，，，，，，，

（1.青島農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，山東青島 266109；2.山東省畜禽疫病防治與繁育重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，山東濟(jì)南250100；3.山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所，山東濟(jì)南 250100）

山東規(guī)?；i場(chǎng)豬流感（H1N1亞型）血清流行病學(xué)調(diào)查

黃秉政1，2，孫文博2，3，殷斌2，杜以軍2，3，李俊2，3，吳家強(qiáng)2，3，于江2，周順1

（1.青島農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，山東青島 266109；2.山東省畜禽疫病防治與繁育重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，山東濟(jì)南250100；3.山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所，山東濟(jì)南 250100）

本研究應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)對(duì)2012年2月至2013年5月來(lái)自山東省規(guī)?；i場(chǎng)的1573份血清樣品進(jìn)行了豬流感HIN1亞型抗體檢測(cè)，結(jié)果顯示陽(yáng)性血清524份，陽(yáng)性率33.31%，這對(duì)了解山東及周邊地區(qū)規(guī)模化豬場(chǎng)豬流感HIN1亞型的分布和流行狀況提供了重要依據(jù)，對(duì)豬流感的防治具有參考意義。

豬流感；HIN1亞型；血清學(xué)調(diào)查

豬流感（Swine Infuenza，SI）是由A型豬流感病毒引起的一種豬群常見的急性、傳染性呼吸系統(tǒng)疾病，該病的潛伏期為2～7天，病程一周左右?；疾∝i發(fā)病初期精神不振，食欲減退或不食，發(fā)病豬常橫臥在一起，不愿活動(dòng)。有的突然發(fā)熱，個(gè)別病豬呼吸困難、喘氣、咳嗽劇烈，呈腹式呼吸，有的呈犬坐姿勢(shì)，夜里可聽到病豬哮喘聲。眼和鼻有黏性液體流出。個(gè)別病豬關(guān)節(jié)疼痛，不愿站立，尤其是膘情較好的豬發(fā)病較嚴(yán)重。病豬發(fā)熱時(shí)體溫升高至40℃～41.5℃，眼結(jié)膜充血。母豬在懷孕期感染，產(chǎn)下的仔豬在產(chǎn)后2～5天發(fā)病很重，有些在哺乳期及斷奶前后死亡[1]。該病呈世界分布，目前，豬流感已遍及歐洲、美洲、亞洲、非洲、澳洲等世界各大洲。近年， 我國(guó)SI呈現(xiàn)不斷蔓延的趨勢(shì)，主要以地方流行性為主，已成為規(guī)?；B(yǎng)豬場(chǎng)的常見傳染病之一，如果在發(fā)病期不及時(shí)治療，則易并發(fā)支氣管炎、肺炎和胸膜炎等疾病，豬的死亡率會(huì)大大增加，給豬場(chǎng)帶來(lái)很大的經(jīng)濟(jì)損失[2]。

豬流感病毒（SIV）屬于正粘病毒科，流感病毒屬，包括A、B型流感病毒屬（Infuenza virusA，B），C型流感病毒屬（Infuenza virus C）和類托高土病毒屬（Thogoto like virus），世界各地的豬流感病毒主要包括三種亞型：H1N1、H3N2和H1N2，其中又包括不同的基因型：古典豬H1N1、類禽H1N1、類人H3N2、基因重配的H3N2以及多基因型的H1N2亞型。在整個(gè)流感病毒的遺傳進(jìn)化和生態(tài)分布中都占有重要地位，感染豬的主要是A型流感病毒，特別是對(duì)人類健康具有潛在的威脅。因?yàn)樨i呼吸道上皮同時(shí)具有兩種類型流感病毒受體，所以人和禽流感病毒都可以感染豬，豬是禽、人、豬流感毒基因重組的“混合器”[3]。

山東是養(yǎng)豬大省，但山東養(yǎng)豬場(chǎng)規(guī)模偏小，標(biāo)準(zhǔn)化養(yǎng)豬場(chǎng)相對(duì)較少，家庭式小型養(yǎng)豬場(chǎng)和散養(yǎng)戶眾多，飼養(yǎng)管理水平普遍較低。近年來(lái)無(wú)論是規(guī)?；B(yǎng)豬場(chǎng)還是散養(yǎng)戶，豬流感時(shí)有發(fā)生，給山東養(yǎng)豬業(yè)造成一定的損失[4]。本實(shí)驗(yàn)利用山東不同地區(qū)不同豬群的血樣在山東省畜禽疫病防治與繁育重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室經(jīng)血清處理、試劑盒檢測(cè)、酶標(biāo)儀讀數(shù)計(jì)算出采集樣品的抗體陽(yáng)性率，最終判斷豬場(chǎng)不同豬群感染豬流感的狀況，為早日治療豬流感和預(yù)防其暴發(fā)流行提供了重要依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料與方法

1.1.1 病料來(lái)源

山東規(guī)?；B(yǎng)豬場(chǎng)的不同日齡豬群中送檢和采集的1573份血樣，經(jīng)5000rmp離心15min，取上血清制備樣品，編號(hào)待檢。

1.1.2 試劑

樣品稀釋緩沖液、底物液、（10×）濃縮洗滌液、酶標(biāo)抗體、終止液、陽(yáng)性對(duì)照、陰性對(duì)照、蒸餾水等試劑購(gòu)自美國(guó)IDEXX公司。

1.1.3 儀器設(shè)備

單道和多道移液槍、各型號(hào)的滅菌槍頭、配置有650nm濾光片的96孔酶標(biāo)儀、樣品稀釋管、加樣槽、冰箱、烤箱、高壓滅菌鍋、恒溫孵育箱、一次性口罩手套等。

1.1.4 試驗(yàn)方法

酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)

1.1.5 計(jì)算結(jié)果

2 結(jié)果

2.1 ELISA試驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果

對(duì)1573份規(guī)?；i場(chǎng)血清豬流感抗體水平進(jìn)行ELISA檢測(cè)，共檢測(cè)出陽(yáng)性樣品524份， H1N1亞型陽(yáng)性率為33.31%。

2.2 H1N1亞型豬流感不同豬群分布情況

通過(guò)對(duì)不同豬群H1N1亞型豬流感檢測(cè)結(jié)果顯示，在所有的524份陽(yáng)性樣品，育肥豬為484份，占陽(yáng)性樣品比例為69%；保育豬為33份，占陽(yáng)性樣品比例為13.3%；哺乳仔豬為3份，占陽(yáng)性樣品比例為1.94%；種公豬為4份， 占陽(yáng)性樣品比例為3.57%。見表1。

表1不同豬群H1N1豬流感抗體ELISA檢測(cè)結(jié)果

2.3 H1N1亞型豬流感不同季節(jié)分布情況

由表2可見，H1N1亞型豬流感陽(yáng)性率隨季節(jié)變化較大，其中冬季與春季樣品陽(yáng)性率較高，分別為36.44%、34.95%，夏季H1N1亞型豬流感陽(yáng)性率最低為6.34%。

2.4 H1N1亞型豬流感不同地區(qū)分布情況

H1N1亞型豬流感病毒在以下6個(gè)地區(qū)均有發(fā)生，從本次調(diào)查結(jié)果來(lái)看，魯北和魯西北地區(qū)樣品陽(yáng)性率比較高，分別為43.18%、41.20%；其次為魯中地區(qū)，陽(yáng)性率為34.90%；魯西南地區(qū)樣品陽(yáng)性率最低，為6.67%。結(jié)果見表3。

表2 2012—2013年山東地區(qū)規(guī)?；i場(chǎng)H1N1豬流感抗體檢測(cè)結(jié)果季節(jié)分布情況

表3 2012—2013年山東地區(qū)規(guī)?；i場(chǎng)H1N1豬流感抗體檢測(cè)結(jié)果地區(qū)分布情況

3 分析與討論

SIV自1918年美國(guó)首次報(bào)道， 至今在豬群中流行已近百年。豬在禽流感病毒“禽-豬-人”種間傳播中充當(dāng)中間宿主而備受關(guān)注。從本次調(diào)查來(lái)看山東規(guī)?；i場(chǎng)SIV抗體陽(yáng)性率為33.31%，陽(yáng)性樣品不同地區(qū)均有分布，說(shuō)明在山東地區(qū)H1N1亞型豬流感病毒還普遍存在，豬場(chǎng)普遍存在SIV感染，且豬流感在山東地區(qū)的分布不均，采取科學(xué)有效的防控措施對(duì)于控制豬流感在山東的擴(kuò)散具有重要意義。

從不同豬群H1N1豬流感抗體檢測(cè)結(jié)果來(lái)看，育肥豬的陽(yáng)性率最高，其次為保育豬。可以看出日常飼養(yǎng)管理對(duì)豬流感的流行有一定影響，高密度、多應(yīng)激的集約化養(yǎng)豬和惡劣的養(yǎng)殖環(huán)境以及不完善的防疫及管理制度可能是致使本病發(fā)生。平時(shí)加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，嚴(yán)格做好消毒免疫工作對(duì)豬流感的治療與防控具有重要意義，制定科學(xué)規(guī)范的飼養(yǎng)管理模式，從而使豬流感得到有效控制。

本次研究的樣品采集時(shí)間為2012年2月至2013年5月，從檢測(cè)結(jié)果可以看出豬流感病毒陽(yáng)性率隨季節(jié)變化較大， 在天氣寒冷或天氣變化頻繁的季節(jié)發(fā)病率也相應(yīng)提高， 在冬春季節(jié)采集的樣品中，感染豬流感病毒的病豬比較多，陽(yáng)性率也較高，這說(shuō)明在季節(jié)交替的時(shí)候應(yīng)加強(qiáng)飼養(yǎng)管理和對(duì)豬群的監(jiān)控， 并做好應(yīng)對(duì)惡劣天氣的準(zhǔn)備。

李海燕等早在1993年就分離到了大量經(jīng)典型H1N1 SIV。從黑龍江、安徽、山東、河南、江蘇、浙江、福建等省豬群中分離到H1N1 及其他亞型SIV；從我國(guó)東北、華南、華東、華中、華北地區(qū)部分豬群中共分離到H3N2 亞型、H1 亞型及多株其他亞型SIV。所調(diào)查豬群體內(nèi)均存在H1N1流感病毒抗體，證明我國(guó)豬群中H1N1亞型豬流感的污染相當(dāng)普遍[5]。鄢明華等對(duì)2002年至2005年天津10個(gè)區(qū)縣44家養(yǎng)豬場(chǎng)進(jìn)行了Hl和H3亞型豬流感病毒抗體檢測(cè)，結(jié)果75%的被調(diào)查豬場(chǎng)呈抗體檢測(cè)結(jié)果陽(yáng)性[6]。韓慶功，張智勇，喬傳玲于2006-2007年采集河南省部分地區(qū)豬群139份血清樣品進(jìn)行抗原同步檢測(cè)得出豬群中HI亞型SIV抗體陽(yáng)性率為43.17%[7]。

豬流感是世界上最常見的豬傳染病之一，傳播迅速，常引起急性呼吸道疾病暴發(fā)。其典型的臨床癥狀為流涕、咳嗽和呼吸困難，伴有發(fā)熱、厭食和消瘦等癥狀。由于豬在新型流感病毒的產(chǎn)生上可扮演“混合器”的角色，既可感染人流感病毒，又可感染禽流感病毒，兩種或三種不同的流感病毒感染豬經(jīng)過(guò)基因重排或適應(yīng)，可能對(duì)人類造成較大的危害[8]，因此，進(jìn)行豬流感的檢測(cè)，尤其豬流感病毒的分子流行病學(xué)調(diào)查與研究，無(wú)論對(duì)動(dòng)物流感還是人間流感的防控具有重要指導(dǎo)意義。

[1] 萬(wàn)遂如. 豬流感的防控對(duì)策[J].養(yǎng)豬，2012，65（6）：113-115.

[2] 李海燕，于康震，辛?xí)怨?，?部分省市豬群豬流感的血清學(xué)調(diào)查及豬流感病毒的分離與鑒定[J].動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2003，24（3）：67-72.

[3] 陳義祥，蒙雪瓊.豬流感病毒在世界范圍內(nèi)的流行情況及公共衛(wèi)生意義[J].微生物學(xué)通報(bào)，2008，35（4）：0582-0588.

[4] 陳靜，馬慧玲，田夫林，等.山東省豬流行性感冒血清學(xué)調(diào)查[J].中國(guó)獸醫(yī)雜志，2009，45（7）：54-55.

[5] 李海燕，李雁冰，于康震，等.豬流感病毒的分離與鑒定[J].中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2002，24（1）：12-17.

[6] 鄢明華，李秀麗，王英珍，等.天津地區(qū)豬流感血清學(xué)調(diào)查[J].動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2006，27（10）：92-95.

[7] 韓慶功，張智勇，喬傳玲.河南省部分地區(qū)豬流感血清學(xué)調(diào)查[J].河南畜牧獸醫(yī)（綜合版），2009，30（7）：23-24.

[8] 顧春英，張宏偉，曹廣文. 2009年新型甲型H1N1流感病毒進(jìn)化過(guò)程中豬作為宿主及“混合器”的作用[J].第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)，2009，30（6）：605-609.

Serological investigation of swine infuenza H1N1 subtype in large-scale swine farms of Shandong Province

Huang Bingzheng1，2，Sun Wenbo2，3，Yin Bin2，Du Yijun2，3，Li Jun2，3，Wu Jiaqiang2，3，Yu Jiang2，Zhou Shun1
（1.College Of Animal Science And Technology of Qingdao Agricultural University，Qingdao 266109；2.Shandong Key Laboratory of Animal Disease Control and Breeding，Jinan 250100；3.Institute of Animal Science and Veterinary Medicine，Shandong Academy of Agricultural Sciences，Jinan 250100）

During February，2012 to May，2013， 1573 serum samples from different swine herds in Shandong province were tested for swine H1N1 subtype antibodies by ELISA. resulting in 524 positive samples with a positive rate of 33.31%.This research presented signifcant information of swine H1N1 subtype epidemiology in large-scale swine farms and the surrounding areas in Shandong province，and provided practical guidance for the prevention and treatment of swine infuenza as well.

Swine infuenza；H1N1subtype；Serological investigation

S858.28

：B

：1005-944X（2014）06-0055-04

國(guó)家自然科學(xué)基金31200123；山東省博士基金B(yǎng)s 2013sw022；山東省現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系（SDAIT-06-011-07）

周 順