù)

化學發(fā)光免疫分析技術(shù)是將具有高靈敏度的化學發(fā)光測定技術(shù)與高特異性的免疫反應(yīng)相結(jié)合，用于各種抗原、半抗原、抗體、激素、酶、脂肪酸、維生素、藥物等的檢測分析技術(shù)。該技術(shù)是繼RIA、ELISA、熒光免疫分析之后發(fā)展起來的一項最新免疫測定技術(shù)，主要具有靈敏度高、特異性強、試劑價格低廉、試劑穩(wěn)定且有效期長、方法穩(wěn)定快速、檢測范圍寬、操作簡單、自動化程度高等優(yōu)點?？蓱?yīng)用于獸藥殘留、畜產(chǎn)品中微生物的測定等，但在畜產(chǎn)品安全檢測方面，這是一項新測定技術(shù)，還未在基層廣泛應(yīng)用。但由于其優(yōu)點眾多，隨著科技的發(fā)展和操作人員素質(zhì)的提高，其應(yīng)用于基層畜產(chǎn)品安全檢測指日可待。

5 高效液相色譜分析技術(shù)

高效液相色譜（HPLC）分析技術(shù)以液體為流動相，采用高壓輸液系統(tǒng)，將具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩沖液等流動相泵入裝有固定相的色譜柱，在柱內(nèi)各成分被分離后，進入檢測器進行檢測，從而實現(xiàn)對試樣的分析。其優(yōu)點是專屬性好、選擇性強、檢測精確度較高，而且假陽性率低，目前主要應(yīng)用于磺胺類藥物、恩諾沙星、環(huán)丙沙星、沙拉沙星、達氟沙星等獸藥殘留的檢測。但是這種方法樣品處理時間長、檢測過程繁瑣、需貴重儀器、需要專業(yè)人員操作，在實際應(yīng)用中受到一定的限制。

6 高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)

高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用（HPLC-MS）技術(shù)以液相色譜作為分離系統(tǒng)，質(zhì)譜作為檢測系統(tǒng)，經(jīng)純化后的樣品在液相色譜和質(zhì)譜部分經(jīng)過分離和離子化，經(jīng)由檢測器得到質(zhì)譜圖。該技術(shù)具有高分離能力、高選擇性、高靈敏度、能夠提供相對分子量和結(jié)構(gòu)信息的優(yōu)點，主要用于β-受體激動劑、硝基呋喃類代謝物等物質(zhì)的確證檢測。這種方法同樣具有樣品處理時間長、檢測過程繁瑣、需貴重儀器、需要專業(yè)人員操作等局限性，在基層應(yīng)用中受到一定的限制。

7小 結(jié)

綜上所述，免疫膠體金法和ELISA檢測法由于其操作簡便和安全性高，是最適用于基層畜產(chǎn)品安全檢測的兩種技術(shù)，也已在基層獸醫(yī)檢測中得到廣泛應(yīng)用。但因其檢測準確率和靈敏度存在一定的缺陷，可作為基層畜產(chǎn)品安全檢測的初步篩選方法。一旦樣品被上述兩種方法重復檢測為陽性，應(yīng)立即由官方獸醫(yī)按法定程序分裝動物肉品、內(nèi)臟或動物尿液樣品送農(nóng)業(yè)部指定的實驗室用于確證法檢測。

2014-07-30

陳芬芬，女，1983年生，碩士，中級獸醫(yī)師。