熊汝琴，王 銳，劉忠榮，陳順芳

（昭通學(xué)院,云南昭通 657000）

Folin-Ciocaileu比色法測定不同等級(jí)天麻總酚含量

熊汝琴，王 銳，劉忠榮，陳順芳

（昭通學(xué)院,云南昭通 657000）

以沒食子酸為對(duì)照,采用Folin-Ciocaileu比色法測定云南昭通產(chǎn)4類不同等級(jí)天麻中的總酚含量,該方法在2～12.0μg·m L-1濃度范圍內(nèi)線性良好,決定系數(shù)R2為0.996 5,結(jié)果還表明天麻總酚含量與塊莖干重不呈正相關(guān),即塊莖大小與天麻的內(nèi)在品質(zhì)沒有必然聯(lián)系。

天麻；Folin-Ciocaileu比色法；總酚測定

天麻（Gastrodia elata Blum e）為蘭科天麻屬植物,是我國名貴的藥食兩用中藥材之一,多用于頭痛眩暈、肢體麻木、癲癇、抽搐等癥。天麻含有豐富的酚性物質(zhì),如天麻素（4-羥甲基苯-β-D-吡喃葡萄糖苷）、對(duì)羥基苯甲醛、對(duì)羥基苯甲醇等［1-5］。目前一般認(rèn)為,天麻素是天麻的主要活性成分,具有鎮(zhèn)驚、抗癲癇、鎮(zhèn)靜安眠、降血壓等作用［6-9］,《中國藥典》2010年版中天麻質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制定也主要以天麻素含量作為重要的參考指標(biāo)。

隨著藥理研究的進(jìn)一步深入,越來越多的報(bào)道顯示,僅以天麻素作為活性指標(biāo)尚不能全面反映與天麻傳統(tǒng)功效相關(guān)的藥理活性,其他酚性成分對(duì)于其藥效的發(fā)揮也非常重要［10-12］。因此測定天麻中總酚含量,用以衡量天麻的質(zhì)量可能更為合理。

云南省昭通市是我國著名的天麻地道藥材產(chǎn)地,所產(chǎn)天麻品質(zhì)優(yōu)良,為當(dāng)?shù)靥厣?jīng)濟(jì)作物。市面上出售干天麻塊莖,通常按塊莖大小分為4個(gè)等級(jí),1級(jí)每頭≥35g,2級(jí)每頭≥20g,3級(jí)每頭≥12g,4級(jí)≥8g。1級(jí)天麻價(jià)格為4級(jí)的3倍左右。本實(shí)驗(yàn)建立了天麻中總酚的測定方法,同時(shí)對(duì)昭通產(chǎn)4種藥用天麻變型（烏天麻、紅天麻、黃天麻、綠天麻）不同等級(jí)大小塊莖中總酚含量進(jìn)行測定,期望為天麻的合理應(yīng)用提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

實(shí)驗(yàn)用烏天麻產(chǎn)自云南省昭通市彝良縣小草壩鄉(xiāng)小草壩村,紅天麻、黃天麻、綠天麻均產(chǎn)自昭通市昭陽區(qū),由昭通市天麻研究所提供鑒定。

試劑：福林酚試劑（上海喜潤化學(xué)工業(yè)有限公司）；沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)品（中國藥品生物制品檢定所,供定量測定用）；N a2C 03（分析純）；水為2次蒸餾水。

使用儀器：先行者電子分析天平；高速冷凍離心機(jī)（上海安亭科學(xué)儀器廠）；U V/V i s 2082P C S紫外可見分光光度計(jì)。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

精確稱取沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)品適量,用水溶解并定容至250 m L,搖勻,制成0.143 2 mg·m L-1的對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)溶液。

1.2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立

精確吸取標(biāo)準(zhǔn)溶液0.4,0.6,0.8,1.0, 1.2,1.4,1.6,1.8和2.0 m L,分別加蒸餾水5.0 m L,混勻,加福氏試劑1.5 m L,3 min后,加10%N a2C 03溶液3.0 m L,用水稀釋至25 m L,30 °C水浴加熱30 min后,取出,搖勻,于765 nm波長下,測定吸光度值,建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.2.3 樣品處理

天麻中的酚性成分有脂溶性的也有水溶性的,通過預(yù)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)采用70%乙醇為提取溶劑,所得溶液顯色后測定結(jié)果最佳。取各級(jí)干天麻塊莖,粉碎,過孔徑0.149 m m（100目）篩,精確稱取2.0g,加70%乙醇25 m L,浸泡24 h,30°C水浴中超聲（工作頻率40 kH z,功率250 W）30 min,4 500 r·m i n-1離心15 min,過濾,上清液置50 m L容量

瓶中,殘?jiān)看渭?0 m L70%乙醇重復(fù)前述操作再提取2次,過濾,合并濾液,定容至50 m L,即得總酚提取物溶液。

1.2.4 顯色反應(yīng)條件的確定

實(shí)驗(yàn)過程中,參考相關(guān)文獻(xiàn)［13-15］,經(jīng)過多次實(shí)驗(yàn)最終確定加蒸餾水5.0 m L,福氏試劑1.5 m L, 10%N a2C 03溶液3.0 m L,在這樣的試劑比例下,顯色溶液的澄清度和穩(wěn)定性都較高。在考查反應(yīng)溫度和時(shí)間的實(shí)驗(yàn)時(shí)發(fā)現(xiàn),使用30°C水浴加熱30 min,反應(yīng)條件比較溫和,靈敏度高,結(jié)果可靠。

2 結(jié)果與分析

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線

以沒食子酸質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo),吸光度為縱坐標(biāo),制作標(biāo)準(zhǔn)曲線,得回歸方程為y=0.048 1χ+ 0.004 8,決定系數(shù)R2為0.996 5,沒食子酸質(zhì)量濃度在2～12.0μg·m L-1與其吸光值呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系,該方程可用于天麻多酚的定量測定。

2.2 穩(wěn)定性

取黃天麻2級(jí)樣品溶液1.0 m L,按上述處理及測定方法,在樣品液與顯色劑反應(yīng)完全后分別在0.5, 1.0,1.5,2.0,2.5和3.0 h測定其吸光度,以評(píng)價(jià)該分析方法在一段時(shí)間內(nèi)的穩(wěn)定性。從表1可以看出,由于酚類物質(zhì)被氧化,其總量值略有下降的趨勢,但2 h內(nèi)溶液穩(wěn)定性良好,相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差為1.78%。

表1 穩(wěn)定性的實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.3 精密度

取質(zhì)量濃度為5.728 0μg·m L-1的對(duì)照品溶液,重復(fù)測定6次,記錄其吸光度的值,相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差為0.35%,結(jié)果（表2）表明儀器精密度良好。

表2 精密度的實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.4 重現(xiàn)性

取3級(jí)黃天麻按前述提取及測定方法,重復(fù)測定6次,結(jié)果如表3所示,得相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差為0.59%,表明具有良好的重現(xiàn)性。

表3 重現(xiàn)性的實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.5 加標(biāo)回收率

取沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)品適量,制成0.101 5 mg·m L-1的對(duì)照品貯備液。稱取2級(jí)綠天麻細(xì)末約0.5g,平行6份,精確加入對(duì)照品貯備液10.0 m L,顯色反應(yīng)后,測定吸光度的值并計(jì)算回收率,得平均回收率為100.17%,相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差為1.42%（表4）。

表4 天麻多酚加標(biāo)回收的實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.6 天麻總酚含量

各類各級(jí)天麻樣品溶液顯色后測定吸光度值,并根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算總酚含量。表5表明,天麻總酚含量與塊莖干重不呈正相關(guān),紅天麻和黃天麻中,塊莖干重最小的4級(jí)天麻反而總酚含量較高,可見不能僅憑塊莖大小評(píng)價(jià)天麻的內(nèi)在品質(zhì)。

表5 不同等級(jí)天麻塊莖的總酚含量（n=3）

3 小結(jié)

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,天麻總酚含量與塊莖干重不呈正相關(guān),可見不能僅憑塊莖大小評(píng)價(jià)天麻的內(nèi)在品質(zhì)。用F o l i n-C i o c a l t e a u法測定天麻中的總酚含量,回收率高,靈敏度高,精密度、準(zhǔn)確度好,而且操作簡單快速又節(jié)約。

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（責(zé)任編輯：張才德）

S567文獻(xiàn)標(biāo)志碼：B文章編號(hào)：0528-9017（2014）05-0664-02

2014-02-14

云南省應(yīng)用基礎(chǔ)研究計(jì)劃青年項(xiàng)目（2012F D 063）

熊汝琴（1986-）,女,助教,碩士,研究方向?yàn)樘烊划a(chǎn)物化學(xué)。E-mail：x i o ng r uqi n2011@163.com。

文獻(xiàn)著錄格式：熊汝琴,王銳,劉忠榮,等.Folin-Ciocaileu比色法測定不同等級(jí)天麻總酚含量［J］.浙江農(nóng)業(yè)科學(xué),2014（5）：664-665,667.