楊群萬培偉周泉勇唐艷強(qiáng)萬明春霍俊宏劉林秀

（1.江西省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所，江西南昌 330200；2.江西生物科技學(xué)院）

江西省部分地區(qū)副豬嗜血桿菌血清學(xué)調(diào)查

楊群1萬培偉2周泉勇1唐艷強(qiáng)1萬明春1霍俊宏1劉林秀1

（1.江西省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所，江西南昌 330200；2.江西生物科技學(xué)院）

為了明確江西省部分地區(qū)豬場的副豬嗜血桿菌感染率，采用副豬嗜血桿菌間接血凝方法對江西不同區(qū)域（贛東、贛南、贛西、贛北、贛中）豬群進(jìn)行血清學(xué)調(diào)查，共提取到278份豬血清樣品，經(jīng)過檢測發(fā)現(xiàn)平均陽性率為33.1%，其范圍從15.0%～45.0%，表明該地區(qū)豬場有副豬嗜血桿菌不同程度的感染。

副豬嗜血桿菌；抗體檢測；血清型

副豬嗜血桿菌(HPS)是豬Glasser's病的病原體，能引起豬的多發(fā)性漿膜炎、關(guān)節(jié)炎和腦膜炎等疾病的發(fā)生[1]。在1910年，德國學(xué)者Glasser首次對發(fā)生在漿液性纖維素性胸膜炎、心包炎和腦膜炎豬的漿液性分泌物中的一種革蘭氏陰性桿菌進(jìn)行了描述，但直到1922年才由Schermer和Ehrlich首次分離到副豬嗜血桿菌。近年來，許多地區(qū)都有該病發(fā)生的報(bào)道，副豬嗜血桿菌引起的疾病已逐漸成為危害世界養(yǎng)豬業(yè)的重要細(xì)菌性疾病之一[2]。隨著我國養(yǎng)豬業(yè)向規(guī)?；图s化方向發(fā)展，副豬嗜血桿菌病在我國的發(fā)生已呈逐年上升趨勢，給我國的養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。國外對HPS流行病學(xué)的調(diào)查表明，HPS病從臨床病豬中的分離率高達(dá)20%左右，而且流行的血清型通常是HPS毒力比較強(qiáng)的血清型，如血清4、5型和13型等。在國內(nèi)，蔡旭旺等[3]對該病在我國的流行病學(xué)研究顯示，優(yōu)勢血清型為血清4型、5型、12型和13型。本試驗(yàn)應(yīng)用我國流行的副豬嗜血桿菌優(yōu)勢菌株4型、5型、l2型和13型，制備間接血凝診斷抗原，對江西省贛東、贛西、贛南、贛北、贛中五個(gè)不同地區(qū)未免疫接種HPS疫苗豬場的278份豬血清進(jìn)行抗體檢測，以明確該地區(qū)副豬嗜血桿菌病的流行情況。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 樣品來源。試驗(yàn)檢測的血清是2011年1月至2011年8月期間，江西省贛東、贛西、贛南、贛北、贛中五個(gè)不同地區(qū)的一些豬場采樣的血清樣品，共278份。

1.1.2 副豬嗜血桿菌檢測試劑盒。正向間接血凝抗體檢測試劑盒由中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所提供，是用副豬嗜血桿菌抗原致敏經(jīng)戊二醛處理的綿羊紅細(xì)胞制備成間接血凝試驗(yàn)。

1.1.3 儀器。試驗(yàn)所用的儀器有5～100uL微量移液器、微量振蕩器、電熱恒溫箱、96孔“V”型微量有機(jī)玻璃反應(yīng)板等。

1.2 方法

1.2.1 檢測方法。將稀釋液滴于V型反應(yīng)板各孔中，每孔25uL。取被檢血清25uL于第1孔中，與稀釋液混合后吸25uL加于第2孔，依次作倍比稀釋至第4孔。每孔加抗原25uL，每孔板上不論檢測幾份樣品，均應(yīng)設(shè)陽性和陰性血清對照，對照均加8孔。加完后將反應(yīng)板置微量震蕩器上震蕩1～2 min，直至診斷液中的紅細(xì)胞分布均勻，從振蕩器上取下反應(yīng)板，蓋上一塊與反應(yīng)板大小相近的玻璃板，置37℃2～3h后觀察結(jié)果。

1.2.2 結(jié)果判定。判定標(biāo)準(zhǔn)：“++++”，紅細(xì)胞全部凝集，形成一層均勻膜，布滿整個(gè)孔底。“+++”，紅細(xì)胞在孔底形成一層薄膜，面積比前者稍小?！?+”，紅細(xì)胞在孔底形成薄膜凝集，邊緣松散或呈鋸齒狀。“+”，紅細(xì)胞在孔底呈稀薄、散在、少量凝集，孔底有小圓點(diǎn)。“±”，紅細(xì)胞沉于孔底，但周圍不光滑或中心有空斑。“-”，紅細(xì)胞完全沉于孔底，呈光滑的圓點(diǎn)。出現(xiàn)“++”，的血清最高稀釋倍數(shù)即為該血清的血凝效價(jià)。在陽性對照血清滴度不低于1∶128(第7

孔)，陰性對照血清除第1孔允許存在前帶現(xiàn)象(+)外，其余各孔均為(一)，稀釋液對照為(一)的前提下，對被檢血清進(jìn)行判定，否則應(yīng)重試。被檢血清判定標(biāo)準(zhǔn)，血清效價(jià)≥1∶8(++)或以上者判為陽性，效價(jià)≤1∶4者判為陰性，介于二者之間判為可疑，應(yīng)重新檢測。

2 結(jié)果與分析

通過對江西省不同區(qū)域（贛東、贛南、贛西、贛北、贛中）豬群進(jìn)行血清學(xué)調(diào)查，結(jié)果如表1。

表1 抗體檢測結(jié)果

由表1可以看出，在全部檢測的278份血清樣品中，HPS的平均陽性率（感染率）為33.1%，由于所采樣的豬群都未進(jìn)行過副豬嗜血桿菌疫苗免疫，所以，檢測結(jié)果表明在該地區(qū)較多豬場存在著該細(xì)菌的感染。贛中與贛西豬群中HPS的陽性率分別為41.1%（32/78）、45.0%（27/60），明顯高于其他地區(qū)，都在40%以上；而贛東與贛北豬群中HPS的陽性率分別為20.0%（8／40）、15.0%（6/40），兩者陽性率較低，都在20%以下。贛中與贛西地區(qū)是江西省生豬調(diào)出大縣聚集區(qū)，也是養(yǎng)殖密度非常高的區(qū)域；而贛東與贛北這些區(qū)域的養(yǎng)殖量較少，養(yǎng)殖密度也較小。這表明養(yǎng)殖密度大小與感染程度的高低有一定的關(guān)系，即養(yǎng)殖密度與感染率呈正相關(guān)。

3 小結(jié)與討論

對某一地區(qū)進(jìn)行副豬嗜血桿菌病原的流行病學(xué)調(diào)查，是防治受害豬群中副豬嗜血桿菌病發(fā)生的關(guān)鍵[4]。本調(diào)查通過對江西省部分地區(qū)的一些豬場進(jìn)行血清檢測，從而了解和掌握該省副豬嗜血桿菌病的流行情況，為有關(guān)部門進(jìn)行副豬嗜血桿菌病的防控提供一些參考。

本次調(diào)查豬群血清中HPS的平均陽性率（感染率）為33.1%，這比趙萍等[5]檢測的江西豬群血清陽性率44%結(jié)果偏低，這可能與所采樣本的大小、豬群類別、采樣季節(jié)及隨機(jī)抽樣誤差等因素有關(guān)。從部分豬群中HPS的檢測結(jié)果可以看出，養(yǎng)殖密度與感染率呈正相關(guān)，由此也提示在防控副豬嗜血桿菌病方面，降低豬群飼養(yǎng)密度也是一個(gè)重要的措施。

血清學(xué)檢查只能作為豬群是否感染過副嗜血桿菌的判斷依據(jù)，而不能作為診斷該病的依據(jù)。在臨床診斷上，除了要觀察豬群的流行病學(xué)、臨床癥狀、主要病理變化以及作血清學(xué)檢測外，還需要借助細(xì)菌培養(yǎng)或聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)技術(shù)進(jìn)行確診。

研究發(fā)現(xiàn)，仔豬在感染副豬嗜血桿菌之后，使用抗生素?zé)o效，或開始有效但后來無效，或有一定效果但易復(fù)發(fā)[6]，這表明副豬嗜血桿菌極易產(chǎn)生耐藥性。在使用疫苗預(yù)防副豬嗜血桿菌病時(shí)，要注意其血清型和基因多樣性。不同的豬群要選擇不同的理想疫苗，這主要取決于目標(biāo)豬群群體中的病原流行病學(xué)[7]。

研究發(fā)現(xiàn)，副豬嗜血桿菌病多發(fā)于秋冬季的4～7周齡保育豬，并且南方地區(qū)發(fā)病率明顯高于北方地區(qū)，這或許會(huì)為豬場預(yù)防本病提供一定的幫助[8]。因此，在仔豬保育階段使用疫苗免疫，同時(shí)配合良好的飼養(yǎng)管理措施及減少或排除PRRSV及其它病原體，就能達(dá)到有效防控副豬嗜血桿菌病的目的。

本次調(diào)查未對被采樣豬只的日齡進(jìn)行劃分和統(tǒng)計(jì)分析，也未對不同季節(jié)采樣的檢測結(jié)果進(jìn)行比較，這方面的工作有待日后進(jìn)一步研究完善。

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[3]蔡旭旺，劉正飛，陳煥春，等.副豬嗜血桿菌的分離培養(yǎng)和血清型鑒定[J].華中農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2005，24(1)：55～58.

[4]馮小明，薛慧文，儲(chǔ)岳峰，等.四川省部分地區(qū)副豬嗜血桿菌血清學(xué)調(diào)查[J].貴州農(nóng)業(yè)科學(xué)，2009，37(8)：135～136.

[5]趙萍，賀英，儲(chǔ)岳峰，等.江西省部分豬場副豬嗜血桿菌病血清學(xué)調(diào)查[J].動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2009，30(12)：107～109.

[6]季芳，宋長緒，楊增岐.副豬嗜血桿菌病的研究進(jìn)展[J].廣東畜牧科技，2004，29(1)：19～22.

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[8]尹秀鳳，王艷，姜平.我國部分地區(qū)副豬嗜血桿菌病的流行病學(xué)調(diào)查[J].畜牧與獸醫(yī)，2007，39：（6）11～13.

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