袁學(xué)軍 陳忠蔭 范平杰 李艷麗

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4種方法對(duì)靈芝活性成分的提取效果及靈芝茶配方試驗(yàn)*

袁學(xué)軍 陳忠蔭 范平杰 李艷麗

（瓊州學(xué)院生物科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，海南 三亞 572000）

研究4種不同提取方法對(duì)靈芝提取液中活性成分靈芝蛋白、多糖、三萜的影響。試驗(yàn)結(jié)果顯示，2種溶劑提取的3種活性成分的含量均高于1種溶劑，且以先水提后醇提的效果最佳，不同提取方法之間存在極顯著差異。靈芝茶配方試驗(yàn)中以配方3（靈芝81%、羅漢果15%、砂仁2%、陳皮1%、山楂1%）的效果較好。

靈芝；活性成分；提取方法；靈芝茶配方

靈芝（）素有“仙草”之譽(yù)。靈芝的藥理成分非常豐富，包括靈芝多糖、靈芝多肽、三萜類、蛋白質(zhì)、生物堿等?！渡褶r(nóng)本草經(jīng)》和《本草綱目》都對(duì)靈芝的功效有詳細(xì)的極為肯定的記載。現(xiàn)代藥理與臨床實(shí)踐證實(shí)靈芝多糖是靈芝扶正固本，滋補(bǔ)強(qiáng)壯，延年益壽的主要成分，對(duì)人體具有雙向調(diào)節(jié)作用，所治疾病涉及心腦血管、消化、神經(jīng)、內(nèi)分泌、呼吸、運(yùn)動(dòng)等各個(gè)系統(tǒng)，尤其對(duì)治療腫瘤、肝臟病變及失眠功效十分顯著，且無毒副作用[1～4]。目前，國(guó)內(nèi)外學(xué)者已經(jīng)對(duì)藥用靈芝的活性成分如靈芝活性蛋白、靈芝多糖、靈芝三萜和靈芝酸等，栽培條件對(duì)靈芝活性成分的影響[5]，靈芝茶加工工藝[6，7]等進(jìn)行研究報(bào)道，但不同提取方式對(duì)靈芝茶藥用成分的影響尚未見報(bào)道。

1 材料與方法

1.1 試劑

葡萄糖由廣州化學(xué)試劑廠生產(chǎn)，熊果酸和香草醛由上海晶純?cè)噭┯邢薰旧a(chǎn)，牛白蛋白和考馬斯亮藍(lán)G25由國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司生產(chǎn)；活性炭、蒽酮、三氯甲烷、磷酸、冰乙酸、氯化鈉、硫酸銨、碳酸氫鈉、鹽酸、氫氧化鈉、無水乙醇、硫酸和高氯酸均為分析純。

1.2 方法

（1）靈芝混合液提取。方法1：5 g靈芝用50 mL純乙醇提取24 h，然后過篩（100目）；方法2：5 g靈芝用50 mL蒸餾水煮40 min，然后過篩；方法3：5 g靈芝先用25 mL純乙醇提取24 h，過篩后再用25 mL水煮40 min，過篩，2次提取液混合；方法4：5 g靈芝先用25 mL水煮40 min，過篩后再用25 mL純乙醇提取24 h，過篩，2次提取液混合。測(cè)各提取液蛋白質(zhì)、多糖及三萜含量。

（2）靈芝茶沖劑。靈芝茶配方見表1，按不同配方將靈芝、羅漢果、砂仁、山楂、陳皮等分別清理干凈，洗滌，在干燥箱內(nèi)60 ℃干燥24 h，粉碎過篩（篩孔直徑5.0 mm），浸提。觀察記錄各配方茶質(zhì)并測(cè)吸光值。

（3）測(cè)定方法。靈芝多糖的測(cè)定參照蒽酮-硫酸法[6]，用葡萄糖作的標(biāo)準(zhǔn)曲線為：=0.7622+0.0122，2=0.998。靈芝蛋白的測(cè)定參照考馬斯亮藍(lán)G-250法[6]，用牛血清蛋白作的標(biāo)準(zhǔn)曲線為：=0.6643+0.0009，2=0.999。靈芝三萜的測(cè)定參照直接光度法[7]，用熊果酸作的標(biāo)準(zhǔn)曲線為：=0.4144-0.01，2=0.9934。

（4）統(tǒng)計(jì)分析。用南京農(nóng)業(yè)大學(xué)王韶華教授發(fā)明的stst軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

表1 5個(gè)靈芝茶沖劑的配方

2 結(jié)果與分析

2.1 提取方法與靈芝提取液活性成分的關(guān)系

試驗(yàn)結(jié)果（表2）顯示：提取液中的蛋白質(zhì)、多糖和三萜含量4種提取方法間均存在極顯著差異，其中以處理4各成分含量較高，而處理1含量較低。得出：3種活性成分提取量，醇提法（處理1）高于水提法（處理2），水提與醇提混合法（處理3與4）高于單純的水提或醇提法，而先水提后醇提法（處理4）又高于先醇提后水提法（處理3）。

表2 不同提取方法對(duì)靈芝提取液活性成分的影響

注：不同小寫字母表示差異達(dá)0.05顯著水平，不同大寫字母表示差異達(dá)0.01顯著水平。

2.2 不同配方對(duì)茶質(zhì)的影響

試驗(yàn)結(jié)果（表3）顯示，靈芝茶5個(gè)配方，隨著靈芝組分的減少，湯色由褐色變?yōu)槲ⅫS，香氣由濃變淡，滋味由苦變甜，吸光值由大變小。綜合考慮茶的指標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)、活性成分含量和口感等因素，以配方3為佳。

表3 不同配方靈芝茶的茶質(zhì)及吸光值

注：吸光值代表活性成分的含量。

3 討論與結(jié)論

靈芝多糖、蛋白、三萜類化合物是靈芝的主要活性物質(zhì)，也是衡量靈芝質(zhì)量的重要指標(biāo)。不同提取方法對(duì)靈芝提取液的活性成分影響尚未見報(bào)道。由于蛋白質(zhì)可分為水溶性、鹽溶性、有機(jī)溶性等，因此，用兩種溶劑提取的靈芝蛋白質(zhì)的含量高于單一溶劑，本實(shí)驗(yàn)的結(jié)果與此一致。三萜類物質(zhì)可分為水溶性（且更易溶于熱水）和易溶于有機(jī)溶劑（如乙醇等）兩種，所以用水和乙醇2種溶劑提取的靈芝三萜的含量也高于單一溶劑。

靈芝茶由于配方中的靈芝、羅漢果、砂仁、山楂、陳皮等五種成分均為中性，因此，藥用活性成分互不影響。同時(shí)這些成分具有促進(jìn)消化吸收和保健的功效，其中砂仁化濕開胃、溫脾止瀉、理氣安胎，山楂消積化滯、收斂止痢、活血化淤，陳皮理氣和中、燥濕化痰、利水通便，羅漢果清熱潤(rùn)肺、止咳利咽、滑腸通便。光澤、湯色、香氣、滋味等是鑒別茶優(yōu)劣的主要感觀指標(biāo)；而在滋味指標(biāo)中，綜合靈芝的特性、人們的生活習(xí)慣和藥用成分的含量等，以微苦為佳。

[1] YUE Qing-Xi, GUAN Shu-hong, et al. Interaction of Ganoderma triterpenes with docetaxel and cisplatin in cytotoxicity against human carcinoma cells [J]. Chinese Journal of Natural Medicines, 2008, 6 (5): 367-371.

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[6] 袁學(xué)軍, 陳忠蔭, 陳光宙, 等. 不同部位和顆粒大小對(duì)靈芝茶藥用成分的影響[J]. 中國(guó)食用菌，2013，32(3)：54-55.

[7] 袁學(xué)軍, 陳忠蔭，陳光宙, 等. 不同干燥方式和洗滌時(shí)間對(duì)靈芝茶活性成分的影響[J]. 中國(guó)食用菌, 2013, 32(4)：38-40.

三亞市試制項(xiàng)目（2013KS13），三亞重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室項(xiàng)目（L1210）

袁學(xué)軍（1967-），男，瓊州學(xué)院，副教授，主要從事菌物學(xué)、組織培養(yǎng)和遺傳轉(zhuǎn)化的工作。E-mail: yuanxuej@163.com。

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