蔣 雯，田吉來，丁晨靜，鞠 安，顧 寧

（東南大學(xué)生物科學(xué)與醫(yī)學(xué)工程學(xué)院，江蘇南京211189）

·綜 述·

雙重修飾的主動靶向脂質(zhì)體研究進(jìn)展

蔣 雯，田吉來，丁晨靜，鞠 安，顧 寧

（東南大學(xué)生物科學(xué)與醫(yī)學(xué)工程學(xué)院，江蘇南京211189）

主動靶向脂質(zhì)體是靶向遞藥體系的一個(gè)重要角色。由于傳統(tǒng)的單一基團(tuán)修飾的主動靶向脂質(zhì)體存在靶向效率不高、細(xì)胞攝取率不高等缺點(diǎn)，人們不斷探索采用兩種或多種不同識別分子或其他協(xié)同分子共同修飾脂質(zhì)體。本文擬針對雙重修飾脂質(zhì)體技術(shù)的研究進(jìn)展進(jìn)行綜述。通過對兩種特異性配體或抗體共同修飾、特異性配體與細(xì)胞穿透肽共同修飾、兩種細(xì)胞穿透肽共同修飾等不同類型的雙重修飾脂質(zhì)體的綜述分析，我們發(fā)現(xiàn)雙重修飾技術(shù)具有提高靶向準(zhǔn)確性和靶向效率，提高藥物攝取，提高對靶點(diǎn)的黏附能力和血流穩(wěn)定性等優(yōu)勢，尤其在跨膜穿越屏障系統(tǒng)的應(yīng)用中凸顯作用。

脂質(zhì)體；雙重修飾；主動靶向

脂質(zhì)體（liposome）是指由磷脂分子分散在水中形成的一個(gè)具有雙分子層結(jié)構(gòu)的包封一部分水相的類球狀微型囊泡。脂質(zhì)體以磷脂為膜材，具有很好的生物相容性，是一種具有廣闊應(yīng)用前景的載藥體系。但需要注意的是，由于脂質(zhì)體在體內(nèi)循環(huán)過程中容易被網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)（reticuloendothelial system，RES）識別為外來物質(zhì)并吞噬，常常難以達(dá)到理想效果。為克服這種障礙，須在脂質(zhì)體表面添加一層親水的惰性聚合物（如聚乙二醇［1］、泊洛沙姆［2］、殼聚糖［3］等），以減少血漿蛋白和脂質(zhì)體的調(diào)理作用，阻止脂質(zhì)體的凝集和聚合，避免網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)的吞噬，延長脂質(zhì)體在體內(nèi)的循環(huán)時(shí)間，達(dá)到長循環(huán)的效果，如目前效果較好且已經(jīng)實(shí)現(xiàn)市場化的聚乙二醇（PEG）化長循環(huán)脂質(zhì)體［4］。

為了實(shí)現(xiàn)脂質(zhì)體更高的靶向效率，通常會在其表面修飾識別基團(tuán)和特定的靶細(xì)胞相作用，從而促進(jìn)脂質(zhì)體或者藥物內(nèi)化，達(dá)到“主動靶向”的效果。常用的修飾基團(tuán)有單克隆抗體（mAb）、多肽、糖蛋白、維生素、碳水化合物等。利用靶細(xì)胞特異性表達(dá)某些物質(zhì)，將識別該物質(zhì)的配體修飾在脂質(zhì)體表面，就可以達(dá)到靶向定位的效果，將載藥脂質(zhì)體帶到特定的部位，從而使釋放的藥物更具針對性。這是常見的主動靶向脂質(zhì)體原理［5］。然而常常事與愿違，常用配體的受體都不只在一種細(xì)胞上表達(dá)，這也就意味著在脂質(zhì)體長循環(huán)過程中，不僅會在靶細(xì)胞處積累，也有可能在其他非靶細(xì)胞處（off－target cells）積累并造成傷害。單靶頭修飾的主動靶向載體也存在一些問題，如受體下調(diào)造成靶向效率下降［6］。為了提高靶向效率，人們又對原先的單一基團(tuán)修飾的脂質(zhì)體進(jìn)行了改進(jìn)，采用兩種不同類型的基團(tuán)修飾主動靶向的脂質(zhì)體。本文就近些年來雙重修飾脂質(zhì)體的進(jìn)展進(jìn)行綜述。

1 雙重修飾的主動靶向脂質(zhì)體類型

1.1 兩種特異性配體（specific ligand）修飾脂質(zhì)體 根據(jù)靶細(xì)胞通常不只特異性表達(dá)一種物質(zhì)，則可以從概率學(xué)角度進(jìn)行篩選，利用多種特異性配體識別定位靶細(xì)胞，以減少對非靶細(xì)胞的識別。目前嘗試的多是用兩種特異性配體進(jìn)行修飾［7，8］。

Laginha等［9］采用Alexa Fluor350和532熒光團(tuán)標(biāo)記單克隆抗體（mAb），利用熒光測定法定量確定脂質(zhì)體表面抗體密度。根據(jù)B淋巴瘤細(xì)胞過度表達(dá)CD19和CD20，研究分4實(shí)驗(yàn)組進(jìn)行：表面具有相同單抗密度的僅anti－CD19－mAb修飾的脂質(zhì)體，僅anti－CD20－mAb修飾的脂質(zhì)體，anti－CD19－mAb和anti－CD20－mAb共同修飾的脂質(zhì)體，以及anti－CD19－mAb修飾和anti－CD20－mAb修飾按照1∶1組成的脂質(zhì)體混合物。體外結(jié)果表明：后兩組的細(xì)胞結(jié)合和攝取量相似，均比前兩組僅用一種抗體修飾的脂質(zhì)體的多。細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)則表明，包封有阿霉素（DXR）的第三組雙重修飾脂質(zhì)體比第四組混合脂質(zhì)體的細(xì)胞毒性更高。綜合結(jié)果說明雙重修飾的脂質(zhì)體能實(shí)現(xiàn)最佳的藥效。

Saul等［10］利用KB細(xì)胞過度表達(dá)葉酸受體（folate receptor，F(xiàn)R）和表皮生長因子受體（Epidermal growth factor receptor，EGFR）以及利用葉酸和anti－EGFR－mAb（mAb225）同時(shí)修飾脂質(zhì)體，并包封阿霉素（DXR）以根據(jù)細(xì)胞毒性確定脂質(zhì)體的靶向選擇性。為了模擬體內(nèi)環(huán)境中存在的非靶細(xì)胞，將細(xì)胞表面的相應(yīng)的受體飽和而失去作用，實(shí)驗(yàn)事先利用過量葉酸、過量mAb225和兩種混合物分別培養(yǎng)出3組KB細(xì)胞，并連同正常的KB細(xì)胞組，分別和雙重修飾脂質(zhì)體共同培養(yǎng)。實(shí)驗(yàn)表明雙重修飾的脂質(zhì)體只能靶向兩種受體都開放的靶細(xì)胞（正常KB細(xì)胞組），這就有力地證明了雙重修飾的脂質(zhì)體具有極高的靶向選擇性，實(shí)現(xiàn)的是靶向受體“交集”的效果，而非“并集”，也就降低了對其他非靶向細(xì)胞的作用。

但是上述實(shí)驗(yàn)均在體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中獲得，通常排除了脂質(zhì)體在體內(nèi)循環(huán)中遇到的調(diào)理作用等復(fù)雜情況，并忽略了體內(nèi)其他未知的非靶細(xì)胞對于脂質(zhì)體靶向的影響，而更多地只是關(guān)注靶細(xì)胞處的作用機(jī)理。所以后續(xù)又開展了很多體內(nèi)實(shí)驗(yàn)，并且進(jìn)一步驗(yàn)證了體外實(shí)驗(yàn)的結(jié)論。

Ying等［11］利用甘露醇和轉(zhuǎn)鐵蛋白同時(shí)修飾脂質(zhì)體，在體外血腦屏障（blood brain barrier，BBB）模型和動物體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中都實(shí)現(xiàn)了相比單一修飾脂質(zhì)體更好的細(xì)胞攝取率、靶向能力、抑制癌細(xì)胞增殖作用和抑制腫瘤生長作用，同時(shí)還成功地穿越了血腦屏障。該實(shí)驗(yàn)既展現(xiàn)了用以修飾脂質(zhì)體的配體的更多可能，又在體內(nèi)水平證明了兩種特異性配體修飾脂質(zhì)體的優(yōu)越性。

Murase等［12］在探究抗新生血管療法時(shí)（antineovascular therapy，ANET），通過PRD和NGR這兩種特異性結(jié)合的配體分別修飾和共同修飾的脂質(zhì)體在體外和體內(nèi)的對比試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，這三種脂質(zhì)體均比未加修飾的長循環(huán)脂質(zhì)體靶向新生血管效果更好，而雙重修飾的脂質(zhì)體又比單一修飾的脂質(zhì)體結(jié)合量更高，定位效果更好。相比于NGR單一修飾的脂質(zhì)體容易在脾臟中積累，雙重修飾的脂質(zhì)體更易于在血流中循環(huán)運(yùn)行，從而進(jìn)行對新生血管的靶向。所以雙重修飾的脂質(zhì)體對HUVEC的生長和增殖的抑制效果最佳，抗腫瘤效果最好。

以上的配體連在PEG長鏈上再連結(jié)在脂質(zhì)體上，是一種靶向和長循環(huán)加和的作用，兩種配體或抗體，相當(dāng)于脂質(zhì)體同時(shí)伸出的兩只爪子，將靶細(xì)胞抓得更牢固，抓的對象也更富選擇性，實(shí)現(xiàn)了脂質(zhì)體載藥的高效性和準(zhǔn)確性。

對特異性靶細(xì)胞受體的選擇通常考慮的因素有：受體在靶點(diǎn)處的過度表達(dá)程度或特異性表達(dá)程度；促進(jìn)細(xì)胞內(nèi)化的能力；脫落的可能性等［6］。而對雙重修飾的脂質(zhì)體，除了以上考慮之外，還應(yīng)該考慮不同受體和不同修飾配體之間的相互作用。比如，當(dāng)兩種靶細(xì)胞受體通過相同的內(nèi)吞途徑時(shí)，靶細(xì)胞對脂質(zhì)體的聯(lián)結(jié)和攝取能力應(yīng)當(dāng)是協(xié)同增強(qiáng)的；而當(dāng)兩種靶細(xì)胞受體介導(dǎo)的是不同的細(xì)胞攝取途徑時(shí)，靶細(xì)胞對脂質(zhì)體的攝取能力則可能是加和作用或者拮抗作用。又如，兩種配體同時(shí)修飾靶向同一種細(xì)胞表面受體時(shí)，就會存在競爭關(guān)系，并且由于細(xì)胞表面受體密度未變，其結(jié)合存在飽和性，使得雙重修飾并不能提高靶向效率。再如，兩種受體在生物體內(nèi)分布的交叉性，是否足以更準(zhǔn)確地指向目標(biāo)細(xì)胞。還有靶細(xì)胞表面兩種受體的空間關(guān)系，是否會因?yàn)榫嚯x過近而存在空間位阻導(dǎo)致結(jié)合脂質(zhì)體的困難，或者導(dǎo)致脂質(zhì)體的共價(jià)結(jié)合（即一個(gè)脂質(zhì)體結(jié)合兩個(gè)或多個(gè)受體）從而減少脂質(zhì)體的攝入量。這些考慮都讓雙重修飾脂質(zhì)體的靶向受體和修飾配體的選擇變得更加復(fù)雜和值得推敲。

1.2 特異性配體和細(xì)胞穿透肽（CPP）修飾脂質(zhì)體 細(xì)胞穿透肽（cell penetrating peptide，CPP），也稱為蛋白轉(zhuǎn)導(dǎo)域（protein transduction domain，PTD），是帶有正電荷的肽段，通常少于30個(gè)氨基酸，能在不對細(xì)胞造成傷害的情況下攜帶大分子進(jìn)入細(xì)胞，所以常運(yùn)用在靶向載藥體系中。而且由于CPP帶正電荷，所以能夠通過靜電相互作用而與細(xì)胞結(jié)合，但不具備特異性，不屬于特異性配體［13，14］。

Sharma等［15］將轉(zhuǎn)鐵蛋白和一種PR的CPP分別修飾在PEG鏈的末端，再連接到脂質(zhì)體表面，包裹質(zhì)粒DNA，結(jié)果顯示了其較未經(jīng)修飾的長循環(huán)脂質(zhì)體和僅用轉(zhuǎn)鐵蛋白修飾的長循環(huán)脂質(zhì)體具有更高的穿越血腦屏障的效率和DNA轉(zhuǎn)染率，可見細(xì)胞穿透肽發(fā)揮了重要的作用。Tanga等［16］類似地運(yùn)用轉(zhuǎn)鐵蛋白和TAT的CPP分別修飾在PEG鏈的末端，在連接到脂質(zhì)體上，同時(shí)提高了靶向準(zhǔn)確性和細(xì)胞攝取量。

由于CPP攜帶正電荷，其非特異性作用使其更容易在體內(nèi)循環(huán)過程中被吞噬，不利于長循環(huán)的效果，同時(shí)陽離子聚合物也會與陰離子表面的細(xì)胞膜作用造成紅細(xì)胞裂解和血紅蛋白的釋放，所以更理想的是CPP可以被連有特異性配體的親水長鏈掩蔽隱藏。上述實(shí)驗(yàn)中Sharma定量控制了CPP的用量，且轉(zhuǎn)鐵蛋白和PEG的負(fù)電荷已經(jīng)超過了CPP的中和量，所以不會造成溶血現(xiàn)象。而Tang的實(shí)驗(yàn)中則額外控制了PEG的不同長度，使CPP同樣能夠被更長鏈的PEG隱藏。

Takara等［17］將一種STR－R4的CPP包裹在脂質(zhì)體表面，再連上末端有NGR修飾肽的PEG鏈，NGR能夠識別腫瘤細(xì)胞過度表達(dá)的CD13。該脂質(zhì)體在多種腫瘤細(xì)胞的體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)中都展現(xiàn)了很優(yōu)越的靶向作用和細(xì)胞攝取。Kibra等［18］也類似地將STR－R8這種CPP修飾在了RGD－PEG－Liposome的表面，CPP的引入使得原來單一靶向的脂質(zhì)體的細(xì)胞膜穴樣內(nèi)陷胞吞途徑，向網(wǎng)格蛋白介導(dǎo)的胞吞途徑轉(zhuǎn)變，并增加了細(xì)胞攝取量和準(zhǔn)確性。而Jiang等［19］將一種人工改造合成的R6H4的CPP包被在脂質(zhì)體表面，再連結(jié)上透明質(zhì)酸（HA），構(gòu)成雙重修飾的脂質(zhì)體。HA一方面具有和PEG類似的功能，中性條件下帶負(fù)電荷，有親水性，可以實(shí)現(xiàn)脂質(zhì)體的長循環(huán)；另一方面一些惡性腫瘤細(xì)胞表面有HA的受體如CD44和RAHMM，可以實(shí)現(xiàn)靶向；再者，腫瘤的微酸性環(huán)境中廣泛分布著透明質(zhì)酸酶，可以幫助水解去除HA的包裹從而暴露CPP。Jiang的實(shí)驗(yàn)也表明了這種雙重修飾方式具有協(xié)同作用，提高了脂質(zhì)體的細(xì)胞攝取量和藥效。實(shí)驗(yàn)中的CPP要保證能夠被PEG或HA親水層盾護(hù)，所以在設(shè)計(jì)選擇時(shí)對大小有一定要求，方便親水層的空間位阻發(fā)揮作用。此外，Jiang的實(shí)驗(yàn)還著重研究了人工合成的CPP在不同pH下的作用，發(fā)現(xiàn)該脂質(zhì)體能在pH＝6.4的條件下比pH＝7.4發(fā)揮出更好的藥效，這也符合腫瘤微環(huán)境微酸性的特性。

另外，還由于CPP的正電荷而更利于外源DNA的轉(zhuǎn)染［15］。CPP可以利用蛋白質(zhì)工程的手段，根據(jù)需求反向設(shè)計(jì)其結(jié)構(gòu)和氨基酸序列，人工合成篩選達(dá)到更加理想的效果。

在這一類型的雙重修飾主動靶向脂質(zhì)體中，特異性配體首先實(shí)現(xiàn)對細(xì)胞的靶向，而CPP則進(jìn)一步幫助細(xì)胞攝取藥物，達(dá)到協(xié)同效果，藥效更顯著。其優(yōu)勢主要表現(xiàn)在以下幾個(gè)方面：其一，特異性配體與靶細(xì)胞表面的受體結(jié)合具有飽和性，而CPP的靜電作用不存在飽和性；其二，CPP具有正電荷，已經(jīng)有研究表明帶陽離子的脂質(zhì)體比中性脂質(zhì)體在腫瘤區(qū)域積累更多、更深、更久［20］；再者，CPP幫助跨越細(xì)胞膜，使得脂質(zhì)體能夠在胞內(nèi)釋放藥物。

特異性配體和CPP雙重修飾的脂質(zhì)體是層層遞進(jìn)發(fā)揮效用的，與加和作用不同。加和作用往往會因?yàn)閮煞N配體同時(shí)靶向，造成細(xì)胞表面黏附的脂質(zhì)體擁擠的狀況，而協(xié)同作用不存在這種問題。但CPP修飾的脂質(zhì)體雖跨越細(xì)胞膜能力增強(qiáng)，但是由于其非特異性結(jié)合，所以并未帶來靶向準(zhǔn)確性的大幅度提高，而這一點(diǎn)在兩種特異性配體修飾的脂質(zhì)體中是可以實(shí)現(xiàn)的。上面Sharma的實(shí)驗(yàn)中，脂質(zhì)體穿越血腦屏障的能力增強(qiáng)、在腦部積累量增加的同時(shí)，在其他身體器官內(nèi)的積累也相應(yīng)增強(qiáng)，如脾臟、心臟、肺等，這就會使包封的質(zhì)粒DNA在非靶細(xì)胞處也能轉(zhuǎn)染、表達(dá)和發(fā)揮作用，可能會帶來未知的副作用。歸結(jié)起來，CPP的修飾會“盲目”地增強(qiáng)脂質(zhì)體的藥效，而特異性配體能夠?yàn)槠渲该鞣较颉?/p>

1.3 兩種細(xì)胞穿透肽（CPP）修飾脂質(zhì)體 KYND作為一種較新的CPP，通過網(wǎng)格蛋白介導(dǎo)的內(nèi)吞作用幫助細(xì)胞攝取大分子。而同時(shí)KYND又是一種腫瘤表皮標(biāo)記物（tumor endothelialmarker 8，TEM 8）的配體，具有一定的主動靶向效果。所以Kibria等［21］利用R8的CPP包被脂質(zhì)體后，連上有KYND末端的PEG長鏈，制成的雙重修飾脂質(zhì)體比用單個(gè)CPP修飾的脂質(zhì)體具有更好的攝取率和準(zhǔn)確度，所以也被視為有前景的載藥體系。

其實(shí)該種脂質(zhì)體和上一類型的脂質(zhì)體作用類似，都是靶向和細(xì)胞穿透的協(xié)同作用，不同的是第一層靶向的同時(shí)就兼具了細(xì)胞穿透的效果。而這一實(shí)驗(yàn)再次向我們展示了CPP多樣的功能，帶給我們更多期待和想象力。

2 雙重修飾的主動靶向脂質(zhì)體的尺寸研究

在采用化學(xué)藥物治療癌癥腫瘤時(shí)，腫瘤細(xì)胞（tumor cell，TC）往往容易產(chǎn)生抗藥性。而腫瘤表面的新生血管內(nèi)皮細(xì)胞（tumor endothelial cell，TEC）則對藥物更敏感，所以設(shè)計(jì)載藥體系針對TEC發(fā)揮藥效會達(dá)到更好的抗癌效果［22］。而由于實(shí)體瘤的高通透性和滯留效應(yīng)（EPR effect）［23］，所以尺寸較小的脂質(zhì)體會被動靶向到腫瘤細(xì)胞，但這對于具有高抗藥性的腫瘤細(xì)胞起不到好的藥效。Takara等［24］嘗試?yán)么蟪叽绲闹|(zhì)體靶向TEC，而不受EPR效應(yīng)的影響靶向TC。實(shí)驗(yàn)選擇了具有極強(qiáng)抗藥性的腎癌（renal cancer carcinoma，RCC），并通過對載瘤小鼠進(jìn)行尾靜脈注射脂質(zhì)體進(jìn)行研究。實(shí)驗(yàn)先對比了100 nm和300 nm的PEG化脂質(zhì)體分布情況，發(fā)現(xiàn)100 nm的脂質(zhì)體因EPR效應(yīng)在腫瘤區(qū)分布更多，但距離血管較深，而300 nm的則分布量少，但主要分布在了血管附近。又對300 nm的脂質(zhì)體，分成僅用PEG修飾、NGR（可以特異性靶向到RCC的TEC上的CD13）連結(jié)PEG修飾、R4的CPP修飾和NGR／CPP雙修飾四組的體內(nèi)分布情況對比，結(jié)果顯示前三者在腫瘤血管區(qū)分布均較少，而雙重修飾的則大量分布。經(jīng)過包封抗癌藥物DXR后，大尺寸的雙重修飾的脂質(zhì)體比兩種單修飾的脂質(zhì)體抑癌作用大大提高。最后實(shí)驗(yàn)將包封有DXR的300 nm的雙重修飾的脂質(zhì)體和100 nm的普通脂質(zhì)體（一種常用脂質(zhì)體類藥物，Doxil）對比得出前者更加優(yōu)越的抑制腫瘤生長的作用。實(shí)驗(yàn)層層遞進(jìn)向我們展示了雙重修飾在大尺寸脂質(zhì)體這個(gè)平臺上的重要應(yīng)用。類比我們聯(lián)想到雙重修飾的脂質(zhì)體將會更能抵抗流體的剪切力作用進(jìn)行靶向結(jié)合，配合大尺寸的更大吸附面積發(fā)揮作用。如果沒有雙重修飾，大尺寸的脂質(zhì)體即使有更大的表面吸附面積，也較難抵抗血流沖擊而靶向吸附在血管內(nèi)皮細(xì)胞，進(jìn)而將其破壞裂解發(fā)揮抗癌作用。同時(shí)，看似“離經(jīng)叛道”的大尺寸脂質(zhì)體，不符合EPR效應(yīng)的要求，但可以另辟蹊徑解決腫瘤抗藥性的問題，靶向結(jié)合到對藥物更加敏感的新生血管發(fā)揮作用，是雙重修飾的重要應(yīng)用方向?？梢?，大尺寸脂質(zhì)體搭配上雙重修飾才能發(fā)揮出更理想的效果。

3 雙重修飾的主動靶向脂質(zhì)體的膜流動性研究

由于修飾的配體連結(jié)在脂質(zhì)體的流動膜表面從而與靶細(xì)胞作用，所以不難推測，對于雙重修飾的脂質(zhì)體，脂質(zhì)體膜的流動性對于兩種不同的配體如何與細(xì)胞膜接觸、相互作用以及兩種配體之間的關(guān)系有著重要意義。Gunawan等［25］用兩種抗體anti－ICAM和anti－ELAM同時(shí)修飾脂質(zhì)體，而脂質(zhì)體的膜則用DOPC和DPPC這兩種有著不同物理性質(zhì)的磷脂分別制成進(jìn)行對比實(shí)驗(yàn)。在37℃的條件下，DOPC呈液態(tài)，DPPC呈凝膠態(tài)，兩者具有不同的流動性。而實(shí)驗(yàn)結(jié)果也顯示了DOPC脂質(zhì)體與靶細(xì)胞聯(lián)結(jié)得更好，說明膜流動性越大，雙靶向脂質(zhì)體靶向越緊密。盡管靶向過程中脂質(zhì)體膜表面的兩種抗體究竟是如何分布、如何作用仍舊不明朗，但這也帶給我們新的啟迪，不僅僅要將目光放在修飾的配體上，也要關(guān)注脂質(zhì)體本身的性狀，其膜流動性、膜的結(jié)構(gòu)特征、連接配體的方式等眾多微觀上的性質(zhì)都可能會對脂質(zhì)體效用的發(fā)揮產(chǎn)生影響，而目前的研究還十分有限。

4 雙修飾的靶向脂質(zhì)體在穿屏障系統(tǒng)中的應(yīng)用

雙重修飾的主動靶向脂質(zhì)體的一個(gè)重大應(yīng)用就在于穿越血腦屏障（blood brain barrier，BBB）。血腦屏障是指腦毛細(xì)血管壁與神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞形成的血漿與腦細(xì)胞之間的屏障和由脈絡(luò)叢形成的血漿和腦脊液之間的屏障，這些屏障能夠阻止某些物質(zhì)（多半是有害的）由血液進(jìn)入腦組織，但這也給載藥體系進(jìn)入腦部帶來困難。但是BBB也有載體轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)，用以腦組織和外界進(jìn)行物質(zhì)交換，這就是修飾脂質(zhì)體的特異性配體發(fā)揮作用的依據(jù)［26］。如轉(zhuǎn)鐵蛋白（transferrin，Tf）既可以通過轉(zhuǎn)鐵蛋白受體高效穿過BBB，又可以靶向過度表達(dá)的腫瘤細(xì)胞；MAN甘露糖既可以通過BBB上的糖類轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白GLUT穿過，也可以靶向過度表達(dá)的腫瘤細(xì)胞；CPP可以幫助穿過細(xì)胞從而跨越BBB，又可以通過靜電作用對腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生危害。這些配體相互配合可以起到加和或協(xié)同作用實(shí)現(xiàn)更好的藥效。

Gao等［27］利用Tf和葉酸（folate，F(xiàn)）共同修飾脂質(zhì)體，Tf可以對抗ABC運(yùn)輸?shù)鞍祝ˋTP－Binding－Cassette transporter）的作用，減少對藥物的外泵，并且?guī)椭ㄟ^BBB，進(jìn)入腦組織后，葉酸則靶向到膠質(zhì)瘤細(xì)胞上，包封的DOX發(fā)揮藥效。該脂質(zhì)體比單一修飾的脂質(zhì)體展現(xiàn)了更好的穿越屏障系統(tǒng)的能力，并且減少了藥物在心臟的積累降低了毒副作用。Ying等［11］利用Tf和MAN共同修飾，同樣獲得了優(yōu)越的穿越BBB和靶向神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞的雙重的效果。穿越BBB時(shí)，MAN起主導(dǎo)作用，Tf輔助；靶向目標(biāo)細(xì)胞時(shí)，Tf起主導(dǎo)作用，MAN輔助，兩種配體一直相互配合發(fā)揮作用。Sharma等［15］利用Tf和PR這種CPP共同修飾脂質(zhì)體，較之單一修飾的脂質(zhì)體在腦組織區(qū)獲得了更高的積累量。眾多實(shí)驗(yàn)都證明了雙重修飾的脂質(zhì)體是極具價(jià)值的腦部載藥體系。一般的單一修飾脂質(zhì)體在面對血腦屏障這種復(fù)雜的系統(tǒng)時(shí)往往顯得力量單薄，而此時(shí)雙重修飾的脂質(zhì)體的加和作用或協(xié)同作用就體現(xiàn)出了穿越屏障系統(tǒng)的價(jià)值，同時(shí)能夠?qū)崿F(xiàn)穿越后的靶向給藥作用。

5 總結(jié)與展望

雙重修飾的遞送載體具有提高靶向準(zhǔn)確性［28］，提高靶向效率，提高藥物攝取，提高對靶點(diǎn)的黏附能力和血流穩(wěn)定性［24］，跨膜穿越組織屏障等優(yōu)勢作用，引起人們廣泛關(guān)注。雙重修飾的主動靶向脂質(zhì)體在修飾配體的選擇和搭配上更具多樣性，能夠發(fā)揮加和或協(xié)同作用。

采用兩種特異性配體修飾的脂質(zhì)體能夠利用受體分布的交叉特性更準(zhǔn)確地篩選出靶向細(xì)胞，但在細(xì)胞攝取上優(yōu)勢不明顯。而采用特異性配體和CPP這種非特異性配體搭配修飾的脂質(zhì)體的優(yōu)勢更多體現(xiàn)在穿透進(jìn)入細(xì)胞，卻在靶向性上難有顯著提高。當(dāng)然，CPP自身廣泛多樣的性質(zhì)又提供了更多的可能，所以也會有像KYND這種具有靶向性的CPP出現(xiàn)。而且由于CPP作為小分子肽，未來隨著蛋白質(zhì)工程的發(fā)展，我們就可以更多地依據(jù)我們的需求人為設(shè)計(jì)出兼具多種功能的CPP，以作為配體修飾脂質(zhì)體。

此外，除了關(guān)注修飾配體本身之外，對于脂質(zhì)體親水護(hù)盾材料的選擇也會在PEG之外有更多可能。如透明質(zhì)酸（HA）就具有親水性的同時(shí)又具有靶向性，并且很容易水解，是一種理想的長循環(huán)保護(hù)材料。再如泊洛沙姆，其除了本身的親水－疏水－親水三嵌段結(jié)構(gòu)之外，還具有一定的對抗多樣耐藥性的作用［29］，所以也是一種可以發(fā)展的多功能的親水護(hù)盾。而且未來會有更多的人工合成的多功能聚合物出現(xiàn)，提供更優(yōu)質(zhì)的修飾配體連結(jié)材料和脂質(zhì)體長循環(huán)親水護(hù)盾。

我們期待今后雙重修飾的主動靶向脂質(zhì)體發(fā)展分為宏觀和微觀兩個(gè)方向。宏觀上，脂質(zhì)體在體內(nèi)長循環(huán)過程的控制。一方面，配體連結(jié)在親水大分子末端再插入脂質(zhì)體，這在一定程度上降低了親水大分子的保護(hù)作用，所以需要更好地把握修飾配體的量來實(shí)現(xiàn)親水護(hù)盾和靶向結(jié)合之間的平衡。另一方面，脂質(zhì)體在長循環(huán)過程中在非靶細(xì)胞處的積累可能會帶來一定的副作用，如穿越血腦屏障的困難使得脂質(zhì)體在外周器官中有著大量的積累，所以需要更精準(zhǔn)地控制其集中到目標(biāo)區(qū)域。微觀上，對于脂質(zhì)體和靶細(xì)胞結(jié)合時(shí)的具體細(xì)節(jié)的掌握將能夠幫助我們設(shè)計(jì)出更加理想的載藥體系。如靶向結(jié)合時(shí)脂質(zhì)體和細(xì)胞膜的流動性影響，修飾配體之間和配體受體之間的相互作用，靶向結(jié)合在生物環(huán)境下如血流條件下對力的對抗，靶向結(jié)合的穩(wěn)定性，脂質(zhì)體親水層對于藥物釋放的影響等等，都值得進(jìn)一步研究。如在低速條件下，雙重修飾的微型囊泡和單一修飾的微型囊泡黏附能力沒有太大區(qū)別，而在高速條件下，雙重修飾的囊泡盡管也有減少，但明顯比單一修飾的囊泡的結(jié)合能力要好［24］。又如Chytil等［30］探究納米顆粒（nano particles，NP）中藥物聚合物隔層對于藥物釋放速度的影響，以及不同的藥物釋放速度達(dá)到的不同療效，這對脂質(zhì)體研究同樣具有一定的指導(dǎo)價(jià)值。

未來的脂質(zhì)體藥物將會更多地向病人導(dǎo)向發(fā)展，進(jìn)行個(gè)體化設(shè)計(jì)。在Yu等［31］的研究中，就針對個(gè)體病人的細(xì)胞采用抗體微陣列技術(shù)，選擇出恰當(dāng)?shù)目贵w對脂質(zhì)體進(jìn)行雙重修飾，實(shí)現(xiàn)了很好的靶向性收和很好的療效。所以，脂質(zhì)體載藥體系的發(fā)展將會與眾多其他生物技術(shù)相結(jié)合，如基因工程、蛋白質(zhì)工程等，實(shí)現(xiàn)更個(gè)性化、人性化的醫(yī)療體驗(yàn)。

我們期待著未來更多的修飾配體的發(fā)現(xiàn)和應(yīng)用，期待著這些配體以更加巧妙的搭配組合和共同作用不會引起在血流中的清除，增加血流中的穩(wěn)定性，可以很好的接近靶點(diǎn)，可以精準(zhǔn)靶向和內(nèi)化等，也期待更深入的生物技術(shù)的發(fā)展，這些都將幫助我們建立更加新穎的靶向載藥體系。

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Research progress on dually modified active targeting liposomes

JIANGWen，TIAN Ji-lai，DING Chen-jing，JU An，GU Ning
（School of Biological Science and Biomedical engineer，Southeast University，Nanjing 211189，China）

Active targeting liposomes play important roles in targeted drug delivery system.However，conventional singly modified active targeting liposomes have some disadvantages，such as unsatisfied targeting efficiency and low cellular uptake.Researchers are exploring liposomesmodified with different two ormore kinds of targetingmolecules and other synergistic molecules.This article reviewed the research progress of dually modified targeted liposomes，which were divided into three groups：dual ligandsmodified liposomes，specific ligand and cell penetrating peptide co－modified liposomes，and dual cell penetrating peptidesmodified liposomes.According to the analysis，we concluded that duallymodified liposomal therapeutics had superiority in targeting specificity，targeting efficiency，drug uptake，cohesion to the target，stability in blood flow，and distinguishing effects in crossing barrier systems.

Liposomes；Duallymodification；Active targeting

R944

A

2095－5375（2014）08－0469－006

國家重大科技專項(xiàng)重大項(xiàng)目（No.2011CB933500）、國家自然科學(xué)基金（No.81302730）、東南大學(xué)大學(xué)生創(chuàng)新實(shí)踐項(xiàng)目（No.T14112002）

蔣雯，女，研究方向：生物醫(yī)學(xué)工程，E－mail：vivianchiang＠126.com

顧寧，男，教授，博士生導(dǎo)師，研究方向：納米材料及其在生物醫(yī)（藥）學(xué)中的應(yīng)用，Tel：025－83272476，E－mail：guning＠seu.edu.cn