祁宏業(yè)

（柯坪縣畜牧獸醫(yī)站，新疆柯坪 843600）

疆岳驢精液濃縮效果的觀察

祁宏業(yè)

（柯坪縣畜牧獸醫(yī)站，新疆柯坪 843600）

疆岳驢是新疆通過長期雜交選育而成的一個優(yōu)良的地方品種，常常作為種驢，為新疆驢育種起到了積極作用。由于社會進(jìn)步和農(nóng)村經(jīng)濟的快速發(fā)展，驢群的數(shù)量和質(zhì)量面臨逐漸降低的趨勢。根據(jù)疆岳驢的品種現(xiàn)狀和當(dāng)前養(yǎng)驢業(yè)的的實際現(xiàn)狀，還需努力提高驢的的質(zhì)量和數(shù)量，加強保種工作。為此，我們進(jìn)行了新疆岳驢的精液濃縮效果的觀察試驗，為疆岳驢冷凍精液的理論研究和推廣應(yīng)用提供依據(jù)?，F(xiàn)將濃縮試驗的方法和結(jié)果，報告如下：

1 精液的采集

為防止精液污染，除器械徹底消毒外，采精場地用3%的來蘇兒水噴灑消毒，待5～10min進(jìn)行采精，種公驢的陰莖用2%的小蘇打溶液洗凈擦干，用常規(guī)法采集種公驢精液，活力不能低于0.7級以下。為了使精子不受低溫的打擊，集精杯應(yīng)放在電熱恒溫水浴鍋內(nèi)，溫度保持38～40℃。

1.1 精液選擇

在普通光學(xué)顯微鏡下鏡檢新鮮精液的質(zhì)量，密度中等以上、活力達(dá)到0. 7以上的精液留下作試驗用。精子密度檢查，估測法：取一滴原精液，制成平板壓片，放在400倍顯微鏡下觀察，按密、中、稀三級評定。“密”：精子充滿整個視野，精子音質(zhì)空隙難以容納1個精子，看不清單個精子運動，密度在10億以上/ml?！爸小保壕娱g的空隙能容納1～2個精子，能看清單個精子的運動，密度為3～9億/ml?！跋　保壕釉陲@微鏡下分布較松散，精子間的空隙能容納3～9個精子，密謀評定為1～3億。

1.2 精液濃縮方法

驢精液稀釋前，將合格者立即進(jìn)行1∶1倍等溫稀釋，稀釋后再次檢查精子活力。由于精液包含精子和精清，精清中的電解質(zhì)成分會促進(jìn)精子早衰，所以稀釋后馬上對精液進(jìn)行離心濃縮處理，離心的轉(zhuǎn)速和時間精子的活力影響很大，離心輕，精清內(nèi)含有大量活精子被棄掉；離心重，沉積精子板結(jié)，難以分離，使大最精子傷亡。理想的標(biāo)準(zhǔn)：沉降的精子在管底與精清界線分明，輕搖稍有移動，不粘結(jié)成塊，精清部分呈云霧狀徐徐下降。由于個體驢精液的副性腺液含量不同、密度不同，氣溫的變化，室溫的高低，離心機的型號及電壓不穩(wěn)等因素都影響離心效果?；疽蟆秒x心轉(zhuǎn)速不超過2000 r/min，時間不超過20 min，離心溫度20～25℃效果較好。

2 最佳離心速度的選擇

將符合條件的精液等分。先用相同離心時間、相同卵黃濃度的條件處理6個組和一個對照組。處理方法見下表

相同離心時間下精液的處理方法

再將用相同轉(zhuǎn)速，相同卵黃濃度的條件處理6個組。最后用相同轉(zhuǎn)速、離心時間的條件下處理6個組。

將離心后的精液，棄8～10ml上清，并按1∶1的比例與等溫稀釋液混合，輕搖，常溫保存的精液放在避光處定間距觀察。低溫保存的精液，定時觀察。各處理組從第0h起每8h觀察一次精子活力并記錄數(shù)據(jù)。

3 稀釋液的配制

精液冷凍稀釋的配方很多，主要成分為糖類、卵黃、鹽類。實踐證明，糖-卵黃-甘氨酸-青鏈霉素稀釋液效果好。我們用的稀釋液是離心稀釋液，用分析純蔗糖6.5g明膠加入蒸餾水100ml用中速濾紙過濾后，煮沸消毒3～5min，冷卻后待用。張世杰曾制作過關(guān)中驢冷凍精液，他只選用青霉素作為抗生素，效果良好。王希平，王力波等在也曾研究過馬驢精液的低溫貯存，他們的配方是，蒸餾水100 ml、檸檬酸鈉1.4 g、葡萄糖3.0 g、卵黃液20 mL、青霉素10 IU、鏈霉素0.1 g。還使用了新鮮乳汁（牛、馬）100 mL，青霉素10IU、鏈霉素0.1g。

4 精液濃縮方法

實驗結(jié)果表明：1500r/min的條件下，最好的離心時間在10～15min只間，可以在最短的時間獲得最大的精子回收率（表3）。通過考慮回收率和精子活率兩者，運用1500r/min，10～15min離心精液可以得到比較好的結(jié)果[12]；1974年，易理輝等將驢精液在30℃下1500 r/min離心10min進(jìn)行濃縮處理，以后的濃縮大多沿用了這一離心速度[3]，這與易理輝等（1974）的研究結(jié)果不相符，所以還需進(jìn)一步研究。在實際的人工授精的生產(chǎn)中精子的活率在30%才可以得到較好的受胎率，因此，用此種方法處理的精液保存有效時間大約為48h。母驢的發(fā)情期長3～8d，如果在排卵前12h輸精，才有可能得到較為滿意的效果，因此，為了確保受孕母驢需要在一個情期多次輸精，因此人工授精和精液的保存顯得非常必要。

用不同的轉(zhuǎn)速對精液進(jìn)行離心，在離心后立即對精液品質(zhì)進(jìn)行檢查，發(fā)現(xiàn)離心對精子活力的影響不大。但在經(jīng)過保存后發(fā)現(xiàn)離心速度越快，精子存活時間越短[13]。這說明，高離心速度可能對精子產(chǎn)生顯微結(jié)構(gòu)上的損傷，只有在3000r/min以上，才能立即造成精子的死亡。

用不同的時間相同離心速度1000r/min對精液進(jìn)行離心，離心后用精子記數(shù)器計算精子密度，用剩余的精子數(shù)量與總精子數(shù)相比較，來計算精子回收率。

在精液的保存過程中，微生物會在精液中生長。驢人工授精一次輸入的活精子數(shù)應(yīng)在2億左右，驢精液的精子密度相對較底，因此人工授精時需要在子宮內(nèi)注入精液。但是液體越多，液體中所含的微生物越多，這樣增加了母驢患子宮內(nèi)膜炎的風(fēng)險。濃縮精子，增大精子密度，有利于減少人工輸精時輸入子宮的精液體積，減少子宮內(nèi)膜炎的發(fā)病率。

5 結(jié)論

用1500r/min和離心15min的方法效果最好。這樣處理的精液在4℃下保存48h后精子活率可以達(dá)到30%，符合人工授精30%的最低標(biāo)準(zhǔn)。

[1] 李青旺，武浩.家畜繁殖學(xué)[M].西安：西安地圖出版社，2000：207-211.

[2] 孫玉江，蔣濤.發(fā)展我國養(yǎng)驢業(yè)的思考[J].山東畜牧獸醫(yī)，2007，28（1）：5-6.