陳文忠，徐國周

(昆明市東川區(qū)動物衛(wèi)生監(jiān)督所，云南 昆明 654100)

近年來，昆明市東川區(qū)碧谷鎮(zhèn)梅子村農戶飼養(yǎng)的黃牛相繼出現(xiàn)零星死亡。據(jù)流行病學、臨床癥狀和實驗室診斷，確診為金黃色葡萄球菌感染。經藥敏試驗，選用高敏藥物對患畜進行治療，對全村黃牛采取綜合防治措施，有效地控制了黃牛死亡和疫病的發(fā)生及擴散。連續(xù)3年的追蹤調查，已無黃牛猝死癥的發(fā)生，疫病得到有效控制。

1 發(fā)病情況

碧谷鎮(zhèn)梅子村地處半山區(qū)，較封閉和貧窮，飼養(yǎng)黃牛293頭。從出現(xiàn)第1頭黃牛突然死亡之后，連續(xù)2年間歇性地出現(xiàn)黃牛零星死亡，1個月內相繼死亡12頭，并不斷出現(xiàn)病畜。全村前后共發(fā)病89頭，死亡29頭，僅黃牛出現(xiàn)此病癥，呈零星散發(fā)，四季均可發(fā)生，但多于秋末和冬春季節(jié)發(fā)生，成年牛較幼牛多發(fā)，無性別差異。畜主細心者，發(fā)現(xiàn)牛食草減少或精神差，即請村獸醫(yī)治療，可治愈，否則待出現(xiàn)不食和頜下淋巴出現(xiàn)明顯腫脹(脖頸粗腫)癥狀、呼吸困難時報獸醫(yī)者，往往以死亡為轉歸。一般出現(xiàn)癥狀后幾小時或1～2 d即死亡。

2 臨床癥狀及剖檢

急性者往往無任何前期癥狀，于使役中或放牧后突然倒地，口吐白沫，耳梢、四肢冰涼，全身肌肉顫抖，四蹄蹬踢，來不及救治或于治療中死亡。有的前一天晚進食尚好，第二天早上死于廄中。

亞急性者，出現(xiàn)癥狀1～3 d后死亡，病程最長的一例達6 d死亡。體溫初期略高，38.0～38.5℃，后期正?；蚱汀Ａ飨?、廢食、反芻減少或停止，呼吸粗糲、急促，頜下淋巴腫大(最小有鵝蛋大)，四肢震顫，脖頸長伸，最后倒地，呼吸極度困難死亡。

3 實驗室檢驗

3.1 涂片檢驗

取病畜的脾、淋巴、肝、腎、血液觸涂革蘭氏染色鏡檢，見單個、短鏈或成堆的球形、卵圓形排列整齊的葡萄球菌，革蘭氏染色陽性。

3.2 細菌培養(yǎng)及鑒定

3.2.1 普通培養(yǎng)

無菌操作取肝、脾、淋巴制成乳液和混懸液，以鉑金耳取乳液、混懸液及血液分別劃線接種于營養(yǎng)瓊脂平板，牛血清培養(yǎng)基，置37℃，經24～48 h培養(yǎng)，檢查菌落，見幾種培養(yǎng)基均有灰白色至金黃色、不透明、邊緣整齊，大小在1～3 mm、光滑、具黏性和光澤、中央凸起的菌落生長。

3.2.2 分離和鑒定培養(yǎng)

無菌操作挑取單個典型菌落分別接種于新鮮羊血培養(yǎng)基、卻浦曼培養(yǎng)基、肉湯培養(yǎng)基進行分離及鑒定培養(yǎng)，經37℃，24～48 h，置需氧和厭氧環(huán)境中培養(yǎng)后觀察，見三種培養(yǎng)基上均有菌落生長，新鮮羊血平板上生長的菌落周圍呈β溶血環(huán)，卻浦曼培養(yǎng)基的顏色由紅色變?yōu)槌赛S色，肉湯培養(yǎng)基于14 h后呈現(xiàn)均勻渾濁，表面長有淡黃色薄菌膜，管底有少量沉淀。

3.2.3 血漿凝固酶和生化試驗

以滅菌吸管吸取0.5 mL肉湯培養(yǎng)菌液接種于2.5 mL兔血漿試管中，37℃水浴培養(yǎng)3～4 h，見紫紅色凝固塊，呈典型陽性反應。

生化試驗:分解葡萄糖、乳糖、麥芽糖，產酸不產氣，發(fā)酵甘露醇，還原硝酸鹽。

我們的團隊采用這種隧道內游離輸尿管方法，結合經典Wertheim手術的輸尿管內側入路法，找到輸尿管入膀胱“輸尿管末端”的解剖標志點，切除2 cm的膀胱宮頸韌帶，ligasure離斷子宮神靜脈和膀胱下靜脈的陰道支，解剖無血管區(qū)的膀胱陰道側間隙(paravesico vaginal space, PVVS；圖2)，完整向外推移輸尿管伴行，位于輸尿管下方的盆神經叢；子宮頸主韌帶暴露在直視下，切除3 cm宮旁組織。2011年11月11日上述技術成功后，我們在國際手術同行透明監(jiān)督下，由探索性研究，延推2期注冊登記的標準化臨床研究。

3.2.4 動物實驗

取0.5 mL肉湯培養(yǎng)液，行家兔耳靜脈接種(家兔來自東川區(qū)制藥廠實驗用健康兔，體重1.3 kg)。靜脈接種觀察:于10 h左右出現(xiàn)癥狀，34 h死亡，剖檢見肝、腎、心臟、淋巴結膿腫，取臟器和血液涂片，染色、鏡檢，見與上述感染和培養(yǎng)相同的革蘭氏陽性葡萄球菌。

3.2.5 結果

據(jù)細菌培養(yǎng)、分離、鑒定、生化試驗以及動物實驗，本次病樣檢驗結果為金黃色葡萄球菌感染。

4 防治

4.1 藥敏試驗

以紙片法進行藥敏試驗(藥敏試紙由昆明制藥股份有限公司生產，批號:20111105)。試驗結果:青霉素、鏈霉素、慶大霉素、SMZ(復方新諾明)高敏，抑菌圈＞15 mm。因此，青霉素、鏈霉素、慶大霉素、SMZ為首選治療藥物。

4.2 治療

對有輕微癥狀如精神沉郁、食草異常者，給予抗菌消炎、強心補液，采用青霉素、葡萄糖鹽水、安鈉咖，配合維生素C、維生素B1靜脈注射，每天1次，連用3 d?；蛘邞c大霉素、SMZ配合維生素B族，肌肉注射，每天2次，連用5 d。同時輔以消炎清熱中藥(知母、白頭翁、黃芩、黃柏、金銀花、莪術、白術等)灌服。對其他健康牛，加人工鹽抗生素舔飼，人工鹽每頭牛100～150 g、SMZ每千克體重0.01～0.02 g、羥氨芐青霉素每千克體重0.01～0.015 g，每天1次，連喂5 d，同時供給清潔飲水。

4.3 防控

全村用石灰乳進行廄舍、道路、環(huán)境消毒，發(fā)病戶用具、食槽用2%的燒堿消毒，糞便清除后堆積2個月以上使用。同槽健康畜采取人工鹽加抗菌素舔飼。加強牲畜飼養(yǎng)觀察，及時發(fā)現(xiàn)和處置感染個體。

4.4 追蹤調查

經2～3個療程的治療和保健，1個月內疫病得到有效控制。全村發(fā)病89頭，治愈60頭，治愈率67%，黃牛猝死癥停止發(fā)生。之后的3年內該村黃牛未再發(fā)生此病。

5 小結與討論

(1)據(jù)流行病學、臨床癥狀及實驗室系統(tǒng)檢驗結果，本次發(fā)生的黃牛猝死癥為金黃色葡萄球菌感染所致。金黃色葡萄球菌是致病菌，可產生多種毒素和酶，如溶血素、殺白血球素、凝固酶、溶纖維蛋白酶等，破壞機體細胞功能，干擾正常代謝，致機體出現(xiàn)膿腫病灶、敗血癥及中毒。據(jù)記載，金黃色葡萄球菌對牛一般只引起急、慢性乳房炎，本次致黃牛猝死，可能與細菌量及所分泌的毒素的毒力有關，在黃牛體質稍差的情況下，細菌毒素、敗血癥及頜下淋巴結急速腫脹等因素致呼吸困難，是引起猝死的主要因素。本次未作細菌毒力測定與分析，其原因有待進一步研究。

(2)對癥狀較緩和或早期發(fā)現(xiàn)的病畜，及時給予治療會收到良效。首選藥物為青霉素、鏈霉素、慶大霉素、土霉素、SMZ等進行交叉使用，輔以中藥進行消炎清熱效果更佳。同槽健康畜采取人工鹽加抗菌素舔飼，可防止疫病的發(fā)生。

(3)近幾年來，東川區(qū)家畜“猝死癥”時有發(fā)生，據(jù)已知病因有:一是炭疽桿菌、巴氏桿菌等細菌所致;二是食入鼠藥或其他毒物所致。本次檢出金黃色葡萄球菌引起家畜猝死，應予以重視。