李占清 魏海英

(河北大學(xué) 化學(xué)與環(huán)境科學(xué)學(xué)院，河北 保定 071002)

0 前言

水溶性維生素C又名L-抗壞血酸，主要存在于新鮮蔬菜和水果中，具有美白養(yǎng)顏、預(yù)防感冒、增強(qiáng)免疫系統(tǒng)功能等作用，對(duì)壞血病、動(dòng)脈硬化、貧血等有一定療效，可以預(yù)防癌癥、心臟病、中風(fēng)，保護(hù)牙齒和牙齦等，是維持人體正常代謝的必需物質(zhì)。人體嚴(yán)重缺乏維生素C時(shí)會(huì)導(dǎo)致壞血病，而且體內(nèi)又不能自身合成維生素C，只能通過合理膳食得到，因此，準(zhǔn)確測(cè)定蔬菜中維生素C的含量具有重要意義。

蔬菜中維生素C含量的測(cè)定一般采用2,4-二硝基苯肼法、熒光分光光度法、碘量法和2,6-二氯靛酚滴定法等[1-5]，這些方法都有一定的缺點(diǎn)，比如操作程序復(fù)雜、所用試劑不穩(wěn)定、時(shí)間長(zhǎng)等。根據(jù)維生素C的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)確定了其水溶液最大吸收波長(zhǎng)為265 nm，并且分光光度法應(yīng)用普遍[6-10]，因此，建立了紫外分光光度法的工作曲線，選取了幾種新鮮蔬菜作為樣品進(jìn)行測(cè)定。方法具有操作簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、快速、檢出限低的優(yōu)點(diǎn)。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑

TU-1810紫外可見分光光度計(jì)(北京普析通用有限公司)，PHS-3C型酸度計(jì)(上海偉業(yè)儀器有限公司)，分析天平，組織搗碎機(jī)，吸量管，容量瓶，紗布，移液管。

維生素C標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液(1.0 mg/mL)：稱取0.1 g(精確至0.1 mg)抗壞血酸，溶于蒸餾水中，定量轉(zhuǎn)移入100 mL容量瓶中，用蒸餾水稀釋定容，搖勻。

維生素C標(biāo)準(zhǔn)溶液(0.1 mg/mL)：將標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液稀釋而得。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1繪制工作曲線

分別移取0.00，1.00，2.00，4.00，6.00，8.00，10.00，12.00 mL維生素C的標(biāo)準(zhǔn)溶液于100 mL容量瓶中，用蒸餾水稀釋至標(biāo)線，搖勻。以蒸餾水為參比，在λmax=265 nm處測(cè)定吸光度，并以吸光度為縱坐標(biāo)，維生素C標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為橫坐標(biāo)，作標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.2.2樣品的測(cè)定

將菠菜、白菜、芹菜、土豆、胡蘿卜五種新鮮蔬菜樣品洗凈，擦干，稱取一定量具有代表性樣品的可食部分，加入少量的水，迅速搗成勻漿，用二層紗布過濾。用水將樣品移入100 mL容量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻。以蒸餾水為參比，在λmax=265 nm處，測(cè)定試樣吸光度。

2 結(jié)果與討論

2.1 最大吸收波長(zhǎng)的確定

以蒸餾水為參比，取6.00 mL的維生素C標(biāo)準(zhǔn)溶液，在200～350 nm范圍內(nèi)對(duì)其進(jìn)行光譜掃描，結(jié)果如圖1所示。從圖1可知最大吸收波長(zhǎng)λmax=265 nm。

圖1 維生素C溶液的吸收曲線Figure 1 Absorption curve of vitamin C solution.

2.2 酸度對(duì)吸收波長(zhǎng)的影響

用移液管分別加入1 mL維生素C標(biāo)準(zhǔn)溶液于50 mL容量瓶中，用HCl或NaOH調(diào)pH值，蒸餾水稀釋至刻度，測(cè)定不同pH值下的維生素C的最大吸收波長(zhǎng)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖2所示，實(shí)驗(yàn)表明，pH值在5.0～10.0時(shí)的最大吸收波長(zhǎng)不變，為265 nm，但pH=6.0時(shí)的吸收值最大，故選擇pH值為6.0。當(dāng)pH<5.0時(shí)，最大吸收波長(zhǎng)紫移，可能是因?yàn)榫S生素C以離子化形式存在造成的。當(dāng)pH>12.0時(shí)，最大吸收波長(zhǎng)紅移，這是由于維生素C在堿性環(huán)境中不穩(wěn)定分解引起的。這與文獻(xiàn)[1]報(bào)道一致。

圖2 pH對(duì)吸收波長(zhǎng)的影響Figure 2 Effect of absorbtion wavelength on pH.

2.3 線性關(guān)系及檢出限

圖3 維生素C溶液的標(biāo)準(zhǔn)曲線Figure 3 A standard curve of vitamin C solution.

由圖3可知，維生素C的質(zhì)量濃度在1.0～12.0 μg/mL范圍內(nèi)呈線性關(guān)系，線性回歸方程為A=0.066 03c+0.019 74，相關(guān)系數(shù)R2=0.997 51。同時(shí)，以蒸餾水做空白測(cè)定，計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.0982%，得到檢出限為0.044 μg/mL。

2.4 樣品測(cè)定結(jié)果

實(shí)驗(yàn)中選取了新鮮蔬菜大白菜、菠菜、芹菜、土豆、胡蘿卜為樣品，按照實(shí)驗(yàn)方法測(cè)定了其中維生素C的含量，結(jié)果見表1。

表1 蔬菜中維生素C的含量Table 1 Contents of vitamin C in vegetables /(mg·g-1)

2.5 加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)

準(zhǔn)確吸取上述實(shí)驗(yàn)方法中稀釋后的蔬菜溶液25.00 mL于50 mL容量瓶中，加0.5 mL維生素C標(biāo)準(zhǔn)溶液(100 μg/mL)，用蒸餾水稀釋至刻度線，搖勻。測(cè)定該溶液的吸光度并從標(biāo)準(zhǔn)曲線上得到所測(cè)定的50 mL容量瓶中含有維生素C的對(duì)應(yīng)含量。結(jié)果如表2所示。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，加標(biāo)回收率穩(wěn)定在97.5%～105.4%，方法準(zhǔn)確可靠。

表2 加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)結(jié)果Table 2 Results of recovery tests /μg

2.6 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

將含量測(cè)定中所配制的五種蔬菜樣品溶液，在間隔不同時(shí)間內(nèi)進(jìn)行吸光度測(cè)量。結(jié)果發(fā)現(xiàn)在10 h內(nèi)，樣品的吸光度幾乎沒有變化。雖然具有還原性的維生素C易被氧化，但在一定時(shí)間內(nèi)，pH=6.0的介質(zhì)中能穩(wěn)定存在。

3 結(jié)語(yǔ)

水溶性維生素C具有含有烯二醇基的多羥基內(nèi)酯結(jié)構(gòu)而在紫外區(qū)有特征吸收；詳細(xì)考察了不同pH值時(shí)特征吸收波長(zhǎng)。結(jié)果表明：在pH=6.0時(shí)，維生素C能穩(wěn)定存在，且有最大吸光度。在1.0～12.0 μg/mL的質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，維生素C濃度與吸光度呈良好的線性關(guān)系，線性方程為：A=0.066 03c+0.019 74，相關(guān)系數(shù)R2=0.997 51。選取的五種常見蔬菜中維生素C的含量分別為：白菜 0.645 6 mg/g，菠菜 1.948 0 mg/g，芹菜 0.321 4 mg/g，土豆 0.559 1 mg/g，胡蘿卜0.311 mg/g。該方法簡(jiǎn)單易行，準(zhǔn)確度高，穩(wěn)定性好。

[1] 李元玲,賀龍強(qiáng).紫外分光光度法測(cè)定新鮮蔬菜中維生素C的含量[J].焦作大學(xué)學(xué)報(bào),2011(3):93-94.

[2] 馬宏飛,盧生有,韓秋菊,等.紫外分光光度法測(cè)定五種果蔬中維生素C的含量[J].化學(xué)與生物工程,2012,29(8):92-94.

[3] 武文,周俊敏,宣亞文.催化動(dòng)力學(xué)光度法測(cè)定黃瓜、青蒜中維生素C[J].廣東農(nóng)業(yè)科學(xué),2010(6):151-152.

[4] 于曉萍.分光光度法快速測(cè)定蔬菜水果中維生素C的含量[J].工程技術(shù)與應(yīng)用,2009,6(2):16-18.

[5] 斯琴格日樂,恩德.絲瓜中維生素C含量的測(cè)定[J].廣東微量元素科學(xué),2010,17(4):52-55.

[6] 雷天乾,高琳,黨明安,等.抗壞血酸(維生素C)溶液紫外吸收光譜研究[J].光譜學(xué)與光譜分析,1998,18(4):149-150.

[7] 陳愛敏,魏海英.分光光度法測(cè)定硒鹽中的硒(Ⅳ)含量[J].中國(guó)無機(jī)分析化學(xué),2012,2(4):70-73.

[8] 蔡順香.紫外分光光度法測(cè)定蘆柑中的還原型維生素C[J].光譜實(shí)驗(yàn)室,2009,26(5):1091-1094．

[9] 孫義．水果和蔬菜中維生素C含量的測(cè)定方法綜述[J].天津化工,2008,22(3):58-59.

[10]孫振艷,趙中一,郭小慧,等.熒光分析法測(cè)定維生素C[J].化學(xué)分析計(jì)量,2006,15(4):18-20.